Приготовление сред Посуда для приготовления сред
Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке её в ржавых кастрюлях. Лучше пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Новую стеклянную посуду предварительно кипятат 30 минут 1-2% растворе хлороводородной кислоты, после чего в течение часа прополаскивают в проточной воде.
Сырьё
Исходным сырьём для приготовления большинства сред служат продукты животного и растительного происхождения, а также готовые полуфабрикаты.
Этапы приготовления
-
варка: среды варят на открытом огне, водяной бане,автоклаве или варочных котлах.
-
установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.
-
осветление производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови.
-
фильтрация жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена - они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
-
разливают среды не более чем на ¾ емкости, т.к. при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.
-
стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте.
-
Контроль
-
для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают.
-
химический контроль окончательно устанавливает pH, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов.
-
для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды.
Желточно-солевой агар (Ж С А). Содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8—10%), которые не препятствуют размножению стафилококков, что создает элективность этой среды для данных микробов. Среда дифференцирует стафилококки, продуцирующие лецитовител-лазу, от стафилококков, не выделяющих этот фермент, по Состав сред. Кровяной агар с генциановым фиолетовым 2%питательный агар с 5—10% дефибринированной крови лошади, кролика или барана и генциановый фиолетовый (1 50 ООО). Желточно-солевой агар 2% питательный агар с 10% хлорида натрия, 20% (по объему) желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 200 мл изотонического раствора хлорида натрия . Для приготовления желточно-солевого агара готовят впрок мясо-пептонный агар (pH 7,2—7,4) с содержанием 10% хлорида натрия. После разливки во флаконы по 100— 200 мл агар стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при температуре 120°С. Перед употреблением растапливают, охлаждают до 45—50°С и добавляют 20% (по объему) стерильной желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 150— 200 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия). Среду быстро перемешивают, разливают в стерильные чашки, которые продолжительное время могут сохраняться в холодильнике. Стафилококки могут находиться в воздухе операционных перевязочных, родильных палат и других больничных помещений. Для их обнаружения делают посевы воздуха на желточно-солевой агар. Нетребовательны к питательным средам, хорошо растут на простых средах, дают пигментные колонии. Элективной средой для стафилококков является желточно-солевой агар, реже — молочно-солевой агар.