Карабинцева Фармацевтическая технология методички / Производство стерильных и асептических лекарственных форм учебно-методическое пособие. 2014

реакционныесмесиинкубируют60минпритемпературе37°С.Если врезультатереакцииполучаетсятвердыйгель,результатназывается положительным, это означает, что концентрация эндотоксина равна или более чувствительности ЛАЛ-реактива. Если гель не образуется – результат отрицательный, и это означает, что концентрация эндотоксинаменеечувствительностиЛАЛ-реактива.Достоинствами этого анализа являются простота проведения, минимум необходимогооборудования,хорошаявоспроизводимостьрезультатов.Недо- статок–невозможностьколичественногоопределенияконцентрации эндотоксинов.

Метод В.

Количественный гель-тромб тест. Для определения концентрации эндотоксина препарат последовательно разводят водой. Исходнаяконцентрацияэндотоксинавпрепаратепостепенноснижается и наконец становится меньше чувствительности ЛАЛ-реактива. Вопытевсеразведения,вкоторыхконцентрацияэндотоксинабольше или равна чувствительности ЛАЛ-реактива, дают твердый гель; разведения, в которых концентрация ниже, дают отрицательные результаты.Наименьшееизразведений,вкоторомполучентвердый гель, называют конечной точкой реакции. Для расчета концентрации эндотоксинов фактор этого разведения умножают на значение чувствительностиЛАЛ-реактива.Точностьопределениясодержания эндотоксина этим методом не очень высокая. Допустимая ошибка метода составляет 50–200 % определенной величины, т. е. реальная концентрация эндотоксинов в препарате может быть вдвое больше или вдвое меньше определенного в анализе значения. Поэтому в ЕвропейскойфармакопееМетодВназываетсяполуколичественным анализом.Несмотрянаэтиограничения,количественныйгель-тромб тест достаточно широко используется в научно-исследовательских работах.

Метод С.

Кинетический турбидиметрический тест. В этом анализе важнымпараметромявляетсяскоростьизмененияоптическойплотности реакционной смеси. Измерения проводятся до момента достижения заранееопределенного(порогового)значенияоптическойплотности. Дляпроведениятакойреакциинеобходимыприборы,вкоторыхвоз-

141

можно одновременно инкубировать реакционные смеси и измерять их оптическую плотность. Измеряемый диапазон концентрации кинетического турбидиметрического метода очень широк: от 0,001 до 100 ЕЭ/мл. Функции измерения выполняет прибор, например, фотометр для микропланшетов, полученные данные обрабатываются с использованием специальных компьютерных программ. Фактически, для проведения анализа используется сложный комплекс, состоящий из спектрофотометра, компьютера с принтером и программного обеспечения. К достоинствам метода можно отнести очень широкий диапазон измерений и высокую чувствительность. Программное обеспечение позволяет автоматизировать процедуру оценки и интерпретации результатов, программа автоматически генерирует протоколы анализа. Однако первоначальное освоение методаипрограммногообеспеченияпредставляетсянесколькоболее сложным делом, чем освоение гель-тромб теста.

Метод D.

Кинетический хромогенный тест. Кинетический хромогенный тест очень похож на турбидиметрический анализ, с той разницей, что для его проведения используется специальный ЛАЛ-реактив с хромогенным субстратом. Измеряется интенсивность окрашивания реакционной смеси. Чем выше концентрация эндотоксина, тем быстрее идет реакция и тем меньше надо времени, чтобы оптическая плотностьдостиглапредопределенногопороговогозначения.Оптическая плотность реакционной смеси измеряется при длине волны 405 нм. Анализ практически всегда проводится на микропланшетах, в этом случае используется спектрофотометр Bio-Tek ELx808 или аналогичный. Для учета и обработки результатов необходимо программное обеспечение. К достоинствам метода можно отнести широкий диапазон измеряемых в анализе концентраций, высокую чувствительность к эндотоксинам, хорошие возможности автоматизации процедуры проведения анализа и обработки результатов.

Метод Е.

Хромогенный тест по конечной точке. Для проведения этого анализа также используется ЛАЛ-реактив с искусственным хромогенным субстратом. Этот субстрат состоит из полипептидной цепочки и хромофора р-нитроанилина (рНА). Структура хромоген-

142

ного субстрата BOC-Leu-Gly-Arg-CONH-Â-NO2. Аминокислотная последовательность полипептида аналогична аминокислотной последовательности коагулогена, предшествующей разрезаемой свертывающимферментомсвязи.Поэтомуактивныйсвертывающий фермент «по ошибке» разрезает эту связь, высвобождая хромофор р-нитроанилин, в результате чего в растворе развивается желтое окрашивание. Реакцию можно принудительно остановить. Это означает, что инкубирование и измерение оптической плотности может быть проведено на разном оборудовании, и для проведения измерения необязательно использование сложных приборов, оснащенных модулем инкубирования. К достоинствам метода можно отнести и простую процедуру оценки результатов. В то же время анализ сложен в проведении и складывается из нескольких этапов, жестко регламентированных по времени и связанных между собой.

Метод F.

Турбидиметрический тест по конечной точке. В этом анализе проводитсяизмерениестепенипомутненияреакционнойсмесипосле инкубирования (рис. 45). Степень помутнения реакционной смеси прямопропорциональнаактивностисвертывающегоферментаисоответственносодержаниюэндотоксинов.Дляоценкистепенипомутненияиспользуютсяфотометрыдлямикропланшетовилипробирок. Измеренияделаютпридлиневолны405нм(350нм).Калибровочная кривая строится по трем–четырем известным концентрациям КСЭ.

Рис. 45. Калибровочная кривая и ее использование для определения концентрации эндотоксинов

143

Измерения возможны в ограниченном диапазоне концентраций эндотоксина.Методнеполучилширокогораспространения,поскольку реакцию невозможно остановить, и проводить такой анализ можно только на приборах, позволяющих одновременно инкубировать реакционные смеси и проводить измерения оптической плотности. Однако в этом случае целесообразнее использовать кинетический турбидиметрический метод (Метод С, см. выше).

МАРКИРОВКА И УПАКОВКА

Нанесение надписи на ампулы производят на полуавтомате (рис. 46). В бункер (7) загружают ампулы и барабаном подачи (8) направляют к офсетному цилиндру, на котором нанесены буквы и цифры в виде углубления в 40–50 мкм. Формный цилиндр (5), вращаясь в ванне с быстровысыхающей краской для глубокой печати, подает ее на офсетный цилиндр. Избыток краски с помощью ракеля

(4)ирегулирующегоустройстваснимаетсясповерхностиофсетного цилиндра и остается в углублениях надписи. При контакте надпись наносится на ампулу, быстро высыхает, и ампулы передаются на упаковку.

На автомате для упаковки ампул вместимостью 5 мл (модель 529) на полимерной пленке при нагревании формируются

Рис. 46. Устройство полуавтомата для маркировки ампул:

1 – корпус; 2 – регулирующее устройство; 3 – ванна; 4 – ракель; 5 – формный цилиндр; 6 – офсетный цилиндр; 7 – бункер;

8 – барабан подачи ампул; 9 – направляющие

144

ячейки пуансонами и сжатым воздухом. Из питателя в ячейки попадаютампулы,асверхунакладываетсяфольга,термосклеивающаяся поддействиемпресса.Изобщейлентывырезаютсяготовыеупаковки, они поступают в накопитель.

На автомате для упаковки ампул вместимостью 1 мл (модель570)происходитодновременноупаковкаимаркировка.Пленкаполихлорвиниларазмягчаетсянагревателем,ячейкаформируется вакуумом при одновременной маркировке ампул. Они загружаются в ячейки, происходит термосклеивание с верхним покровным материалом. На упаковку горячим теснением наносятся серия, срок годности препарата, готовая упаковка вырезается и попадает в накопитель. Имеются автоматы для упаковки ампул в картонные коробки по 10 шт.

Линияупаковкиампулвбумажныеячейкиикоробки.Наданной линии выполняются изготовление ячеек, приклеивание подложки к ячейкам,нанесениемаркировкинаампулы,укладкаампулвячейки, вырубка ленты с ячейками и подложкой на секции по 5–10 ампул, поворот секции, укладка секции в коробку, складывание инструкции, укладка инструкции в коробки, нанесение выходных данных на клапаны коробки (рис. 47).

Рис. 47. Схема линии упаковки ампул

ОСОБЕННОСТИ ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА ИНЪЕКЦИОННЫХ РАСТВОРОВ

Растворжелатинамедицинского10%дляинъекций(Solutio Gelatinaemedicinalis10%proinjectionibus)получаютизжелатинаме-

дицинского: проверяют силу и крепость 10 % геля, относительную вязкость14,82%раствора,проводятбактериологическиеисследования. Желатин для инъекции в растворе 1 : 10 не может быть мутнее

145

эталона № 3, и кроме того, должен выдержать испытание на пирогенность при введении 10 мл его на 1 кг массы животного.

Желатинввидемелкихпластинокпомещаютна20миндлянабуханиявводе,переносятвреакторизаливаюткипящейводой.После полногорастворениязначениерНрастворадоводятщелочьюдо9,0– 9,7,аконцентрациювещества–до10%,устанавливаюттемпературу 80 °С и выдерживают 40 мин для частичного разрушения примесей белкового характера и пирогенных веществ. Раствор охлаждают до 60 °С, значение рН доводят до 6,8–7,0, добавляют 3 белка куриных яицна1л,угольактивированный,натрияхлорид(длястабилизации желатина) и с помощью миксера интенсивно перемешивают. Температуру повышают до 105 °С и выдерживают 15–20 мин. Белковые примеси коагулируют и адсорбируют углем. Раствор охлаждают до 90°С,фильтруютнадрук-фильтречерез4слоябязиислойфильтро- вальнойбумаги,затемчерезфильтрХНИХФИстолщинойровницы 3–4 см, ампулируют по 10 и 25 мл. Стерилизуют при температуре 105 °С 30 мин, медленно повышают ее до 120 °С и выдерживают 15 мин. После стерилизации ампулы помещают в термостат на 7 сут при 38–40 °С. Раствор не должен мутнеть. Проводится анализ раствора по следующим показателям: подлинность, относительная вязкость,температураплавления,значениерН,прозрачностьицветность. Препарат испытывается на пирогенность и стерильность. Технологияприготовлениярастворапреследуетцель—максимально удалить пирогенные вещества и белки с антигенными свойствами и одновременно сохранить способность желатинирования (гелеобразования). Перед введением раствор подогревается до 37 °С.

Растворкальцияглюконата10%дляинъекций(SolutioCalcii gluconatis 10 % pro injectionibus). Кальция глюконат медленно рас- творяютв50частяхводыи5частяхкипящейводы–такимобразом, 10 % раствор перенасыщен. В отличие от многих солей кальция глюконат при нагревании улучшает растворимость. Поэтому растворение проводят при нагревании в течение 3 ч.

Вкальцияглюконатесодержитсяпримеськальцияоксалатакак побочныйпродуктприполучениивещества,котороевовремярастворенияобразуеткомплексскальцияглюконатом,апристерилизации и хранении выпадает в осадок. Его удаляют добавлением кристалликов кальция оксалата в качестве затравки и для повышения кон-

146

центрацииодноименныхионов.Приохлажденииобразуетсяосадок, поэтомурастворфильтруютвгорячемсостоянии.Егоанализируют, проверяют значение рН, расфасовывают и стерилизуют паром под давлением при температуре 110 °С в течение 1 ч. При более высоких температурах происходит карамелизация. Перед введением раствора больному необходимо убедиться, что шприц и игла не содержат этанол,таккаквэтомслучаевмоментвведенияпрепаратавыпадает осадок. Выпускают в ампулах по 10 мл.

Растворглюкозы5;10;25и40%дляинъекций(SolutioGlucosi 5; 10; 25; 40% pro injectionibus). Исходная глюкоза подвергается анализунапрозрачностьицветностьеерастворов,кислотность,наличие хлоридов,сульфатов,кальция,бария.Тяжелыхметалловдопускается не более 0,0005 % при отсутствии мышьяка. Раствор получают с учетом содержания кристаллизационной воды в глюкозе двойной очисткой активированным осветляющим углем марки «А». Гидратную глюкозу растворяют при температуре 50–60 °С и добавляют уголь активированный, обработанный кислотой хлороводородной. Для удаления примесей и активирования перемешивают 10 мин и еще добавляют уголь активированный, перемешивают, фильтруют черезбельтингибязь.Затемраствордоводятдокипения,охлаждают до температуры 60 °С, добавляют уголь активированный, перемешивают 10 мин и фильтруют. К раствору добавляют стабилизатор Вейбеля (натрия хлорид и 0,1 н раствор кислоты хлороводородной), перемешивают, анализируют и фильтруют через фильтр ХНИХФИ, ампулируют и стерилизуют в паровом стерилизаторе при темпера- туре100–102°Свтечение1ч.Врастворепроверяютсяподлинность, цветность,значениерНсреды(должнобыть3,0–4,0),5%растворпри введении10млна1кгмассыживотногодолженбытьапирогенным. Проверяется его стерильность.

Раствор кислоты аскорбиновой 5 % для инъекций. Раствор кислоты аскорбиновой изготавливают в присутствии натрия гидрокарбоната, который добавляют до рН = 6,0–7,0. При этом образуется натрияаскорбинат,снижающийболезненностьинъекции.Вкачестве антиокислителейприменяютнатриясульфитбезводный (0,2%)или натрия метабисульфит (1 %) и ампулируют в токе инертного газа. Воду перед изготовлением раствора обязательно кипятят с целью удаления кислорода воздуха.

147

Растворэуфиллина2,4%дляинъекций.Дляполучениястой-

ких растворов эуфиллина используют эуфиллин с повышенным содержанием этилендиамина, воду для инъекций подвергают дополнительному кипячению. Эти мероприятия предотвращают гидролиз эуфиллина.

Раствор кальция хлористого 10 % для инъекций. В препа-

рате должны отсутствовать примеси кальция сульфата и ионов железа. В связи с этим раствор подвергают дополнительной очистке. Примесь ионов железа переводят с помощью кальция окиси в гидроокись железа, которую далее подвергают адсорбции на активированном угле. Кальция сульфат выпадает в осадок при кипячении или длительном отстаивании.

Раствор магния сульфата 25 % для инъекций. В препарате должны отсутствовать ионы марганца и железа, которые в растворе с помощью магния окиси переводят в гидроокиси марганца и железа и далее адсорбируют на активированном угле.

Для нейтрализации щелочной среды, создаваемой окисью маг- ния,враствордобавляют10%растворсернойкислотыдорН8,0–8,2, а затем 0,1 н раствор соляной кислоты до рН 6,8.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА ¹ 2

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ

Задание для выполнения

1.Составить рабочую пропись для получения одного из приведенных растворов (по заданию преподавателя).

2.Приготовитьраствор,определитьконцентрацию,довестидо стандартногозначения,профильтровать,проверитьнапрозрачность

имеханические включения.

3.Заполнитьампулыприготовленнымраствором,запаять,проверить качество запайки ампул, простерилизовать, проверить герметичность ампул.

4.Провести контроль качества инъекционного раствора в ам-

пулах.

148