Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий

Чистую культуру бактерий получают для проведения дифференциально-диагностических исследований - идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизмов.

Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами и нативных препаратов.

Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по характеру роста на питательной среде.

При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии и питательную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый пигмент -Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент - Pseudomas aeruginosa (синегнойная палочка).

Биохимические признаки бактерий определяются набором ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определяют на дифференциально-диагностических средах. Для установления биовара (хемовара, серовара, фаготипа) проводят исследования по выявлению антигена и чувствительности к фагам.

к Работе №2

1. Классификация питательных сред

Питательные среды необходимы для получения чистых культур микроорганизмов, изучения особенностей их морфологии и физиологии, а также для сохранения микроорганизмов в виде чистых культур в лабораторных и производственных условиях

По составу:

Естественные питательные среды - это натуральный продукт животного или растительного происхождения - молоко, яйца, овощи, животные ткани, желчь, сыворотка крови.

Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

Синтетические среды содержат определенные химические соединения в точно указанных концентрациях.

По консистенции:

Жидкие среды чаще применяют для изучения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы и продуктов обмена.

Полужидкие среды обычно используют для хранения культур.

Плотные - для выделения микроорганизмов, изучения морфологии колоний, диаг­ностических целей, количественного учета, определения антагонистических свойств и др. Агар - полисахарид, выделенный из морских водорослей. Он способен образовывать в воде гели, плавящиеся при 100°С и уплотняющиеся при 45°С и ниже, не используемые микроорганизмами в качестве питательного субстрата. Несколько циклов плавления и затвердевания не влияют на способность агара образовывать гель, поэтому агаровые среды можно несколько раз стерилизовать. Агар к средам добавляют в количестве 1,5-2% - для плотной среды.

По назначению:

Среды общего назначения используют для культивирования большинства микроорганизмов, это мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), сусло жидкое, сусло-агар.

Элективные среды используют при выделении определенного вида микроор­ганизмов из мест его естественного обитания или получения накопительных культур. Сопутствующие микроорганизмы или совсем не растут на таких средах, или развитие их сильно задерживается. Например, Желточно-солевой агар (ЖСА), теллуритовый агар и др.

Дифференциально-диагностические среды (ДДС) (например, среды Гисса. Эндо, Плоскирева и др.) предназначены для изучения и индикации отдельных типов, видов и групп бактерий. Основой среды являются различные органические и неорганические соединения, дополненные углеводами, спиртами, мочевиной и другими веществами. При их расщеплении происходит сдвиг рН в кислую (углеводы, спирты, липиды) или щелочную (белки) сторону. Соответственно выделяют среды с углеводами и спиртами, среды с мочевиной, среды для определения индоло-образования. среды для определения протеолитической активности и политропные, или комбинированные, среды.

На дифференциально-диагностических средах изучается ферментативная активность микроорганизмов