Получение чистых культур микроорганизмов и посевного материала.

Получение чистой культуры их сообщества микробных клеток очень трудоемкий и сложный процесс, включающий несколько стадий:

- получение накопительной культуры;

- выделение чистой культуры;

- проверка чистоты и идентификация выделенной культуры.

Накопительная культура – это культура, состоящая из микроорганизмов со схожими физиологическими свойствами. Накопительную культуру получают при выделении чистой культуры микроорганизма из какого-либо материала или природного субстрата (например, воды, воздуха, почвы), в котором данный микроорганизм находится в небольшом количестве. Накопительную культуру получают в элективных условиях, способствующих развитию выделяемого микроорганизма и ограничивающих рост сопутствующих. Указанные условия можно создать путем использова­ния элективных сред. В результате накопительная культура состоит преимущественно из клеток одного вида микроорганизма, так как элективные среды в сочетании с элективными условиями ограничивают развитие сопутствующих микроорганизмов.

После получения накопительной культуры приступают к выделению чистой культуры.

Чистая культура как уже говорилось, представляет собой потомство одной микробной клетки. Выделение производят путем изолирования отдельных микробных клеток микроорганизма одним из специальных приемов. Основным метолом выделения чистых культур микроорганизмов до настоящего времени является метод, предложенный Р.Кохом. По методу Коха разбавленную суспензию накопительной культуры высевают «истощающим штрихом» на поверхность плотной, как правило, дифференциально-диагностической питательной среды с целью получения из отдельных клеток суспензии изолированных колоний. Выросшая колония обычно состоит из клеток, представляющих собой потомство одной клетки и является чистой культурой ( рис.4.1).

слившиеся колонии

след посева «штрихом»

поверхность питательной среды

отдельные колонии «чистой культуры»

Рис. 4.1. Схема выделения «чистой культуры» по методу Коха

Проверка чистоты и идентификация выделенной культуры – обязательная стадия в процессе получения чистой культуры. Чистоту культуры, т.е. отсутствие в ней микроорганизмов другого вида, можно установить либо путем микроскопирования, либо путем рассева на поверхность плотной питательной среды с последующим анализом выросших колоний. Идентификацию чистой культуры проводят путем установления ее культурально-морфологических и физиолого-биохимических признаков и сравнения их с признаками музейной культуры.

Чистые культуры хранят в пробирках на плотной питательной среде, периодически пересеивая их на свежие среды. Другими способами хранения чистых культур микроорганиз­мов являются: хранение под слоем вазелинового масла, хранение при низких и ультранизких температурах, хранение в сублимированном состоянии. Основные цели хранения микроорганизмов сводятся к поддержанию их жизнеспособности, сохранению стабильно­сти таксономических признаков, а также определенных свойств, представляющих инте­рес для науки и практики. Задача длительного хранения микроорганизмов состоит в созда­нии условий анабиоза, то есть к торможению процессов обмена веществ в клетке.

Работа по получению и поддержанию чистых культур промышленных микроорганиз­мов осуществляется в научно-исследовательских лабораториях. Культуры хранятся в коллекции музея чистых культур и рассылаются научно-исследовательскими отраслевыми институтами на предприятия. В заводской лаборатории культуру проверяют на чистоту и активность и готовят к использованию в производственном процессе путем ее разведения. Разведение чистой культуры состоит из ряда последовательных пересевов в постепенно возрастающие объемы питательной среды. Процесс разведения, как правило, состоит из двух стадий: лабораторной (разведение чистой культуры в микробиологической лаборатории) и производственной (разведение в отделении чистой культуры, но может быть и одностадийным – только лабораторным. После разведения получают технически чистую культуру в количестве, достаточном для засева производственных аппаратов. Это и будет посевной материал, который в разных производствах называют по-разному, например, семенные, засевные, посевные, маточные культуры и т.д. Для каждого производства существуют свои схемы разведения чистой культуры.