Карабинцева Фармацевтическая технология методички / Производство стерильных и асептических лекарственных форм учебно-методическое пособие. 2014

более 2 % с механическими включениями всю партию возвращают напервичныйконтроль.Третичныйвыборочныйконтрольосуществляют контролеры ОКК. Для контроля отбирают среднюю пробу от каждой серии перед упаковкой и маркировкой.

Таблица 14

Нормативы объемов выборок для контроля растворов на механические включения и параметры их оценки РД-42-501-98

131

Ампулыилифлаконывращаютсядлясозданиявнихспиралеобразного потока жидкости. После разрушения пузырьков воздуха ампулы или флаконы просматривают на черном и белом фоне при освещении матовой лампочкой в 60 Вт. На черном фоне проверяется прозрачностьимеханическиевключения–стекляннаяпыль,волокна, на светлом – цвет раствора, отсутствие механических включений черного цвета и целостность стекла. Метод позволяет отделять пузырьки воздуха, определять форму и вид частиц, так как ампула 20 мм в диаметре дает их увеличение в 2 раза. Метод имеет недостатки: субъективность – острота зрения, опыт работы, усталость контролера; время анализа, условия взбалтывания; отсутствие количественной оценки, высокий процент ошибок.

Счетно-фотометрический метод. Анализ осуществляют на приборах, работа которых основана на принципе светоблокировки, позволяющем автоматически определять размер частиц и их число соответствующегоразмера,например,наанализаторахмеханических примесей фотометрически-счетных ФС-151, ФС-151.1 или АОЗ-101. Отбор проб растворов малого объема: от каждой серии произвольно отбирают первые 8 флаконов (ампул); для большого объема – от каждой серии произвольно отбирают первые 3 флакона (ампулы), если объем раствора менее 500 мл или 2 флакона (ампулы), если объем 500 мл и более.

Настройкучувствительностианализаторапроводяткаждыйраз при включении, при переходе от одной анализируемой жидкости к другой и через каждые 4 ч непрерывной работы прибора. Перед началом анализа препаратов проводят «холостой» опыт для контроля чистоты воздуха рабочей зоны, используемой химической посуды и растворителя. Отмеривают цилиндром 50 мл растворителя и переливают в стакан анализатора. Анализируют четыре пробы объемом 10 мл каждая, результат первой пробы отбрасывают. Условия проведения анализа считают удовлетворительными, если в каждой из трех проб содержится не более 2 частиц размером 25 мкм и более. В противном случае контролируют чистоту воздуха с помощью прибора – анализатора запыленности воздуха типа А3 и повторяют стадии подготовки посуды и растворителя до получения соответствующих результатов.

Образцы или равные аликвотные части после осторожного взбалтывания переносят в мерный цилиндр и доводят общий объем

132

исследуемого раствора растворителем до 50 мл. В случае необходимости растворы из ампул извлекают с помощью шприца, предварительноподготовленного.Послеопределенияобщегообъемараствор из цилиндра переносят в стакан анализатора. Устанавливают на блоке дозатора прибора объем анализируемых проб (10 мл), включают мешалку и через 2–3 мин (после удаления пузырьков воздуха) анализируют последовательно 4–5 проб.

Обработкурезультатовосуществляютследующимобразом:результатыпервойпробынеучитывают;длякаждойследующейпробы фиксируют результат подсчета общего количества частиц размером 5 мкм и более, а также частиц размером 25 мкм и более. Затем рассчитывают среднее арифметическое результатов всех проб по обоим нормируемым размерным диапазонам частиц.

Количество частиц, приходящееся в среднем на одну ампулу (флакон) препарата одного из нормируемых размеров (С емк.), рассчитывают по формуле:

гдеСср.пробы–среднееарифметическоеколичествочастицодного из нормируемых размеров, содержащихся в одной пробе;

Vр-ра – общий объем анализируемого раствора, мл;

Vпробы – объем одной контролируемой пробы, мл; N емк. – число ампул (флаконов), взятых для анализа.

Еслинетдругихуказанийвчастныхстатьях,всреднемводной емкости количество частиц размером 5 мкм и более не должно превышать 6000, в том числе размером 25 мкм и более – 600 частиц. Впротивномслучаеповторныйанализнепроводятисериюбракуют.

Проточные методы. Возможны два варианта. Первый – раствор протекает через чувствительный канал с небольшим калиброванным отверстием, например, 10 мкм. На обоих концах канала имеются электроды, являющиеся проводниками электрического тока. Механические частицы изменяют силу тока, и прибор регистрирует импульс продолжительностью несколько микросекунд. Амплитуда зависит от диаметра частицы. Во втором случае используют электронно-счетный прибор. Раствор пропускают через

133

прямоугольную ячейку с датчиком. Пучок света дает постоянный сигнал, который изменяется проходящей частицей в зависимости отеедиаметра.Предлагаетсяиспользоватьсочетаниедвухметодов: для постадийного контроля – приборы, действие которых основано на регистрации поглощения или рассеивания света, на последней стадии – мембранно-микроскопический метод.

В нашей стране прошли промышленные испытания установки для объективного контроля чистоты инъекционных растворов в ампулах(рис.44).Чувствительнымэлементомявляетсяпередающая трубкателевизионнойкамерынабазеустановкиПТУ-29.Оптическая часть представлена двумя осветителями, приспособлением для расширениязоныпросмотраидиафрагменнойсистемой.Ампуласрастворомраскручиваетсясбольшойскоростью,чтобысоздатьворонку жидкости,доходящуюдоднасосуда,затемскоростьуменьшается,но растворпродолжаетвращатьсявампулепоинерции.Частицыпереходят во взвешенное состояние, а пузырьки воздуха разрушаются. Световойпотокотосветителейпроходитраствор,априсутствующие частицыегорассеивают.Этоулавливаетсяобъективомпередающей телевизионнойкамеры.Сигналпоступаетнаблокобработкиинформации,гдефиксируетсяналичиемеханическихчастиц(минимальный размер – 5 мкм) и объем наполнения ампулы. Время наблюдения может быть от 1 до 3,5 с. Результат работы установки в 4 раза выше производительности 5 контролеров.

Мембранно-микроскопические методы. Микроскопический метод позволяет выяснить природу механических включений в инъекционных лекарственных средствах, что особенно важно для производителей лекарств, так как способствует выявлению, а затем и устранению в ряде случаев источников загрязнения. Являясь наиболее объективным, он может быть использован как арбитражный

(табл. 15).

Для проведения контроля необходимы – фильтрационная установка, например, фирмы «Millipore», диаметром 25 мм со стеклянной воронкой; мембранные фильтры (мембраны), желательно с нанесеннойнаповерхностисеткой,напримертипа«HAWG»(размер пор 0,45 мкм) фирмы «Millipore»; пипетки; пинцеты; предметные стекла;чашкиПетри;бинокулярныймикроскоптипаМБС-1(собщим увеличением в 100 раз).

134

Рис. 44. Принцип работы установки для объективного контроля чистоты раствора в ампулах (схема)

Микроскопподготавливаюткработевсоответствиистребованиями,изложеннымив«Описаниимикроскопабинокулярноготипа МБС-1». С помощью объектмикрометра определяют цену деления окулярмикрометра.

Воронкуфильтрационнойустановкиипредметныестекламоют теплой водой с моющим средством типа «Прогресс», затем последовательно ополаскивают несколько раз теплой проточной водой, водой очищенной и водой очищенной, свободной от механических включений. На поверхность предметных стекол пипеткой наносят тонким слоем силиконовую эмульсию, например КЭ-10-16, для последующего надежного фиксирования мембран. Мембрану перед использованиемпромываютструейводыочищенной,несодержащей механических включений, с обеих сторон сверху вниз, держа ее пинцетом в вертикальном положении. Затем мембрану помещают в фильтродержатель и аккуратно устанавливают воронку, не касаясь ею поверхности мембраны.

Передначаломработыпроводят«холостой»опытдляконтроля качества подготовки мембраны, воронки и воды очищенной. Для этого в воронку фильтродержателя наливают около 30 мл воды очищенной,свободнойотмеханическихвключений.Отфильтровывают воду под вакуумом. Затем отключают вакуум, осторожно снимают

135

воронку, аккуратно пинцетом снимают мембрану и помещают ее на предметноестекло,котороеоставляютвчашкеПетридляподсушки мембраны. Предметное стекло с мембраной помещают на предметный столик микроскопа, устанавливают необходимое увеличение. Осветительрасполагаютсбокутакимобразом,чтобылучсветападал наповерхностьмембраныподуглом10–20°.Производятрегулировку подсвета и фокусировку мембраны, чтобы получить максимальную четкость изображения механических включений.

Подсчет частиц и определение их размеров проводят по всей поверхности мембраны, перемещая ее слева направо и сверху вниз под объективом микроскопа. Под размером частиц подразумевают их максимальный диаметр или максимальный линейный размер. Допускается наличие не более 5 частиц размером более 25 мкм. При обнаружении большего количества частиц подготовку принадлежностей и воды очищенной повторяют до получения требуемого результата.

Таблица 15

Описание метода микроскопического контроля механических частиц

136

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕРИЛЬНОСТИ

На специальных тест-микроорганизмах устанавливается наличие или отсутствие антимикробного действия лекарственного и вспомогательных веществ.

Приобнаруженииантимикробногодействияиспользуютинак- тиваторы,например:длясульфаниламидов–кислотупарааминобен- зойную,дляпенициллиновицефалоспоринов–пенициллиназуи т.д. Еслиактиваторанет,используютметодмембранногофильтрования дляотделенияантимикробныхвеществ.Притепловойстерилизации для испытания берется 10 ампул, для других методов минимальное количество образцов определяют по формуле:

n = 0,4√ N,

где N – общее число ампул в исследуемой серии.

Число образцов должно быть в пределах не менее 3 и не более 40 шт. В зависимости от объема содержимого ампулы изменяется количество посева. Например, при объеме 1–4 мл посев – 1 мл;

137

5–19мл–2млит.д.Растворывысеваютнадвесреды:тиогликолевую и Сабуро, инкубируют 14 сут при соответствующих температурах, просматриваяежедневно.Приобнаруженииростамикроорганизмов хотя бы в одной пробирке испытания повторяют на таком же количестве ампул, и только при отсутствии роста при повторном посеве партия считается стерильной.

Стерильность серии – это стерильность загрузки одного автоклава.

Метод мембранного фильтрования для определения стерильности рекомендован при выраженном антимикробном действии лекарственноговеществаииспытаниираствороввбольшихобъемах (более100мл).Отбирается30ампул,ихделятна3группыпо10шт., 20 используют для испытания на стерильность, 10 – для контроля полноты отмывания мембраны от лекарственного вещества. Для фильтрования применяют установку с мембраной диаметром 47 мм иразмеромпор0,45± 0,02мкм.Фильтрыстерилизуютпритемпературе121±1°С20мин.Еслииспытываютпорошок,егорастворяютв водедляинъекций,фильтруютчерезстерильнуюмембрану,которую промывают от раствора 3–5 порциями растворителя по 100 мл, разрезают стерильными ножницами на 2 части, одну из них помещают в колбу с тиогликолевой средой, вторую – в среду Сабуро, 7 дней инкубируют при ежедневном просмотре. Все операции проводят в асептическихусловиях.Приотсутствииростанадвухсредахделают заключение о стерильности серии.

АПИРОГЕННОСТЬ

Апирогенность проводится биологическим (фармакопейным, ЛАЛ-тестом), микробиологическим, химическим, физикохимическим (полярографией, спектрофотометрией, люминесцентным) методами.

Биологический фармакопейный метод (ГФ-XI, с. 183–185).

Испытание проводят на здоровых кроликах обоего пола весом 1,5–2,5кг,содержащихсянаполноценномрационе.Кроликовотбира- ютза5днейдоопыта.Каждогокроликасодержатвотдельнойклетке в помещении с постоянной температурой (допустимые отклонения ± 3 °С). При уборке клеток и взвешивании животных оберегают от возбуждения (шум, стук, резкие движения).

138

Взвешивание кроликов производят через день до дачи корма, всегонеменьше3раз.Втечениесрока,предшествующегоопыту,кролики не должны терять в весе. Животные, теряющие в весе, к опыту непригодны. В течение 3 сут перед испытанием у каждого подопытногокроликаизмеряетсятемператураежедневноутром,додачикорма,припомощимедицинскоготермометраилидругогоприборадля измерениятемпературытела,точностькоторогонедолжнауступать точностимедицинскоготермометра.Исходнаятемператураподопытного кролика должна быть в пределах 38,5–39,5 °С. Животное с более высокой температурой или более низкой для опыта непригодно.

За 24 ч до опыта кроликов переводят для испытания на пиро- генностьвотдельнуюкомнатуспостояннойтемпературой18–22°С, изолированнуюотшума.Вечеромнаканунеопытауживотныхубирают остаток корма. До и во время опыта животные корма не получают (воду до опыта дают без ограничения).

Вода для инъекций, растворители, шприцы и иглы должны быть стерильными и непирогенные. Испытуемые препараты должны быть стерильными.

Для испытания отбирают не менее 2 флаконов или ампул от каждой серии – от 1000 до 10 000 шт. Из каждой серии более 10 000 шт. отбирают по 3 флакона или ампулы. Из содержимого отобранныхфлаконовилиампулготовятобщийраствор(смешанная проба). Из серии, содержащей до 1000 шт., отбирают по 1 флакону или ампуле.

Испытуемыйрастворвводяткроликувушнуювену.Длякаждогокроликаберутотдельнуюиглу.Растворыиспытуемыхлекарственных веществ вводят подогретыми до 37 °С в количествах и с растворителями,указаннымивсоответствующихфармакопейныхстатьях илиспециальныхинструкциях.Дляиспытанияводыпредварительно готовятизнееизотонический0,9%растворнатрияхлорида.Хлорид натрия должен быть стерильным и апирогенным. Стерилизацию хлориданатрияпроводятвсуховоздушномстерилизаторепри250°С в течение 30 мин, при 180 °С – в течение 2 ч. Количество вводимого изотоничного раствора составляет 10 мл на 1 кг веса кролика. Весь раствор вводят в течение 2 мин, предварительно подогретым.

Испытуемый раствор проверяют на 3 кроликах. Введение раствора производят не более чем через 30 мин после измерения ис-

139

ходнойтемпературы.Послевведениярастворатемпературуизмеряют 3 раза с промежутком 1 ч.

Водуилирастворлекарственноговеществасчитаютнепирогенными, если после введения ни у одного из 3 подопытных кроликов ни при одном из 3 измерений не наблюдалось повышение температуры более чем на 0,6 °С по сравнению с исходной температурой, и в сумме повышение температуры у 3 кроликов не превышало 1,4 °С.

Если у 1 или 2 кроликов температура повысилась более чем на 0,6°С,т.е.всуммеу3кроликовповышениетемпературысоставляет более 1,4 °С, испытание повторяют дополнительно на 5 кроликах. Воду или раствор считают апирогенными, если не более чем у 3 из всех 8 кроликов наблюдалось индивидуальное повышение температуры на 0,6 °С и более, и общая сумма повышения температуры у всех 8 кроликов не превышала 3,7 °С.

Кролики, бывшие в опыте, могут быть использованы повторно для определения пирогенности (но не более 5 раз) раньше, чем через 5 сут, если ранее введенный им раствор лекарственного веществаиливодыбылинепирогенными.Есливведенныйрастворлекарственного вещества или вода были пирогенными, кролики не могут быть использованы для дальнейших опытов.

Биологический метод. ЛАЛ-тест. Правила проведения ЛАЛ-

теста регламентируются Общей Фармакопейной Статьей «Бактериальныеэндотоксины»(ГФXII,стр.128).Внастоящеевремя,согласно фармакопейным требованиям, разрешается проведение анализа шестью различными методами, каждый из которых может быть использован для проведения контрольных анализов:

–метод А. Качественный гель-тромб тест;

–метод В. Количественный гель-тромб тест;

–метод С. Кинетический турбидиметрический тест;

–метод D. Кинетический хромогенный тест;

–метод Е. Хромогенный тест по конечной точке;

–метод F. Турбидиметрический тест по конечной точке.

Метод А.

Качественный гель-тромб тест. Это наиболее простой и экономичный метод проведения анализа. Для его постановки смешивают равные количества ЛАЛ-реактива и испытуемого препарата, и

140