- •Практический навык по микробиологии
- •Обязанности студентов и дежурных по окончании работы:
- •Самостоятельная работа студентов на лабораторных занятиях:
- •Микроскопирование
- •Окончание работы (микроскопирования)
- •Микробиология как наука Бактериоскопический метод исследования. Простые методы окраски Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Приготовление мазка
- •Простые методы окраски
- •Морфология и ультраструктура бактериальной клетки Окраска по Граму
- •Сложные методы окраски
- •Морфология и ультраструктура бактериальной клетки (продолжение). Особенности морфологии актиномицетов, спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм Окраска по Цилю-Нильсену
- •Сложные методы окраски
- •Физиология прокариот Окраска по Нейссеру
- •Сложные методы окраски
- •Физиология прокариот (продолжение). Бактериофаги Культуральный метод исследования. Фаготипирование бактерий
- •Первый этап культурального метода исследования – получение изолированного роста чистой культуры
- •Второй этап культурального метода исследования – накопление чистой культуры
- •Третий этап культурального метода исследования – окончательная идентификация чистой культуры
- •Изучение культуральных признаков
- •Фаготипирование бактерий.
- •Генетика бактерий Изучение бактерий в живом состоянии
- •Приготовление препаратов для изучения микроорганизмов в живом состоянии.
- •Метод «раздавленной» капли.
- •Этапы приготовления препарата «раздавленная капля»
- •Экология микроорганизмов Изучение микрофлоры ротовой полости
- •Приготовление мазка из зубного налета
- •Окраска мазка простым методом с использованием метиленового синего:
- •Основы учения об инфекции Биологический метод исследования
- •Микробиологические основы химиотерапии бактериальных инфекций Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Качественный метод определения чувствительности бактерий к антибиотикам (метод дисков).
- •Иммунология
- •Иммунология как наука. Естественный иммунитет Оценка функционального состояния фагоцитов
- •Иммунная система организма человека Определение активности системы комплемента
- •Клеточный иммунный ответ. Антигены Пластинчатая реакция агглютинации
- •Гуморальный иммунный ответ. Иммуноглобулины Объемная реакция агглютинации
- •Аллергия (гиперчувствительность) Реакция преципитации Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней. Возрастные особенности иммунитета
- •Серологические реакции с использованием метки.
- •Постановка прямой и непрямой риф.
- •Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Медицинская бактериология с основами микологии и протозоологии
- •Вибрионы. Бруцеллы. Франциселлы. Yersinia pestis. Бациллы Микробиологическая диагностика холеры, бруцеллеза, туляремии, чумы, сибирской язвы Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
- •Микобактерии. Актиномицеты. Листерии
- •Спирохеты. Бартонеллы. Ориенции. Эрлихи. Риккетсии. Хламидии. Микоплазмы
- •Экологическая группа арбо- и робовирусов. Рабдовирусы. Реовирусы
- •Содержание
- •Для заметок Для заметок
- •Тетрадь для лабораторНых работ по микробиологии
Гуморальный иммунный ответ. Иммуноглобулины Объемная реакция агглютинации
Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
1. Постановка и учет объемной реакции агглютинации для определения титра антител.
Алгоритм постановки и учёта объемной (развернутой) реакции агглютинации для определения титра антител.
В агглютинационные пробирки предварительно разливают по 1 мл изотонического раствора натрия хлорида.
В первую из них доливают 1 мл сыворотки, разведенной 1:100, и, смешав ее, 1 мл переносят во вторую, из второй - в третью пробирку и т.д.
Получив двукратные разведения сывороток ((двукратные – 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024), вносят в них по 1 - 2 капли антигена (1-2 млрд бактерий).
Контролями служат изотонический раствор натрия хлорида с антигеном и исследуемая сыворотка без него.
Пробирки энергично встряхивают и помещают на 2 ч в термостат при температуре
37 °С, затем ведут предварительный учет, начиная с контрольных.
Отсутствие агглютинации в контрольных пробирках и наличие взвешенных хлопьев в двух-трех и более пробирках опыта свидетельствует о положительной реакции.
Окончательные результаты учитывают через 18 - 20 ч, выдерживая штатив с пробирками при комнатной температуре.
Интенсивность реакции выражается плюсами: "++++" – сыворотка прозрачная, с хлопьевидным осадком склеившихся бактерий на дне пробирки; "+++","++" и "+" –убывающие просветления с уменьшением бактериального осадка.
Заостряя внимание на образовании и характере осадка, следует указать, что атрихиальные бактерии и риккетсии, имеющие лишь соматические антигены, склеиваются через 18 - 20 ч с образованием мелкозернистых, трудно разбиваемых при встряхивании осадков; жгутиконосные бактерии агглютинируются спустя 2 - 4 ч в виде рыхлых, легко взбиваемых хлопьев.
Занятие № 15
Аллергия (гиперчувствительность) Реакция преципитации Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
Постановка и учет реакции преципитации по Асколи.
Алгоритм проведения РП по Асколи
В узкую пробирку диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой в количестве 0,3 -0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой с тонко оттянутым капилляром медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена.
Пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально.
При правильном наслоении преципитиногена на сыворотку возникает четкая граница между двумя слоями жидкости.
Реакцию учитывают в зависимости от вида антигена и антител через 5-10 мин, 1 - 2 ч или через 20 - 24 ч.
При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде кольца белого цвета.
Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.
Реакция преципитации в геле
РПГ ставится на гелевых пластинах или на чашках Петри (метод Оухтерлони).
В качестве геля для реакции используют 1 % хорошо отмытый прозрачный агар.
Антигены и сыворотки вносятся в агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии.
Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитела и антигены образуют иммунологический комплекс в виде белой полосы.
При наличии сложного по составу преципитиногена его предварительно делят на составные компоненты в реакциях иммуноэлектрофореза.
Занятие № 16
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ. ОСОБЕННОСТИ ТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО И ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУНИТЕТА
Реакция связывания комплемента, оценка иммунного статуса
Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
1. Постановка и учет основного опыта реакции связывания комплемента (РСК).
Алгоритм постановки основного опыта реакции связывания комплемента
Реакция ставится в общем объеме 1,0 мл, каждый из ингредиентов добавляется в рабочей дозе, содержащейся в 0,2 мл.
Берут шесть пробирок:
в первую пробирку вносят исследуемую сыворотку (пациента), антиген и комплемент (опытная пробирка),
во вторую – положительную сыворотку, антиген и комплемент (положительный контроль),
в третью - отрицательную сыворотку, антиген и комплемент (отрицательный контроль),
в четвертую - исследуемую сыворотку, комплемент и вместо антигена изотонический раствор натрия хлорида (контроль сыворотки),
в пятую - антиген, комплемент и 0,85 % раствор натрия хлорида вместо сыворотки (контроль антигена),
в шестую – только 0,6 мл 0,85 % раствор натрия хлорида (контроль гемсистемы).
Одновременно готовят гемолитическую систему, смешивая равные объемы гемолитическую сыворотку в тройном титре и 3 % взвесь эритроцитов барана.
Пробирки ставят в термостат при температуре 37 0С на 1 ч.
Затем во все пробирки добавляют по 0.4 мл гемолитической системы (индикаторная система). После тщательного смешивания ингредиентов пробирки вновь ставят в термостат при 37 °С на 1 ч.
Результаты учитывают после извлечения из термостата и окончательно - после 15 - 18 ч нахождения реакции в холодильнике.
При окончательном учете интенсивность реакции связывания комплемента учитывают по факту отсутствия реакции гемолиза, отмечает плюсами:
"++++" - резко положительная реакция с полной задержкой гемолиза, жидкость в пробирке бесцветная, все эритроциты осели на дно;
"+++", "++" - положительная реакция, отличается нарастанием окраски жидкости вследствие гемолиза уменьшения количества эритроцитов в осадке;
"+" - слабо положительная реакция, жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки незначительное количество эритроцитов.
Отрицательная реакция связывания комплемента обозначается знаком "–" при этом наблюдается полный гемолиз, жидкость в пробирке имеет интенсивно-розовую окраску («лаковая кровь»). Во всех контрольных пробирках, за исключением положительного контроля сыворотки и контроля гемсистемы при правильной постановке РСК должен наблюдаться гемолиз.
В настоящее время РСК ставят не в пробирках, а в специальных планшетах, внося в лунки планшета те же самые компоненты реакции и в той же самой последовательности, но объем компонентов РСК, вносимых в каждую из лунок значительно меньше (как минимум в 10 раз).
Занятие № 17