- •Ферменты 3
- •Содержание:
- ••При знакомстве с материалом по кинетике ферментов могло сложиться впечатление, что кинетика всех
- ••У ферментов, подчиняющимся принципам кинетики Михаэлиса и Ментен с позиций процессов, протекающих в
- ••Поэтому природа вынуждена обратиться к "кооперативным" системам, в которых маленькие изменения в одном
- ••Графически результат работы такой кооперативной системы (график зависимости скорости реакции от концентрации субстрата)
- ••Аллостерический белок определяется как белок, содержащий два или больше топологически различающихся центра связывания
- ••Кооперативность - это модификация константы связывания (Кs)лиганда, белком, предшествующим связыванию другого лиганда. Константы
- •• Км обычно принимается как константа связывания субстрата, поскольку ее проще измерять, чем
- •Значения Vmax и Km определяются при экстраполяции линий до пересечения с осью абсцисс
- ••Два лиганда один из которых влияет на связывание другого, могут быть химически идентичны,
- •У аллостерических ферментов
- ••Центральная линия графика - типичная сигмовидная кривая в отсутствии любого эффектора. В присутствии
- ••Ингибитор увеличил сигмовидную форму, удлиняя «носок» кривой, в то время как активатор оказывал
- ••Денатурация – нарушение пространственной структуры фермента с последующей потерей активности фермента. Денатурация вызывается
- •Инггибиторы бывают обратимые
- ••Следствием такого связывания обратимого ингибитора является эффективное мгновенное действие, но после удаления ингибитора
- •Необратимые ингибиторы известны также как инактиваторы фермента. Они связываются с ферментом, формируя прочные,
- ••Среди примеров необратимо действующих ингибиторов можно назвать диизопропилфторфосфат (ДИПФФ). Это соединение вошло в
- •ДИПФФ ковалентно связывается с гидроксильной группой серина и если эта группа важна в
- •Ацетилсалициловая кислота (известный всем аспирин) является необратимым ингибитором циклооксигеназы- фермента участвующего в синтезе
- •Ингибитором синтеза протеогликанов стенки бактерий является пенилиллин, структура которого напоминает D- аланин, встраиваемый
- •Различают два механизма конкурентного торможения.
- •Если связывание субстрата с АЦ
- •И субстрат и ингибитор не могут одновременно связаться с ферментом. В этом виде
- •Конкурентные ингибиторы не
- •Малоновая кислота тормозит активность дегидрогеназы янтарной кислоты, занимая активный центр на ферменте. Учитывая
- •Конкурентное торможение
- ••Регуляция активности ферментов путем химической модификации: Реакции ограниченного протеолиза, аденилирования, рибозилирования, ацетилирования, фосфорилирования
- •Активность фермента можно изменить путем ковалентной модификации его структуры.
- •Гормональная регуляция активности ферментов
- •Регуляция активности ферментов
- •Аденилатциклазный комплекс
- •В ходе этого процесса образуется небелковое соединение - цАМФ, цАМФ - внутриклеточный гормон
- •См. мультимедийную презентацию- Сигнальная трансдукция.
- •Гормон, циркулирующий в крови, попадает в межклеточную жидкость и контактирует с поверхностью клетки,
- •Уровень, образовавшийся под действием АЦ, цАМФ определяется не только активностью АЦ, но и
- •Наибольшее значение имеет цГМФ. Она образуется под действием гуанилатциклазы, расположенной как в наружной
- •цГМФ оказывает эффекты противоположные цАМФ.
- •Аденилатциклазный механизм
- •Некоторые клеточные ответы на действие гормонов, опосредуемое циклическим АМФ
- •ИФ3 обеспечивает повышение
- •Сигнальные роли ДАГ
- ••Фермент, активируемый ДАГ, называется протеинкиназой С (ПКС) или С–киназой, так как активность его
- ••Связывание диацилглицерола изменяет конформацию протеинкиназы С, что сопровождается повышением ее сродства к ионам
- ••Концентрация С-киназы выше всего в нейронах головного мозга, где, помимо, прочего она фосфорилирует
- •Взаимосвязь цАМФ и ИФ3
- •Изоферменты, их природа,
- •Изоферменты
- •1)скоростью катализа;
- ••Тетрамерный фермент, состоящий из двух кодируемых генетически субъединиц А и В может быть
- •Изоферменты имеют адаптивное значение, т. е. придают специфику метаболизма.
- •Существует 5 изоферментных форм:
- •Остальные изоферменты занимают промежуточное положение.
- •Изменение активности ферментов в онтогенезе.
- •Глюкоза утилизируется анаэробным путем (анаэробный гликолиз), т. к. ткани плода не способны к
- •3. Грудной
- •6. Зрелый.
- •Активная регуляция ферментов возможна - на геномном уровне ( лактозный оперон);
- •Роль ПКС в регуляции
- •Известны два внутриклеточных пути, через которые активированная С- киназа усиливает транскрипцию генов. В
- •Elk-1 связан с короткой последовательностью ДНК (обозначаемой serum response element
- •В другом пути, активация С-киназы приводит к фосфорилированию ингибиторного белка Ik-B, что сопровождается
- •Существует группа соединений, среди которых наиболее хорошо изучены форболовые эфиры, которые являются мощными
- •Метаболизм ферментов
- •Имея высокую молекулярную массу, большая часть ферментов не экскретируется с мочой. Ферменты экскретируемые
- •Активность фермента
- •Понятие "активность фермента" по сути дела идентична понятию "скорость ферментативной" реакции. Ферментативная активность
- •В системе СИ в качестве единицы ферментативной активности используют "катал" (kat). Катал определяется
- •Размерность её слишком велика, на практике пользуются меньшими кратными значениями, начиная с нанокатала
- •В практике лабораторий широко
- •При исследовании кинетики реакций
- •Пример для вычисления активности фермента
- •ферментов у больного ИМ в разные сроки заболевания
- •Номенклатура и классификация ферментов
- •Шифр КФК и ее место в классификации ферментов
- •Каждый подподкласс представляет собой список ферментов. Порядковый номер фермента в этом списке –
- •Оксидоредуктазы
- •Трансферазы
- •Гидролазы (3.0.0.0.)
- •Лиазы(4.0.0.0) 4.1.0.0.Углерод-углерод лиазы 4.1.1.0.Карбокси лиазы 4.1.1.1. Пируватдекарбоксилаза
- •Лигазы (6.0.0.0)
- •Ферменты 4
При исследовании кинетики реакций
используется и такое понятие как
молекулярная активность. Она показывает, сколько молекул субстрата в секунду превращаются в продукт 1 молекулой фермента и используется для сравнительной характеристики активности нескольких ферментов.
Пример для вычисления активности фермента
Исходные данные:25.0 x 10-3
моль л--1 пептида- субстрата, объем реакционной смеси 2.5 мл, 0.50 µг химотрипсина[1]
Через 10 мин:
18.6x 10-3 моль л--1 пептида -субстрата, Объем реакционной смеси 2.5 мл, 0.50 µг химотрипсина.
ферментов у больного ИМ в разные сроки заболевания
Номенклатура и классификация ферментов
•Каждый фермент получает специфический кодовый номер-шифр фермента, отражающий его положение в классификации: первая цифра характеризует класс фермента, вторая –подкласс и третья подподкласс.
Шифр КФК и ее место в классификации ферментов
Каждый подподкласс представляет собой список ферментов. Порядковый номер фермента в этом списке – четвертая цифра кода. Например- показан шифр креатинфосфокиназы – КФ.2.7.3.2. Этот фермент катализирует реакцию фосфорилирования креатина. Систематическое название фермента АТФ: креатинфосфотрансфераза. Рабочее название этого фермента креатинкиназа или креатинфофокиназа
Оксидоредуктазы
Оксидоредуктазы (1.0.0.0.)
1.1.0.0. Действуют на СН-ОН группы доноров
1.1.1.0.НАД+ или НАДФ+ в качестве акцепторов
1.1.1.1.Алкогольдегидрогеназа
1.14.0.0. Действуют на парные доноры при включении в один из них кислорода
1.14.15.0. Один из доноров восстановленный железо-серный белок и включение одного атома кислорода
1.14.15.1. Цитохром Р-450 1.14.15.5. Кортикостерон 18-монооксигеназа
Трансферазы
Трансферазы (2.0.0.0.) 2.1.0.0.Переносят одноуглеродные
группы
2.1.1.0.Метилтрансферазы
2.1.1.1.Никотинамид метилтрансфераза
2.1.1.45. Тимидилат синтаза 2.3.0.0. Ацилтрансферазы 2.3.1.6. Холинацетил трансфераза
Гидролазы (3.0.0.0.)
3.1.0.0.Действуют на эфирные связи 3.1.1.0.Гидролазы эфиров карбоновых кислот
3.1.1.17. Ацетилхолинэстераза
3.2.1.0.Гликозидгидролазы
3.2.1.1.a-амилаза
3.2.1.2. b-амилаза
3.4.0.0.Действуют на пептидные связи 3.4.21.0.Сериновые протеазы
3.4.21.1.Химотрипсин
3.4.21.4.Трипсин
3.4.21.5.Тромбин
Лиазы(4.0.0.0) 4.1.0.0.Углерод-углерод лиазы 4.1.1.0.Карбокси лиазы 4.1.1.1. Пируватдекарбоксилаза
4.2.0.0. Углерод-кислород-лиазы 4.2.1.0. Гидролиазы
4.2.1.11.Енолаза
4.2.1.12.Фосфоглюконатдегидраза