МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА № 1

ТЕМА: Организация, режим работы микробиологической лаборатории. Методы микробиологического исследования. Микроскопический метод диагностики. Микроскопы, их назначение, работа с иммерсией. Морфология бактерий

МОТИВАЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА: выпускники любого факультета медицинского вуза в ряде случаев (возникновение эпидемий в отдалённых районах при отсутствии профильных лабораторий, необходимости срочной предварительной диагностики особо опасных инфекций, которая позволяет своевременно ввести карантин и требовать развёртывания специальной лаборатории и т.д.) должны:

- уметь организовать рабочее место микробиолога;

- выбрать наиболее целесообразное направление исследований для обнаружения идентификации возбудителей инфекционных заболеваний;

- иметь навыки безошибочного выполнения ряда микробиологических и противоэпидемических мероприятий;

- представлять взаимосвязь производимых микробиологических манипуляций с прочими методами обследования больного, отчётливо понимать, что, без прямого обнаружения возбудителя или без выявления ряда доказательных косвенных признаков пребывания последнего в организме, нельзя поставить диагноз инфекционного заболевания, нельзя отличить его от неспецифических (безмикробных) патологических процессов.

Вот почему умение и навыки, приобретённые уже на первом занятии, необходимы для дальнейшего усвоения курса микробиологии, для выполнения в будущем профессиональной работы врача-эпидемиолога, инфекциониста, участкового терапевта и других. Более того, они - основа общей профессиональной грамотности врача любого профиля.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ:

Общая:дать представление

- о структуре микробиологических лабораторий общего и специального профиля;

- об основных объектах, направлениях и методах исследования, которые можно осуществлять в любой лаборатории и тех особенностях, которые крайне важны для лаборатории специального назначения;

- об оборудовании, необходимом для реализации исследований;

- о реактивном и диагностическом обеспечении общего и специального профиля;

- о режиме работы в лаборатории.

Конкретная:

- обучить приготовлению и микроскопическому анализу микропрепарата с помощью иммерсионного объектива и светового микроскопа;

- систематизировать знания обо всех видах микроскопов и их диагностических возможностях;

- освоить технику микроскопического метода.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ И ВВОДНОГО

КОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ:

1. Микробиологическая лаборатория общего и специального назначения:

- специализация лаборатории;

- цели, задачи лабораторий;

- оснащение лаборатории и рабочего места;

- режим работы в лаборатории;

- методы микробиологического лабораторного исследования.

2. Микроскопический метод исследования:

- цели, задачи, диагностические возможности;

- виды микроскопов, их назначение, разрешающая способность;

- ход лучей в световом и тёмнопольном микроскопах с иммерсионной системой и без неё;

- микрометрические приспособления и их назначение.

3. Морфология микроорганизмов:

- понятие, основные морфологические группы бактерий;

- методы изучения морфологии микроорганизмов.

4. Микроскопический анализ препаратов:

- способы подготовительной обработки предметных стёкол;

- приготовление мазков из агаровых и бульонных культур микроорганизмов, жидкого

(кровь) и вязкого (мокрота) материала;

- фиксация (назначение, методы);

- простая окраска;

- определение размеров бактерий.

5. Люминесцентный метод исследования:

- цели, задачи, возможности;

- оснащение метода.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫПОЛНЕНИЮ ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЫ С ПОЛНЫМ РЕГЛАМЕНТОМ ПРОТОКОЛА ЗАНЯТИЯ И ЕГО ОФОРМЛЕНИЕМ

№	Наименование учебного элемента (задания)	Методическое решение	Регламент протокола
1.	Организация и режим работы бактериологической лаборатории	Приложение 1	Записать в протокол, зарисовать схему
2.	Микроскопы: виды, устройство, принцип работы, возможности. Дополнительные устройства к световому микроскопу	Приложение 2, 3	Зарисовать таблицу при самоподготовке
3.	Морфология микроорганизмов. Размеры микроорганизмов, способы их измерения	Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. Воробьева А.А., Быкова А.С.- М., 2003. С.23-26	Зарисовать основные группы бактерий
4.	Микроскопический метод. Подготовка обезжиренных стёкол для приготовления препарата из материала исследования. Фиксация препарата. Окраска его простым способом	Приложение 4-7	Записать этапы исследования. На занятии приготовить микропрепараты, их микроскопировать, зарисовать, изучить демонстрационные препараты
5.	Микроскопия препарата с иммерсией	Приложение 8	Записать при самоподготовке
6.	Правила работы с иммерсионным объективом. Ход лучей в иммерсионном объективе	Приложение 8. Табличный фонд учебной комнаты	Зарисовать на практическом занятии.

Приложение 1

РЕЖИМ РАБОТЫ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ

/Извлечение из санитарных правил СП 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами 111-IУ групп патогенности и гельминтами» Минздрав России. М., 1999/

Работники бактериологической лаборатории должны постоянно помнить при работе с заразным материалом о возможности заразиться и перенести инфект за пределы лаборатории. Поэтому они должны быть особенно внимательны, опрятны и педантичны в работе.

В бактериологических лабораториях нужно соблюдать следующие правила и режим работы:

1. Находиться в помещении бактериологической лаборатории, а тем более работать обязательно в халате, шапочке (косынке), в отдельных случаях в маске и резиновых перчатках.

2. Без надобности переходить из одного помещения лаборатории в другое нельзя. При выходе из лаборатории халат и другую спецодежду следует снимать. Руки обязательно вымыть с мылом.

3. Особо опасные работы проводить в специальных боксах, облучаемых после их проведения бактерицидными лампами.

4. Для работы пользоваться только отведённым местом и оборудованием. Перекладывать заразный материал или предметы, соприкасающиеся с ним, на другое рабочее место (стул, подоконник и т.д.) запрещается.

5. Все лишние предметы не следует держать на рабочем месте. Сумки, тетради, книги должны быть спрятаны в стол или целлофановые мешки.

6. Категорически запрещается курить и принимать пищу в лаборатории.

7. После завершения работы в лаборатории рабочее место и руки дезинфицируются и моются с мылом.

МЕРОПРИЯТИЯ В СЛУЧАЕ АВАРИИ:

При аварии во время работы с инфекционным материалом (бой посуды, разбрызгивание из пипетки и т.д.) необходимо тщательно обеззараживать оборудование и инфицированные предметы. Для этого осуществляются следующие мероприятия:

а) применяют З - 5 % раствор хлорамина или фенола, который заливают в те места, куда попадает заражённый материал, а боковые поверхности мебели инвентаря, приборов, аппаратов и стены обмывают тампоном, смоченным тем же дез. раствором. Обработанные объекты оставляют на 30-40 минут, после чего производят обычную влажную уборку;

б) заразную одежду снимать и замачивать в 1 % растворе хлорамина; обувь обмывать тампоном, обильно пропитанным дез. раствором;

в) открытые участки кожи лица, рук и др. обрабатывать дез. раствором и 70 % этиловым спиртом. При загрязнении слизистых оболочек: рот полоскать либо 3 % раствором соды, либо 0,5 % раствором соляной кислоты или раствором марганцево-кислого калия 1:10000. Глаза промывают раствором борной кислоты и струёй воды, рот прополаскивают 0,05 % раствором марганцево-кислого калия или 0,1 % раствором борной кислоты.

Приложение 2

Основные виды микроскопов

Микроскопили оптическое устройство	Особенность и сущность	Разрешающая способность	Назначение
Световой микроскоп (МБИ - 1,2,3,6,11)	Все объекты рассматриваются в проходящем свете сухим и иммерсионным объективом	Разрешающая способность - 0,4-0,2 мкм. Увеличение при данной длине тубуса равно произведению увеличений объектива и окуляра. Минимальное - 6ЗО (для иммерсионного объектива) и максимальное -1350	Используется для изучения морфологии, структуры, подвижности и тинкториальных свойств микроорганизмов
Люминесцентный микроскоп	Использование ультрафиолетовых лучей и люминесцирующих красителей, способных светиться(флюоресцировать) под УФ - лучами. Позволяет наблюдать микроорганизмы в излучаемом ими свете и цвете	Разрешающая способность - 0.1 мкм. Повышение её связано с использованием коротковолновых ультрафиолетовых лучей. Максимальное увеличение - в 3000 раз. Преимущество- цветное изображение, высокая контрастность, возможность исследовать живые объекты.	Используется не только для изучения морфологии, и тинкториальных свойств, но и для исследования процессов жизнедеятельности микробной клетки.
Электронный микроскоп	Принципдействия и устройства подобен таковым у обычного светового микроскопа. Различия - вместо источника света – источник электроволн(вольфрамоваяпроволока,нагреваемая электротоком, вместооптических линз-электромагнитные).	Разрешающая - способность 0.001 мкм. Первое промежуточное увеличение в 130 раз, от проекционной линзы - в 20 - 200 раз, в целом - 2500-25 000, максимум – в 100 000 раз.	Широко используется для изучения вирусов, мельчайших микроорганизмов. В бактериологии используется для изучения деталей тонкого строения.
Инвертированные микроскопы (тёмнопольный, фазово-контрастный)	Исследования проводят в проходящем свете в светлом или тёмном поле с применением метода фазового контраста. МБИ - 12,13 снабжены собственными столиками-термостатами, кинокамерами. Линзы окуляра и Объектива дают обратное увеличенное изображение.	Позволяет проводить широкий круг микроскопических исследований, визуальное наблюдение, фотографирование, применение светлого и тёмного полей в прямом и отражённом свете, прямое и косое освещение, микроскопирование в поляризованном свете, методом фазовых контрастов, в свете люминесценции.
Стереомикроскоп	Даёт подсвет в прямом и косопроходящем свете	Наиболее пригоден для крупных объектов (грибов)	Изучение колоний, микологических культур.

Приложение 3