Практична робота

Дослід 1. Визначення активності холінестерази в сироватці крові титраметричним методом Мішеля.

Принцип методу. Визначення грунтується на ферментативному гідролізі ацетилхоліну з утворенням ацетатної кислоти, яку визначають титруванням за допомогою натрію гідроксиду.

Матеріальне забезпечення: 1,5% ацетилхолін, 1% фенолфталеїн, 0,01М натрію гідроксид, термостат, пробірки.

Хід роботи: В дві пробірки вносять по 1мл ацетилхоліну 1,5%, далі в одну з них (дослідну) додають 1 мл досліджуваної сироватки, а в другу пробірку (контрольну) додають 1 мл попередньо інактивованої (при 56С протягом 30 хв) сироватки. В кожну із пробірок вносять 2 – 3 краплі фенолфталеїну, після чого проводять титрування за допомогою 0,01М натрію гідроксиду.

Розрахунок. Вираховують різницю V=V_д  V_к ,

де V_д – кількість мл 0,01М NaOH, яка пішла на титрування дослідної проби;

V_к – кількість мл 0,01 М NaOH, яка пішла на титрування контрольної проби.

Нормальні величини: 2 – 4 мл 0,01М натрію гідроксиду, який пішов на титрування 1мл сироватки.

Нормальні значення активності: 45 – 95 мкмоль/с·л.

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. Активність холінестерази (ХЕ) у здорових людей може значно коливатися, проте у однієї і тієї самої особи вона досить стабільна. ХЕ ( бутирилхолінестераза ) належить до секреторних ензимів клітин печінки. На відміну від більшості інших ензимів її активність у крові при захворюваннях цього органу знижується, оскільки порушується синтез ензиму в гепатоцитах. Значне зниження активності ХЕ спостерігається при гострих і хронічних гепатитах, цирозах печінки, злоякісних пухлинах печінки.

Визначення активності ХЕ у сироватці крові використовують найчастіше як прогностичний критерій при гострих і особливо хронічних ураженнях паренхіми печінки фосфаторганічними отрутами. Ступінь зниження активності ензиму відображає важкість і поширення ураження печінкових клітин.

Активність ХЕ у сироватці незначно підвищується при деяких психічних захворюваннях, особливо при маніакально-депресивному психозі, стані тривоги та депресивних неврозах, при шизофренії, розсіяному склерозі, особливо у пацієнтів з прогресуючою формою патологічного процесу, який супроводжується чіткою демієлінізацією.

Значне підвищення активності АХЕ у навколоплідних водах може свідчити про серйозні ураження нервової системи плода.

Контроль виконання лабораторної роботи

1. У чому полягає принцип методу Мішеля визначення активності холінестерази у сироватці крові?

А. У окисненні пара-фенілендіаміну з утворенням кольорової сполуки

В. У кольоровій реакції з пікриновою кислотою у лужному середовищі

С. В утворенні з феруму нітратом (ІІІ) сполуки пурпурового кольору

Д. В утворенні інтенсивного синього забарвлення, внаслідок взаємодії з реактивом Фоліна

Е. У ферментативному гідролізі ацетилхоліну з утворенням ацетатної кислоти, яку визначають титруванням натрію гідроксидом

2. Вказати нормальні значення активності холінестерази в сироватці крові:

А. 10 – 15 мкмоль/(с-л)

В. 12 – 30 мкмоль/(с-л)

С. 45 – 95 мкмоль/(с-л)

D. 98 – 115 мкмоль/(с-л)

Е. 105 – 145 мкмоль/(с-л)

3. Для хворих з недостатністю тіаміну характерний ряд неврологічних симптомів: втрата рефлексів, збудливість, спутаність свідомості. Поясніть, чому нестача тіаміну відбивається на функції мозку?

4. Відомо, що глікоген, який складає енергетичний запас організму, відкладається про запас у печінці та м”язах, але не створює резерву у такій важливій тканині як мозок, яка у великій кількості використовує глюкозу. Поясніть, чому глікоген не запасається у мозку?