Применение электрофореза в клинике

Основные клинические ситуации, в которых рекомендуется электрофорез белков сыворотки:

• Абсолютное показание, необходимое для установления диагноза (никакая другая процедура не обеспечит получение эквивалентной информации также быстро и доступно) – парапротеинемии, гемоглобинопатии, агаммаглоблинемии.

• Клинически полезное в сочетании с другими исследованиями – заболевания печени, нефротический синдром, злокачественные заболевания, коллагенозы.

• Наблюдение и лечение заболевания, при которых происходят существенные нарушения в составе белков плазмы (необходимо использовать постоянно одну и ту же методику).

• Скрининг. При популяционных обследованиях на выявление аномальных белков или дефицита отдельных белков плазмы.

N.B! Метод должен обеспечить разделение пяти основных фракций: альбумина, α1-, α2-, β- и γ-глобулина, а также небольшой зоны преальбумина.

4. Денситометр используют для определения концентрации клеток (бактериальных, дрожжевых) в процессе ферментации, при определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, идентификации микроорганизмов при помощи различных тест-систем, для измерения абсорбции при фиксированной длине волны, а также для количественной оценки концентрации окрашенных растворов, абсорбирующих зеленый свет.

Принцип работы прибора основан на измерении оптической плотности с последующим цифровым представлением результатов в виде единиц Мак-Фарланда.

Денситометр DEN-1 предназначен для измерения мутности клеточных суспензий в пределах диапазона 0.3 - 5.0 единиц Мак-Фарланда (100x106 - 150x107 клетка/мл). Возможности прибора предусматривают измерение мутности суспензий и в более широких пределах (5.0 - 15.0 единиц Мак-Фарланда), но следует учитывать, что при этом возрастает и ошибка измерений.

Денситометр DEN-1 используют для определения концентрации клеток (бактериальных, дрожжевых) в процессе ферментации, при определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, идентификации микроорганизмов при помощи различных тест-систем, для измерения абсор­бции при фиксированной длине волны, а также для количественной оценки концентрации окрашенных растворов, абсорбирующих зеленый свет.

Принцип работы прибора основан на измерении оптической плотности с последующим цифровым представлением результатов в виде единиц Мак-Фарланда.

Прибор откалиброван изготовителем и сохраняет данные калибровки. При необходимости, возможно выполнение калибровки по 2-6 точкам в пре­делах диапазона 0.5 - 5.0 единиц Мак-Фарланда. Для выполнения калибровки можно использовать как коммерческие стандарты (напр. bioMerieux, Lаchema и т.д.), так и клеточные суспензии, приготовленные непосредственно в лаборатории.

Применение денситометров для определения концентрации микробных клеток супернатанта в пробирках в течении центрифугирования. Показатель мутности измеряется в Мак-Фарланд единицах.

Электрофорез

Процесс разделения заряженных частиц в электрическом поле. Явление электрофореза обнаружено Рейсом в 1809 г. Применение в клинико-диагностических лабораториях – с 50-х г. XX в.

Теоретические основы (на примере белка): молекулы белка имеют положительно и отрицательно заряженные группы. Суммарный заряд молекул зависит от рН буфера, в котором растворен белок. При щелочном рН белки выступают как анионы, а в кислой среде - каккатионы (движутся, соответственно, к аноду или катоду). Каждый белок характеризуется определенным значением рН, при котором он не мигрирует, поскольку при этом значении сбалансированы противоположно заряженные группы - изоэлектрическая точка. Изменяя значения рН буфера можно производить разделение белков в электрическом поле.

Применение: разделение белков, липопротеинов, аминокислот (высоковольтный э/ф).

Носители, используемые для электрофореза

Среда-носитель может оказывать влияние на условия электрофореза, изменяя эффективность разделения, так как имеет собственный заряд (процесс электроэндосмоса).

В клинических лабораториях используют 2 типа носителей:

• Ацетатцеллюлоза, агар, агароза. Это инертные материалы с порами больших размеров, которые не препятствуют миграции частиц. Степень электроэндосмоса разная, выбирают в соответствии с условиями проводимого разделения.

• Крахмальные и акриламидные гели. Эти носители содержат поры, сравнимые по размерам с размерами белковых молекул, что обеспечивает комбинирование эффекта молекулярного сита с электрофоретическим разделением, основанным на распределении заряда. Электрофореграммы, нолученные на таких носителях содержат больше фракций, чем на ацетатцеллюлозе, агаре и агарозе.