Общественные доноры

Местные владельцы животных предлагают своих любимцев для донорства на добровольной основе.

Преимущества:

• Хозяева животных принимают непосредственное участие в программе.

• У животных определяется тип крови, осуществляется ветеринарный контроль, включая обследования на заболевания, передаваемые с кровью.

• Взятия крови являются менее частыми (раз в 2-3 месяца).

Недостатки:

• Повышенная опасность переносимых с кровью инфекционных болезней, если кровь не проверяется при каждой сдаче.

• Значительно повышаются расходы и происходят задержки в получении подходящей крови. Конечный продукт имеет укороченный срок хранения и является более дорогим.

• Доноры потенциально могут испытывать неблагоприятные ощущения или стресс от процедуры взятия крови.

Доноры из ветеринарной клиники

Многие практикующие врачи выбрали путь содержания животных-доноров, часто принадлежащих персоналу клиники, непосредственно в клинике или рядом с ней. Преимущества и недостатки этого подхода схожи с уже подчеркнутыми выше для общественных доноров. Кроме того, животные, постоянно находящиеся в клинике, имеют повышенный риск приобретения больничных инфекций. Зато кровь, собранная от этих доноров, почти всегда используется как свежая или консервированная цельная кровь, а не как ее обработанные компоненты.

Приготовление и применение цельной крови и препаратов крови

В ветеринарии, в отличие от человеческой медицины, методы трансфузии и приготовления препаратов крови не развивались столь интенсивно и переливание цельной крови пока еще остается основным, принятым всюду методом. Однако, если у собак нередко примененяются препараты крови, то у кошек имеются ограничения, вызванные малым объемом крови, которая может быть собрана (1,3-7). Производство компонентов крови ограничено необходимостью работы в асептических условиях и доступностью специализированного оборудования:

• Рефрижераторной центрифуги.

• Экстрактора плазмы.

• Рефрижератора с постоянной температурой 4-6С.

• Низкотемпературной камеры хранения с температурой ниже -20С.

• Других запасных средств - таких как мешки для транспортировки плазмы (сухой), экстракторные пробирки, зажимы и герметики.

Цельная кровь

Свежая цельная кровь - самый легкий путь получения материала, пригодного для трансфузии. Поэтому она имеет самый широкий спектр клинического применения и показана при всех типах анемии, наследственной или приобретенной коагулопатии и нарушениях функции тромбоцитов. Поскольку цельная кровь является первичным источником трансфузии при очень небольшой практике для собак и предпочтительна для кошек, это делает излишним производство других препаратов из собранной крови.

Применение консервированной (до 30-35 дней) цельной крови, если она собрана с CPDA-1, ограничивается всеми типами анемии и не пригодно при гемостатической болезни (1,3-7).

Консервированные эритроциты

Консервированные эритроциты (PRBCs) содержат большое количество клеточной жидкости, остающейся в первичном мешке для крови после того, как около 80% плазмы и CPDA-1 были асептически введены в мешок для транспортировки. Их приготавливают, помещая мешок в рефрижераторную центрифугу на 15 минут, при скорости вращения 5.000 g и температуре около 3-6°С. Герметично закрытые в мешке PRBCs сохраняют охлажденными при 3-6°С и применяют, пока не истечет срок годности (около 30 дней), не наступит обесцвечивание или какая-либо аномалия. Перед переливанием мешок необходимо согреть. Если для облегчения переливания потребуется развести содержимое, то следует добавить только хлористый натрий. PRBCs показаны для пополнения запаса эритроцитов (как, например, при состояниях хронической анемии) и особенно в ситуациях, когда у больного возникает риск перегрузки дополнительным объемом жидкости. PRBCs можно использовать в комбинации с кристаллоидами для лечения острой кровопотери.

Плазма

Плазма представляет собой супернатант, и, как и PRBCs, готовится центрифугированием цельной крови собаки. Если плазму готовят с помощью рефрижераторной центрифуги, разделяют в течение б часов сбора и немедленно замораживают (-18°С или менее), то ее называют Свежезамороженной Плазмой (FFP) и используют для восстановления факторов свертывания, включая нестойкие компоненты. Срок хранения составляет 1 год при -40°С без утраты активности факторов свертывания. Плазму следует оттаивать при 30-37°С и вводить как можно скорее после оттаивания. Та плазма, которая была получена более чем через 6 часов после взятия крови или Свежезамороженная Плазма, неиспользованная в течение 24 часов после оттаивания или 1 года хранения, маркируется как Замороженная Плазма (FP). Она все еще обладает некоторыми факторами коагуляционной активности (напр., Фактором IX), но в основном используется как источник альбумина. Криопреципитат (СР) может быть приготовлен из FPP. Процедура состоит из продолжительного оттаивания, после чего супернатант удаляется в отдельный мешок. СР - компонент крови, богатый фибриногеном и FVIII, очень полезный для лечения гемофилии А и болезни фон Виллебранда. Остаточная плазма применяется и при других коагулопатиях, за исключением упомянутых выше, и в качестве источника альбумина (1,3-7). В общем, плазма может быть получена и из цельной крови с CPDA-1 до истечения срока годности, но этот продукт имеет очень ограниченное применение и пригоден только в качестве источника альбумина.

Тромбоциты

Обогащенная тромбоцитами плазма (PRP) готовится в течение 6 часов после взятия крови путем мягкого центрифугирования (т. е. 2.000 g в течение 3 минут) резервуара цельной крови, собранной с CPDA-1. Супернатант переносят в дополнительный мешок, используя экстрактор плазмы. Срок хранения - до 3-х дней при 3-6°С и постоянном встряхивании (1,3-7).

Подбор донора - реципиента по группам крови (совместимость)

Окончательную уверенность в том, что эритроциты донора действительно подходят реципиенту и впоследствии будут эффективно выполнять функцию переносчика кислорода в организме могут дать только результаты перекрестной пробы. Эта процедура состоит из двух этапов (3, 4, 6-8).

Большая перекрестная проба

Эритроциты донора (промытые три раза и взвешенные в 3-5% физ. растворе) приводятся в контакт с гепаринизированной плазмой или сывороткой крови реципиента (одна или две капли каждая). Более быстрая версия пробы, использующая мазки крови, менее пригодна, так как только сыворотка или плазма с высоким титром антиэритроцитарных антител будет демонстрировать агглютинацию или гемолиз (видимый уже через несколько минут) (Рисунок 3). При выполнении в лабораторных пробирках или на хороших платах тест занимает больше времени, зато позволяет определить низкий титр антиэритроцитарных антител при агглютинации или гемолизе (Рисунок 4-6). Такие реакции указывают на несовместимость групп крови донора и реципиента.

Рисунок 3 Метод приготовления четких слайдов, использованный для тестирования совместимости крови. Одна капля (50-100 мкл) сыворотки или гепаринизированной плазмы и одна капля 3-5% суспензии эритроцитов в физ. растворе помещаются на каждое предметное стекло. На слайде 1 можно видеть гемагглютинацию, на слайде 2 - отрицательную или контрольную реакцию и на слайде 3 - гемолиз.

Рисунок 4 Пробирочный метод для тестирования совместимости крови. Две капли (100-200 ил) сыворотки или гепаринизированной плазмы и две капли 3-5% эритроцитарной суспензии в физ. растворе поменяются в каждую пробирку. Гемагглютинация может быть видна в пробирке 1, отрицательная или контрольная реакция - в пробирке 2, и гемолиз - в пробирке 3.

Рисунок 5 Метод микротитровальных плат,использованный длятестирования совместимости крови, иллюстрирующий гемагглютинацию.25 ил сыворотки или гепаринизированной плазмы и 25 ил 3% суспензии эритроцитов в физ. растворе добавляются в каждую лунку. Микротитровальную плату затем помещают в термостат при 37С и результат реакции виден через 15 и 30 минут. Плата слегка наклоняется, позволяя небольшой массе осажденных на дне лунки эритроцитов подойти к "линии", указывающей на отрицательную реакцию (номера лунок А2; В1, 2, 3, 4, 5; Cl, 2, 3, 4. 5, 6, 7; D7). Положительные реакции наблюдают в тех лунках, где небольшая масса осадка эритроцитов в "полулунной "форме (агрегат) видна на нижней стороне лунки (номера лунок А), 3, 4, 5. 6, 7; В6, 7; DI, 2, 3, 4, 5, 6).

Рисунок 6 Метод микротитровальных плат, использованный для тестирования совместимости крови, иллюстрирующий гемолиз. 25 ил сыворотки или гепаринизированной плазмы и 25 ил 3% суспензии эритроцитов в физ. растворе добавляются в каждую лунку. Температура инкубации и время чтения реакции, как на Рисунке 5. Отрицательные реакции наблюдаются в лунках, где пока еще может быть видна осажденная эритроцитарная масса (номера лунок А1, 2, 3, 4, 5, 6, 7; С4, 5; D4, 5, 6, 7). Положительные реакции можно наблюдать в лунках с одинаковым розовым окрашиванием, где эритроцитарная масса исчезала вследствие гемолиза (номера лунок В1, 2, 3, 4, 5, 6, 7; Cl, 2, 3, 6, 7; DI, 2, 3).

Малая перекрестная проба

Она идентична большой перекрестной пробе, но при проведении теста используются эритроциты от реципиента и сыворотка или гепаринизированная плазма от донора. В этой пробе та же иммунологическая позитивная реакция указывает на несовместимость групп крови донора и реципиента.

Перекрестная проба для собак, если позволяет время, должна быть выполнена при трех различных температурах 4°С, 25°С и 37°С или, по крайней мере, при 25°С. При проведении пробы в лабораторных пробирках мягкое центрифугирование (т. е. 1.000 g в течение 2 минут) после контакта промытых эритроцитов с сывороткой крови поможет демонстрации гемолиза (3, 4, 6, 7). Эта перекрестная проба обязательна для всех собак, которым ранее делали переливание, и для каждой кошки. Даже если группа крови реципиента и/или донора-кошки уже известна как АВ, здесь могут быть естественные или иммунные антитела, связанные с другими факторами группы крови, которые не были до сих пор хорошо определены у кошек (3,4,6-8).