- •Методическая разработка
- •2 Курса фпсзс по биологической химии
- •Тема: Белки 4. Нуклеопротеиды. Структура и функции информационных макромолекул.
- •1. Переваривание и всасывание нуклеопротеидов в желудочно-кишечном тракте. Характеристика и функции “ядерных” белков.
- •2. Мононуклеотиды как структурные компоненты нуклеиновых кислот (нк), их основные функции:
- •2.1. Переносчики энергии - атф, гтф.
- •2.2. Коферменты - nad, nadp, fad, fmn.
- •2.3. Мессенджеры гормональных и др. Сигналов - цАмф, цГмф.
- •3. Метаболизм (синтез и распад) пуринов и пиримидинов. Реакции, ферменты, регуляция.
- •De novo синтез пуриновых нуклеотидов
- •4. Биосинтез амф и гмф. Реакции, ферменты, регуляция.
- •6. Особенности строения и роль различных видов рнк - информационной, рибосомальной, транспортной, вирусной.
- •8. Полиморфизм вторичной структуры днк - а, в и z формы.
- •9. Механизмы хранения и передачи наследственной информации - репарация, репликация (строение репликативной вилки), транскрипция, трансляция, характеристика основных ферментов и кофакторов.
- •10. Этапы биосинтеза днк - инициация, элонгация, терминация, роль днк-полимераз.
- •11. Биосинтез рнк, его регуляция, роль рнк-полимераз. Процессинг рнк, его биологическое значение. Альтернативный сплайсинг. Регуляция экспрессии генов иммуноглобулинов.
- •Транскриптон (оперон) - единица транскрипции.
- •Процессинг рнк Кэпирование и полиаденилирование иРнк называетсяпроцессингом (посттранскрип-ционной модификацией).
- •Нарушение обмена пиримидиновых нуклеотидов также приводит к болезням.
Нарушение обмена пиримидиновых нуклеотидов также приводит к болезням.
Заболевания, связанные с нарушением обмена пиримидиновых нуклеотидов | ||
Болезнь |
Дефектный фермент |
Коментарий |
Оротовая ацидурия, Тип I |
оротатфосфорибозилтрансфераза и OMФ декарбоксилаза |
Кристаллы оротовой кислоты в моче, отставание в развитии, Мегалобластическая анемия. |
Оротовая ацидурия, Тип II |
ОМФ декарбоксилаза |
Мегалобластическая анемия |
Оротовая ацидурия, (умеренная, без гематологических осложнений) |
Недостаточность орнитин транскарбомоилазы из цикла образования мочевины
|
Повышенное образование карбамоилфосфата в митохондриях увеличивает биосинтез пиримидинов; печеночная энцефалопатия |
-амино-изобутиратацидурия |
Трансаминаза, затрагивает цикл мочевинообразования |
Мягкое течение, распространено на востоке |
Лекарственная оротат ацидурия |
ОМФ декарбоксилаза |
аллопуринолом и 6-азауридином вызывают оротат ацидурию без гематологического компонента; их продукты их распада тормозят OMФ декарбоксилазу |
Конечными продуктами метаболизма пиримидинов являются хорошо растворимые в воде соединения, такие, как СО2, аммиак, -аланин и -изопропионат. Поэтому клинические симптомы при их усиленном образовании проявляются слабо.
4. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ЗАНЯТИЯ
Лабораторная работа:
№1. Качественные реакции на продукты гидролиза нуклеопротеидов.
Грицук А.И. Практическая биохимия: Учебное пособие ч.1. – Гомель, 2002. – С. 83–88.
5. ХОД ЗАНЯТИЯ.
5.1 Проведение устного теоретического опроса.
5.2 Проведение письменного контроля по теоретическим знаниям.
5.3 Выполнение лабораторной работы.
5.4 Выводы по лабораторной работе. Подведение итогов.
Лабораторная работа №1. Качественные реакции на продукты гидролиза нуклеопротеидов (белки, углеводы, пуриновые основания, фосфат).
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на проведении специфических реакций на компоненты нуклеопротеидов дрожжей, получаемых путем их гидролиза: полипептиды, пуриновые основания, углеводы и фосфат.
ВНИМАНИЕ: Соблюдать меры безопасности при работе с концентрированной серной кислотой и кипячением на водяной бане.
ХОД РАБОТЫ.
а) Биуретовая реакция на полипептиды.
К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора NaOH, затем 2 капли 1% раствора CuSO4. Образуется комплекс фиолетового цвета.
б) Серебряная проба на пуриновые основания.
К 10 каплям гидролизата приливают 10 капель концентрированного аммиака (!), затем добавляют 10 капель 2% аммиачного раствора нитрата серебра. При стоянии через 3-5 минут образуется светло-коричневый осадок серебряных солей пуриновых оснований.
в) Качественная реакция на пентозу (Молиша).
К5 каплям гидролизата добавляют 3 капли 1% спиртового раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно наслаивают 20 капель концентрированной серной кислоты (!). При встряхивании на дне пробирки образуется продукт конденсации фурфурола с тимолом красного цвета.
г) Качественная реакция на углеводы.
К 5 каплям гидролизата дрожжей приливают 3 капли 0,2% спиртового раствора альфа-нафтола и 20 капель концентрированной серной кислоты (!). Наблюдают появление розово-фиолетового окрашивания.
д) Реакция на дезоксирибозу и рибозу.
К 5 каплям гидролизата дрожжей добавляют 20 капель 1% раствора дифениламина и кипятят на водяной бане в течение 15 минут, при этом образуется сине-зеленое окрашивание, поскольку дифениламин с дезоксирибозой дает синее окрашивание, а с рибозой - зеленое.
е) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.
К 10 каплям гидролизата дрожжей приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят несколько минут на открытом огне спиртовки. При этом жидкость окрашивается в желтый цвет. Пробирку сразу охлаждают в струе холодной воды. На дне пробирки появляется кристаллический лимонно-желтый осадок фосфорномолибденовокислого аммония.
Порядок оформления работы: результаты лабораторной работы записывают в тетрадь в виде таблицы:
Открываемое соединение |
Используемые реактивы |
Продукты реакции |
Чем обусловлена реакция? |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
6. ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ
1 Общим метаболитом синтеза пиримидинов, мочевины и цитруллина является:
а) ацетат; б) карбамоилфосфат; в) формилтетрагидрофолат; г) пропионат; д) пируват; е) аргинино-сукцинат?
2 Гистоны богаты аминокислотами:
а) цис и про; б) фен и тир; в) трп и мет; г) лей и вал; д) лиз и арг; е) глу и асп?
3 Какой триплет находится на аминокислотном конце молекулы тРНК:
а) ЦЦА; б) ЦАА; в) ЦЦЦ; г) АЦЦ; д) ААА; е) ТТА; ж) ГУГ; з) АУГ; и) УГА?
4 Субъединицы рибосом эукариот имеют коэффициенты седиментации:
а) 40S; б) 70S; в) 30S; г) 80S; д) 60S; е) 45S?
5 Какие субстраты утилизирует РНК-полимераза:
а) АТФ, ГТФ, ТТФ, ЦТФ; |
г) АМФ, ГМФ, УМФ, ЦМФ; |
б) АТФ, ГТФ, УТФ, ЦТФ; |
д) дАМФ, дГМФ, дУМФ, дЦМФ; |
в) АДФ, ГДФ, ТДФ, ЦДФ; |
е) дАМФ, дГМФ, дТМФ, дЦМФ? |
6 Назовите короткоживущую нуклеиновую кислоту животных клеток:
а) рРНК; б) гяРНК; в) тРНК; г) рДНК; д) 5S-РНК; е) иРНК?
7 Какие субстраты утилизирует ДНК-полимераза:
а) ГТФ, УТФ, ЦТФ, АТФ; |
г) ГМФ, УМФ, ЦМФ, АМФ; |
б) ЦТФ, ТТФ, ГТФ, АТФ; |
д) дЦМФ, дУМФ, дГМФ, дАМФ; |
в) дАТФ, дЦТФ, дТТФ, дГТФ; |
е) дАДФ, дЦДФ, дТДФ, дГДФ? |
8 Фрагменты Оказаки являются:
а) инициирующим сигналом для репликации ДНК; б) инициирующим сигналом для транскрипции РНК; в) сайтом, связывающим гистон; г) сайтом, связывающим рибосому; д) сайтом, метилирующим ДНК; е) отрезками молекулы ДНК, образующимися на отстающей цепи ДНК?
9 Кор-нуклеосомы содержат:
а) одну копию каждого гистона H2a, H2b, H3, H4; б) две копии каждого гистона H2a, H2b, H3, H4; в) ДНК, ковалентно сшитую с гистонами; г) комплекс гистон-негистоновые белки; д) РНК-полимеразу?
10 Основные этапы процессинга гяРНК эукариот включают:
а) 3’-полиаденилирование; б) совместный сплайсинг экзонов; в) деградацию; г) 5’-кэпирование; д) совместный сплайсинг интронов; е) трансляцию?
11. Какие из следующих факторов не свойственны для транскрипции эукариот:
а) необходимость трех отдельных РНК-полимераз; б) осуществляется в ядрах; в) нуждается в факторах транскрипции; г) осуществляется в направлении 5 3; д) осуществляется в цитоплазме?
12 В каком из процессов используется ДНК-полимераза:
а) транскрипция; б) трансляция; в) полуконсервативная репликация; г) аминоацилирование; д) сплайсинг?
13 Метотрексат – эффективное антилейкозное средство – ингибирует:
а) гексокиназу; б) дегидрофолатредуктазу; в) глюкозо-6-ФДГ; г) РНК-полимеразу; д) ДНК-полимеразу; е) ревертазу?
14 Одним из механизмов мутагенеза является образование димеров тимина, которые характеризуются тем, что:
а) удаляются из генома ферментативным путем; б) образуются при ультрафиолетовом облучении; в) сшивают два комплементарных участка молекулы РНК; г) сшивают две комплементарные цепи ДНК; д) образуются на одной из цепей ДНК?
15 ДНК-лигаза:
а) соединяет фрагменты Оказаки в процессе синтеза ДНК; б) устраняет разрывы одной из цепей ДНК; в) является ревертазой; г) важный фермент в рекомбинации структуры ДНК; д) катализирует конденсацию 5` 3`связи; е) основной фермент репарации?
7. ЛИТЕРАТУРА
Основная
Материал лекций.
Биологическая химия: учебник/ В.К Кухта., Т.С.Морозкина, и др ; под ред. А.Д.Тагановича.- Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. С. 307-369
Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 354–364, 369–394; 1998. С. 96–113, 469–503.
Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 323–327, 331–338.
Дополнительная
Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 2, С. 5–34, 53–92.
Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Высшая школа, 1993. С. 186–254.
Албертс Б. и др. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1994. Т. 2. С. 93–126.
Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. Т. 2. С. 665–674.
Врожденные и приобретенные энзимопатии / Под ред. Т. Ташева. М.: Медицина, 1980. С. 136–141.
Методическая разработка составлена асс. каф. биохимии Громыко М.В.