31Стандартные сыворотки для определения группы крови (источники, требования, титр).

Техника получения сывороток и определения титра заключается в следующем. Для их заготовки используют донорскую кровь. После отстаивания крови, сливания и дефибриллирования плазмы необходимо определить титр (разведение), т. е. активность изогемагглютинирующих сывороток. С этой целью берется ряд центрифужных пробирок, в которых разводится сыворотка. Вначале в чистые пробирки добавляется по 1 мл физиологического раствора поваренной соли. В 1-ю пробирку с физиологическим раствором добавляют 1 мл испытуемой сыворотки, жидкости смешиваются, соотношение жидкостей в 1-й пробирке 1:1. Далее 1 мл смеси из 1-й пробирки переносится во 2-ю, все это смешивается, получается соотношение 1:2. Затем 1 мл жидкости из 2-й пробирки переносится в 3-ю пробирку, смешивается, получается соотношение 1:4. Таким образом разведение сыворотки продолжают до 1:256.

 Методика определения групп крови

Помещение, где проводится определение группы крови, должно быть светлым, с температурой от 15 до 25 °С.

На следующем этапе производят определение титра разведенной сыворотки. Из каждой пробирки на плоскость наносят по 2 крупные капли. В каждую каплю добавляют иногруппные эритроциты (в соотношении 1 к 10), смешивают, ждут 3—5 минут. Далее определяют последнюю каплю, где произошла агглютинация. Это наибольшее разведение и является титром гемагтлютинирующей сыворотки. Титр не должен быть ниже чем 1:3.

На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными!) по 1-й крупной капле сыворотки О(I), А(II), В(III). Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.

Оценка результатов изогемагглютинации:

при работе с 3-я сыворотками групп О(I), А(II), В(III) возможны 4 комбинации реакций:

1. если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет - это О(I) группа крови;

2. если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(II), а сыворотки О(I) и В(III) дали положительную реакцию, то есть появились зерна - это А(II) группа крови;

3. сыворотка группы В(II) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(I) и А(II) дали положительную - это В(III) группа крови.

4. все 3 сыворотки дали положительные реакции - испытуемая кровь АВ(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(IV) группы.

32Техника определения групп крови с помощью гемоагглютинирующих сывороток.

Используются стандартные сыворотки двух серий групп О(I), А(II), В(III). После их нанесения получается шесть капель, расположенных в два ряда в следующем порядке: О(I), А(II), В(III). Каждая сыворотка наносится своей пипеткой. Исследуемая кровь углами предметного стекла или стеклянными палочками вносится в сыворотку в количестве в десять раз меньшем и тщательно перемешивается. Можно перемешивать кровь с сывороткой одним и тем же углом предметного стекла (или стеклянной палочкой), За ходом реакции, в общей сложности, наблюдают не менее 5-ти минут, периодически покачивая тарелку. В лунки, где к третьей минуте наблюдения произошла агглютинация, вносят по капле физ.раствора и наблюдают еще две минуты. Добавление физиологического раствора не разрушает истинной агглютинации и позволяет отдифференцировать ее от псевдоагглютинации, обусловленной самопроизвольным склеиванием эритроцитов в монетные столбики. Эритроциты группы О(I) не содержат антигенов и в реакцию агглютинации не вступают. Эритроциты группы А(II) не дают агглютинации только с сывороткой своей группы, эритроциты В(III) также не дают агглютинации только с сывороткой своей группы. Если во всех сыворотках произошла агглютинация, то для исключения неспецифической панагглютинации и подтверждения, что это эритроциты IV группы крови, следует дополнительно исследовать их стандартной сывороткой группы АВ (IV). Для этого используется одна сыворотка, исследование проводится с соблюдением всех выше указанных условий. Сыворотка группы АВ(IV) не содержит никаких антител, а поэтому не должна давать агглютинации. (таблица 1). При определении групп крови следует обратить особое внимание на сроки чтения результата - они не должны быть менее 5-ти минут. Так разновидность второй группы крови А(II) дает агглютинации, как правило, раньше чем обычно - к исходу 3-4-ой минуты.