Миелопероксидаза

.Фермент,локализующийся преимущественно в специфическойзернистости цитоплазмы гранулоцитов и являющийся маркером клеток миелоидной природы. Миелопе-роксидаза разрушает токсическую перекись водорода, образующуюся внутриклеточно в процессе жизнедеятельности клеток.

Метод Грэхема - Кнолля.

Принцип.В присутствии пероксидазы бензидин окисляется перекисью водорода в коричневый оксибензидин.

Реактивы. 1. 4% формалиново-спиртовой раствор (10 частей 40 % формалина и 90 частей 96 % спирта). 2. Реактив на пероксидазу:

бензидин (на кончике ножа) растворяют в 6 мл 96 % спирта, прибавляют 4 мл воды и 0,02 мл 3 % перекиси водорода. Реактив годен к употреблению в течение 5-6 дней. 3. Краситель

Романовского - Гимзы.

Специальное оборудование.Не требуется.

Ход определения. Свежие мазки ( 1-2-дневной давности) фиксируют 4 % формалиново-спиртовым раствором в течение 30 с. Обмывают в проточной воде и высушивают. Заливают

реактивом на пероксидазу на 5 мин. Тщательно промывают в проточной воде и высушивают.Докрашивают красителем Романовского -Гимзы. Пероксидаза выявляется в цитоплазме

клеток в виде коричневых гранул.

Модифицированный метод Нарциссова.

Принципсм метод Грэхема - Кнолля. Для уменьшения инактивации фермента использованы соответствующий фиксатор и небольшое количество перекиси водорода.

Реактивы. 1.60% водный раствор ацетона. 2. 0,1 М раствор бората натрия (можно использовать фосфатный или мединаловый бу-

ферный раствор рН 7.6). 3. 5 % водный раствор трилона Б. 4. Насыщенный водный раствор бензидина. 5. 0,003 % раствор перекиси водорода (разводят перед употреблением из 3 % раствора в два этапа). 6. Инкубационная среда:5 мл 5 % водного раствора трилона Б, 10 мл раствора бората натрия, 35 мл насыщенного

раствора бензидина и 2 мл раствора перекиси водорода. 7. 0,5 % раствор метилового зеленого на буферном растворе (рН 5,0) или 0,1 % водный раствор метиленового синего.

Специальное оборудование.Термостат.

Ход определения. Свежеприготовленные мазки фиксируют в 60 % водном растворе ацетона в течение 30 с. Промывают дистиллиро-

ванной водой. Инкубируют в инкубационной среде в течение 1 ч в термостате при 37 °С.Промывают дистиллированной водой. Докрашивают мазки метиловым зеленым или метиле-

новым синим в течение 10 мин. Можно исследовать недокрашенные мазки.

Модифицированный метод [Шафран м. Г. И соавт., 1979).

Принцип см. Метод Грэхема - Кнолля. Бензидин заменен О-дианизидином.

Реактивы. 1. 10% спиртовой раствор формалина (1 мл 10% формалина и 9 мл этилового спирта). 2. Спиртовой раствор О-дианизидина (можно использовать препарат Шосткинского завода химреактивов; белые или желтова-

тые кристаллы препарата быстро окисляются на воздухе, при изменении окраски он становится непригодным). 24 мг О-дианизидина растворяют в 5 мл метанола и доводят дистиллированной водой до 9,9 мл. 3.3 % раствор перекиси водорода. 4. Реакционная смесь: к спиртовому раствору О-дианизидина прибавляют перед употреблением 0,1 мл перекиси водорода.

5. 0,25 % водный раствор азура А или другой ядерный краситель.

Специальное оборудование. Не требуется.

Ход определения.Мазки фиксируют спиртовым раствором формалина в течение 10-15 с. Споласкивают проточной

водой. На мазки наносят реакционную смесь на 2-3 мин при комнатной температуре. Споласкивают проточной водой. Докрашивают раствором азура в течение 10-15 с. Споласкивают

проточной водой и высушивают.

Нормальные величины. В крови здоровых людей активность пероксидазы выявляется преимущественно в цитоплазме грануло-

цитов и в меньшей степени - моноцитов. Фермент появляется в кровяных клетках на стадии промиелоцитов и у ряда миелобластов (более зрелых). Не содержат фермента недифференци-

рованные бласты, часть миелобластов и лимфобласты; 3-16 % нейтрофилов окрашены резко положительно (-1- -4- +), 60-90 % - положительно (++) и остальные-слабоположитель-

но (+)• СЦК нейтрофилов здоровых людей равен 2,56 Чг 0,033. Эозинофилы характеризуются резко положительной реакцией на пероксидазу.

Клиническое значение. Активность фермента в нейтрофилах снижена при инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе,

опухолях. У больных хроническим миелолейкозом, особенно в терминальной стадии, СЦК снижается до 1,63 ч= 0,19 ед. В бластных клетках активность фермента высокая при остром миел

бластном лейкозе, слабая - при остром монбластном и отсутствует - при остром лимфбластном лейкозе.