- •Современные методы исследования биологически активных веществ
- •Современные методы исследования биологически активных веществ
- •1. Общие положения
- •1.1 Спектральные методы анализа
- •1.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография
- •1.2.1 Преимущества метода
- •1.2.2 Основной принцип хроматографического разделения.
- •1.2.3 Устройство жидкостного хроматографа
- •1.2.3.1 Насосы
- •1.2.3.2 Устройство для формирования градиента
- •1.2.3.3 Инжекторы
- •1.2.3.4 Детекторы для вэжх
- •1.2.3.5 Сосуды для подвижной фазы
- •1.2.3.6 Колонки
- •2 Методики выполнения лабораторных работ
- •2.1 Спектрофотометрическое определение витамина в6 (пиридоксина гидрохлорида) 5% в инъекционных препаратах
- •2.2 Метод рн дифференциальной спектрофотометрии определения массовой доли суммы антоцианинов в соковой продукции.
- •2.3 Спектрофотометрическое определение количественного содержания аскорбиновой кислоты (витамина с) в напитках.
- •2.4 Определение содержания витаминов в1, в2 методом вэжх в премиксах.
- •2.5 Определение содержания и состава углеводов с помощью метода вэжх.
- •2.5.1 Основы ионообменного метода
- •2.5.2 Выбор подвижной фазы и условий разделения.
- •2.5.3 Проведение испытания
- •3. Список рекомендуемой литературы
1.2.3.5 Сосуды для подвижной фазы
Cосуды должны быть такой вместимости, чтобы обеспечить дневную потребность растворителя без его замены. Для односменной аналитической работы очень удобны стеклянные бутылки вместимостью 0,5— 1 л. При круглосуточной или препаративной работе с точки зрения безопасности лучше использовать резервуары из нержавеющей сталивместимостью 5—20 л. При применение легко окисляющихся или особо взрывоопасных растворителей, пространство над жидкостью в емкости продувают с небольшой скоростью инертным газом.
Огромное значение имеет дегазация подвижной фазы. Желательно выполнять эту операцию непосредственно в рассматриваемом сосуде, чтобы исключить переливание растворителя. При использовании смешанных подвижных фаз, особенно, если их компоненты заметно различаются по температуре кипения, весьма желательно непрерывно перемешивать содержимое сосуда магнитной мешалкой для поддержания однородности системы.
1.2.3.6 Колонки
Общая конструктивная схема колонки включает в себя корпус, фильтры и наконечники
Корпус колонки – это цилиндрическая трубка из нержавеющей стали, стекла или полимерных материалов, заполненная сорбентом. Оба конца корпуса закрыты фильтрами. Чаще всего это диски из пористой нержавеющей стали, по диаметру соответствующие наружному диаметру колонки. Диаметр пор фильтров 0,5—2 мкм, их назначение — удерживать сорбент в колонке. Фильтр на входе в колонку задерживает также механические примеси из подвижной фазы и образцов.
Наконечники герметизируют всю колонку и служат для подключения капиллярных трубок, соединяющих колонку с дозатором и детектором. Конструкция наконечников должна быть такой, чтобы свести к минимуму вне колоночное размывание пробы и разделенных компонентов. Наконечник хорошей конструкции так формирует поток на входе в колонку, что поперечное размывание и отрицательное влияние стеночного эффекта сводятся к минимуму. Фактически в колонке работает при этом только центральная часть сорбента. Такие колонки характеризуются высокойэффективностью.
Колонки имеют длину от 3 до 50 см и внутренний диаметр около 4 см. Они выдерживают давление до 5,5 ∙ 107Па, возможная скорость потока составляет 1-3 мл/мин
Разработка суспензионных методов приготовления колонок позволила резко поднять эффективность и использовать сорбенты размером 10 мкм и меньше.
Процесс суспензионной упаковки вкратце выглядит следующимобразом.Взвешивают требуемое количество сорбента для колонки данного размера, заливают его растворителем и готовят суспензию, тщательно перемешивая смесь ультразвуком. После этого суспензию помещают в резервуар, соединенный с колонкой, на конце которой установлен фитинг с фильтром, ипод давлением 20—60 МПа продавливают суспензию через колонку, подавая растворитель насосом в резервуар. Суспензия фильтруется на фильтре колонки, формируяупорядоченный слой сорбента, обеспечивающий эффективное разделение при ВЭЖХ. Останавливают поток растворителя, дают давлению упасть до нуля и снимают колонку. Аккуратно удаляют избыток сорбента с конца колонки, присоединявшегося к резервуару, и присоединяют второй фитинг с фильтром. Полученную таким образом колонку устанавливают на хроматограф, прокачивают через нее до установления равновесия рабочий растворитель, после чего она готова к работе.