- •Правила хранения химических реактивов
- •Площадь
- •3.9 Принципы оценки результатов лабораторных исследований
- •Подвижная фаза
- •Иммуноэлектрофорез
- •Электрофорез с последующей иммунофиксацией
- •4.4.1 Методы световой микроскопии
- •4.4.2 Современные микроскопические приборы
- •Инвертированные микроскопы проходящего света
- •Люминесцентный микроскоп
- •4.4.3 Уход за микроскопом
- •Витамин В6
- •Кофеин
- •Соответствие единиц
в область носителя с рН, равным их изоэлектрической точке, и теряют подвижность: каждый белок фокусируется на среде со своей изоэлектрической точкой. Таким образом, ИЭФ использует зависимость знака и величины заряда молекулы белка от рН окружающего раствора. Метод обладает очень высокой разрешающей способностью: удается надежно разделить 2 белка, отличающиеся по изоэлектрической точке всего на 0,02 ед. рН.
Иммуноэлектрофорез
В данную группу объединены методы, конечный этап разделения которых основан на специфической реакции связывания антигена пробы с антителом добавляемой в носитель сыворотки, что позволяет определить состав исходной смеси антигенов. Существует несколько десятков модификаций иммуноэлектрофореза. Рассмотрим некоторые из них.
Классический иммуноэлектрофорез. На 1-м этапе производят разде-
ление белков в забуференном агаровом или агарозном геле, а затем латерально, параллельно разделенным компонентам прорезают щели, которые заполняют антисывороткой. Выдерживают в течение некоторого времени для диффузии компонентов (обычно ночь). Взаимодействие антигенантитело обнаруживается по дугам преципитации (рисунок 4.14). Метод позволяет выявить антигенный состав сложной смеси белков и идентифицировать отдельные компоненты смеси с помощью моноспецифических антисывороток. В клинике используется для типирования парапротеинов сыворотки и выявления белков Бенс-Джонса. Недостаток метода — отсутствие возможности количественного анализа.
+ |
|
- |
Гель |
|
АГ3 |
АГ2 |
АГ1 |
Преципитациия
Антитела
Рисунок 4.14 — Схема классического варианта иммуноэлектрофореза
Примечание. Процесс включает следующие стадии: 1) электрофоретическое разделение белков (антигенов) в геле; 2) внесение иммунной сыворотки в канавку, сформированную в геле; 3) диффундирование АГ и АТ в геле навстречу друг другу, в результате чего в месте их взаимодействия (при условии соответствия АГ и АТ) возникают дуги преципитации. Процесс иммунодиффузии продолжается около 24 часов во влажной камере; 4) промывка пластины геля для удаления белков, которые не участвовали в преципитации; 5) сушка и окрашивание образцов специальными красителями. Результат оценивают по количеству, положению и форме зон преципитации.
108