Действие бактериофага на микробную культуру в плотной и жидкой среде Реакция фаголизабельности

Лизирующее действие бактериофага выражается в полном просветлении бульонной культуры или в образовании на засеянных плотных средах пустых прозрачных участков среди густого налёта культуры на поверхности среды (стерильные пятна)

Опыт на плотной питательной среде

Делают густой посев газоном исследуемой культуры. Через 5-10 мин после посева на подсушенную поверхность питательной среды наносят жидкий диагностический фаг. Чашку помещают в термостат на 18-24 часа. Учёт опыта производят по полному отсутствию роста культуры в месте нанесения капли фага.

Опыт на жидкой питательной среде

Делают посев исследуемой культуры в две пробирки с жидкой средой. В одну пробирку («О») добавляют петлёй диагностический бактериофаг. Через 18-20 часов в пробирке, куда бактериофаг не добавлялся («К»), наблюдается сильное помутнение бульона — произошел рост посеянной культуры. Бульон в пробирке, куда был добавлен бактериофаг, остался прозрачным вследствие лизиса культуры бактериофагом.

Метод титрования фага

Титрование фагов проводится на культурах бактерий в жидких и плотных средах с целью определения их активности.

Метод Аппельмана

Данный метод основан на внесении одной и той же дозы культуры гомологичных микробов в различные концентрации титруемого бактериофага в мясо - пептонном бульоне.

Готовят десятикратные разведения исследуемого бактериофага в МПБ. Для этого в ряд пробирок разливают по 4,5 мл МПБ. В 1-ю пробирку добавляют 0,5 мл исследуемого фага. Тщательно перемешивают и переносят в последующие пробирки (из пробирки в пробирку) по 0,5 мл соответствующего разведения фага с уменьшением его концентрации в десять раз.

Получают разведения 10^-1 степени и т.д. до 10^-9 степени. После этого в пробирки вносят по 1 капле суточной культуры соответствующих бактерий. За титр бактериофага принимают то его максимальное разведение, при котором наблюдается полный лизис культуры.

Фаготипирование бактерий

По признаку специфичности различают следующие бактериофаги: поливалентные, лизирующие культуры одного семейства или рода бактерий; моновалентные, лизирующие культуры только одного вида бактерий; типовые, способны вызвать лизис только определенных типов (вариантов) бактериальной культуры внутри вида бактерий.

Например, один штамм патогенного стафилококка может лизироваться несколькими типами фагов, поэтому все типовые фаги (24) и штаммы патогенных стафилококков объединены в 4 группы.

Метод фаготипирования имеет большое значение для эпидемиологического исследования, так как позволяет выявить источник и пути распространения возбудителей заболеваний. С этой целью определяют фаговар выделенной из патологического материала чистой культуры на плотных питательных средах с помощью типовых диагностических фагов.

Фаговар культуры микроорганизмов определяют по тому типовому фагу, который вызвал ее лизис.

11