И Н С Т Р У К Ц И Я

по выполнению практической работы № 45 по теме

«Обмен липидов. Определение количества α-холестерола в сыворотке крови».

Цели занятия:

1. Закрепить теоретические знания по теме «Обмен липидов».

2. Закрепить навыки и умения в приготовлении растворов и реактивов.

3. Провести биохимическое исследование – определение количества α-холестерола в сыворотке крови.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Анаболические и катаболические процессы липидного обмена.

2. Роль лабораторной диагностики в исследовании липидного обмена пациента.

3. Строение, состав и характеристику липопротеидов.

4. Метаболизм липопротеидов, схему образования и транспорта липопротеидных частиц.

5. Риск-факторы в развитии атерсклероза. Коэффициент атерогенности.

6. Липидозы.

7. Технику приготовления опытной, калибровочной и холостой проб.

8. Технику приготовления растворов и реактивов.

9. Технику центрифугирования и инкубации проб.

10. Технику работы на приборах и меры предосторожности в работе.

Учащийся должен уметь:

1. Работать с химической посудой, пипетками, дозатором.

2. Работать с набором реактивов.

3. Работать с термостатом, спектрофотометром.

4. Приготовить рабочие реактивы, пользуясь набором реактивов.

5. Приготовить опытную, стандартную, контрольную пробы для определения биохимического показателя по предложенной методике.

6. Дать начальную интерпретацию полученному результату исследования.

Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Обмен липидов».

2. Вводное слово преподавателя.

Липидно-белковые комплексы обычно именуются липопротеинами. Липопротеины – своеобразные шарики, глобулы, внутри которых находится жировая капля, ядро, сформированное неполярными соединениями, в основном, триацилглицеридами и эфирами холестерола, отграниченное от воды поверхностным слоем из белка, фосфолипидов и свободного холестерола. ЛПВП – самые плотные липидно-белковые комплексы, поскольку содержание белка в них составляет около 50% от массы частиц. Их липидный компонент наполовину состоит из фосфолипидов, наполовину – из холестерола, преимущественно эфиросвязанного. ЛПВП также постоянно образуются в печени и частично в кишечнике, а также в плазме крови в результате «деградации» ЛПОНП. Если ЛПНП и ЛПОНП доставляют холестерин из печени в другие ткани, в том числе сосудистую стенку, то ЛПВП переносят холестерин из мембран клеток (прежде всего, сосудистой стенки) в печень, где он идёт на образование желчных кислот. В соответствии с таким участием в обмене холестерола ЛПОНП, их «ремнанты» и сами ЛПНП называют атерогенными, а ЛПВП – антиатерогенными липопротеидами. Под атерогенностью понимается способность липидно-белковых комплексов передавать в ткани содержащийся в липопротеидах свободный холестерол.

Установлено, что в структуру липидно-белковых комплексов входят особые белки – апопротеины, постоянно вырабатываемые печенью и частично тонким кишечником, которые не только соединяются с отдельными липидами в строго определённом отношении, но и обусловливают сродство с рецептора-ми (выполняющими функцию лигандов при взаимодействии с ними липопротеидов), а также управляют деятельностью многих ферментов, регулируя активность липопротеинлипазы и лецитинхолестеролацилтрансферазы, печёночной триацилглицеринлипазы. ЛПВП конкурируют за рецепторы мембран клеток с ЛПНП, тем самым, противодействуя утилизации атерогенных липопротеидов. Поскольку поверхностный монослой ЛПВП содержит большое количество фосфолипидов в месте контакта частицы с наружной мембраной эндотелиальной, гладкомышечной и любой другой клетки, создаются благоприятные условия для перемещения на ЛПВП избытка свободного холестерола. Однако последний задерживается в поверхностном монослое ЛПВП очень не-продолжительное время, поскольку при участии фермента лецитинхолестерол-ацилтрансферазы подвергается этерификации. Образованный этерифицирован-ный холестерол является неполярным веществом, перемещается во внутреннюю липидную фазу, и процесс повторяется. Отсюда, чем выше активность фермента лецитинхолестеролацилтрансферазы, тем эффективнее антиатеро-генное действие ЛПВП, которые рассматриваются как активатор фермента ле-цитинхолестеролацилтрансферазы.

При нарушении баланса межу процессами притока холестерола в сосудистую стенку и их оттоком из неё могут быть созданы условия для формирования липоидоза, наиболее известное проявление которого и есть атеросклероз.

Определение α-холестерола в сыворотке (плазме) крови имеет большое значение для оценки холестеролового коэффициента атерогенности и его использования для диагностики атипично проявляющегося атеросклероза.