• 2. Амплификация -многократное копирование определённого участка днк (участка гена) при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro).

• ПЦР , в зависимости от условий, позволяет синтезировать сравнительно небольшие последовательности ДНК – от 3000 до 40000 п.н.

• Например, геном человека состоит примерно из 3 млрд. пар нуклеотидов.

• 3. Электрофорез амплифицированного участка в геле (от «-» к «+»).Окрашивание препарата этидия бромидом

и анализ типа внутригенной перестройки, либо ее исключение при визуализации в ультрафиолетовом свете.

• В некоторых вариантах методов возможна автоматическая регистрация результатов.

Разновидности ПЦР:

• «Вложенная» ПЦР (Nested PCR) — применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции.

• «Инвертированная» ПЦР (Inverse PCR) — используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности.

• ПЦР с обратной транскрипцией(Reverse Transcription PCR, RT-PCR) — используется для амплификации, выделения или идентификации известной последовательности из библиотеки РНК.

• Асимметричная ПЦР ( Asymmetric PCR) — проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК.

• Количественная ПЦР(Quantitative PCR, Q-PCR) — используется для быстрого измерения количества определенной ДНК, кДНК или РНК в пробы.

Количественная ПЦР в реальном времени (Quantitative real-time PCR

III. Биохимический метод.

• Применяется для оценки биохимического фенотипа: область протеомики, исследования структуры различных групп биологически активных веществ (белков, углеводов, липидов, метаболитов) и продуктов клеточного метаболизма, а также их взаимодействия (метаболомика).

• 1 этап: применяются ориентировочные биохимические тесты, являющиеся основой массового скрининга всех новорожденных (ФКУ, ВГ, АГС, Гал, МВ), либо селективного "просеивания" в группах риска.

в медико-генетических консультациях широко применяется большая группа селективных тестов для раннего выявления наследственной патологии обмена. К ним относятся:

• - исследование плотности, прозрачности, реакции и цвета мочи:

• снижение плотности утренней мочи взятой натощак до 1006 и ниже наблюдается при несахарном диабете,

• кислая реакция мочи – при аминоацидопатиях,

• изменение прозрачности, цвета:

• черно-коричневая окраска мочи при добавлении щелочи имеет место при алкаптонурии,

• молочно-белый – при липурии,

• красный – при порфирии, гемоглобинурии,

• коричневый – при метгемоглобинурии, порфирии, билирубинурии;

• - проба Селиванова: выявляет избыток фруктозы (при фруктоземии);

• - тест на кетоновые кислоты: выявление алкаптонурии, фенилкетонурии, болезни «мочи с запахом кленового сиропа», гистидинемии, болезни «сушеного хмеля»;

• - иодозидная проба на цистин, гомоцистин: при гомоцистинурии, цистинурии, болезни Вильсона-Коновалова, синдрома де Тони-Дебре-Фанкони;

• - проба Пантуса на ионы хлора: при гипо- гиперальдостеронизме, тубулопатиях;

• - тест на пролин: при б. Вильсона-Коновалова, синдромах Жозефа,

де Тони-Дебре-Фанкони;

• - проба Бенедикта на сахара, фенольные кетокислоты: при галактоземии, с-ме де Тони-Дебре-Фанкони, цистинозе, врожденной непереносимости лактозы, почечном и сахарном диабете;

• - проба Гайнеса аналогична предыдущей, но более информативна в отношении сахаров;

• - тест с толуидиновым синим на выявление гликозоаминогликан при мукополисахаридозах;

• - проба Сулковича на ионы кальция:

при идиопатической гиперкальциемии;

• - тест Милона на тирозин: при тирозинозе, синдроме Хартнапа, галактоземии, б.Вильсона-Коновалова, цистинозе;

• - проба Легаля на кетоновые тела: при сахарном и почечном диабете, гликогенозах;

• - проба Альтгаузена: при гликогенозах

• - проба на медь: при болезни Вильсона-Коновалова.