Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Ферменты».

2. Вводное слово преподавателя.

Альфа-амилаза (диастаза) – фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов (крахмала, гликогена, амилозы и других продуктов, содержащих три и более остатков глюкозы) до декстринов и мальтозы. Наиболее богаты этим ферментом поджелудочная и слюнные железы. Альфа-амилаза секретируется в кровь из этих органов. Кроме того, фермент содержится в фаллопиевых трубах, кишечнике, печени, почках, легких, жировой ткани. Плазма крови человека содержит альфа-амилазу панкреатическую (Р) и слюнную (S). В каждом из этих типов амилаз имеется несколько изоформ. С мочой выделяется в основном Р-амилаза, что обусловливает большую информативность определения активности альфа-амилазы в моче как теста оценки функционального состояния поджелудочной железы. Полагают, что 65% амилазной активности мочи обусловлено панкреатической амилазой; в то время, как 60% амилолитической активности сыворотки обеспечивается амилазой слюнных желез. Этим объясняется то обстоятельство, что при остром панкреатите именно Р-амилаза увеличивает свою активность в сыворотке крови (до 89%) и особенно в моче (92%) без изменения показателей активности амилазы слюнных желез в этих биологических жидкостях.

Количественное определение диастазы мочи применяется в клинике в качестве вспомогательного средства для диагностики поражений поджелудочной железы. О количестве фермента судят по производимому им действию. За единицу любого фермента принимают то его количество, которое обеспечивает превращение 1 мкмоль субстрата (уменьшение его количества) или образование 1 мкмоль продукта реакции в 1 минуту при заданных условиях.

2. Указания к занятию:

1. Внимательно изучите инструкцию.

2. Приготовьте рабочие растворы для биохимического исследования активности α-амилазы в биологических жидкостях.

3. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

4. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, с приборами.

5. При работе с пипетками используйте резиновую грушу с переходником. Работайте в перчатках!

3. Практическая часть.

1. Приготовление рабочих растворов.

1. Буфер – субстрат.

Ход приготовления. Из набора реактивов во флакон № 2 (цветной крахмальный субстрат) отмерить точно 5,0 мл реактива № 1 (буфер) и 45 мл дистиллированной воды. Закрыть флакон, взболтать до образования однородной суспензии без комков. Затем поместить реактив на 30 минут в термостат при 37°С для завершения набухания субстрата. Хорошо перемешанный реактив не должен забивать пипетку.

Стабильность реактива в закрытом флаконе не менее 7 дней при комнатной температуре и месяца при (+2° – +8°)°С.