- •Ферменты-2
- ••Выдвинутая в 1913 году Л. Михаэлисом и
- •Структурно-функциональная организация ферментов. Схема
- •Структурно-функциональная организация ферментов.
- •• Активный центр включает в себя:
- ••1 этап: постепенное «причаливание» S к «якорной» площадке F.
- ••Химические связи, действующие при этом:
- ••Якорный участок трипсина представлен длинным узким карманом с отрицательно заряженный Асп в глубине
- ••В гидрофобном кармане, образованном радикалами Гли, Три и Лей, химотрипсина располагается боковая цепь
- ••В основе химических реакций лежит образование и разрыв химических связей
- •Биологически важными нуклеофилами являются –NH2, -OH, -SH, и имидазольные группы аминокислот. Нуклеофильные формы
- ••Электрофильные реагенты :
- ••По направлению реакций с учетом конечного результата можно выделить следующие типы реакций
- ••2. Реакции кислотно- основного взаимодействия
- ••Факторы, определяющие активность ферментов [E], [S], [P], Km.
- •• Существенное влияние на активность ферментов оказывает реакция среды. Для проявления их оптимального
- ••В некоторых случаях сдвиг pH на единицу снижает активность фермента на 80%. Поэтому
- •Оптимум рН
- •Фермент
- •Влияние температуры
- ••Так как все ферменты являются белками, а белки при температуре выше 40-500 С
- ••Активность фермента повышается при повышении температуры. Начиная с определенной температуры, совпадающей с началом
- •Специфичность ферментов
- ••Правда, лишь небольшая часть ферментов обладает абсолютной специфичностью, т.е. катализирует превращение только одного
- •Регуляция активности ферментов
- •Активная регуляция:
- ••Регуляция путем изменения количества фермента.
- ••Замена глюкозы на лактозу приводит к индуцированному синтезу фермента галактозидазы, расщепляющей лактозу на
- ••В животных тканях подобный быстрый синтез ферментов наблюдается реже, однако при поступлении в
- ••С другой стороны, иногда под действием этих гидроксилаз чужеродные вещества превращаются в более
- ••Регуляция активности по принципу обратной связи.
- •Аллостерическая регуляция.
- •Свойства аллостерических ферментов:
- •Существует 2 вида веществ (эффекторы), которые оказывают на фермент двоякое действие:
- ••При взаимодействии аллостерического фермента с аллостерическим активатором резко возрастает степень сродства фермента к
- ••Кинетика
- •Имеется реакция:
- •Основы термодинамики катализа
- •Энергия активации
- •Термодинамика ферментативных
- •Кинетика ферментативных
- •Кинетика ферментативных реакций. pH
- •Кинетика ферментативных реакций. Температура
- ••Активность фермента зависит от концентрации субстратов.
- ••Если концентрация субстрата [S] очень низкая, ограничивающим скорость реакции становится этап образования комплекса
- •• Если концентрация субстрата [S] высокая, количество образующегося комплекса ES зависит от количества
- ••Ограничивающим скорость реакции становится этап образования продукта (катализ). В реакции, катализируемой ферментом имеется
- •Кинетика ферментативных реакций. Концентрация субстрата
- ••Важным для правильной оценки результатов исследования зависимости скорости реакции от концентрации является измерение
- ••При взаимодействии фермента и субстрата очень быстро наступает равновесие между скоростью образования и
- ••В реакции, катализируемой ферментом можно выделить четыре реакции, каждая из которых характеризуется собственной
- ••Важной качественной характеристикой фермента является константа Михаэлиса
- ••тогда, количество свободного фермента: [Et] - [ES]
- ••[этап 2] гипотеза: Образование
- ••Уравнение Михаэлиса и Ментен графически – прямоугольная гипербола
- ••Каково физическое значение Km? Уравнение Михаэлиса-Ментен можно преобразовать к такому виду
- ••Из этого уравнения легко показать, что
- ••Наиболее удобное сочетание эффективности и контроля соблюдается при условии, если концентрация субстрата одного
- ••Знание Км позволит Вам оценивать концентрацию субстрата, необходимую для гарантии насыщения. Эта концентрация
- ••В физиологических условиях, для эффективной работы, концентрация субстрата должна быть на уровне Км
- ••Практически рассчитать значения Км и Vmax, пользуясь кривой, описываемой уравнением Михаэлис и Ментен
- •• Такой способ выражения позволяет более точно рассчитать значения Км и V. Пересечение
- •Примеры использования данных кинетических исследований ферментов в медицине
- ••Альдегиддегидрогеназа обычно существует в двух формах, с высоким сродством (низкие значения Км) к
- ••Семейная пара с генетической предрасположенностью к болезни Неймана- Пика ожидает ребенка. Им известно,
- ••Если сфингомиэлин не распадается должным образом, нарушается нейронная передача. Физиологические последствия болезни Наймана-Пика
- ••Семейная пара с генетической предрасположенностью к болезни Неймана- Пика ожидает ребенка. Им известно,
- ••У беременной были получены клетки плода (путем амниоцентеза) и размножены методом тканевой культуры.
- ••При знакомстве с материалом по кинетике ферментов могло сложиться впечатление, что кинетика всех
- ••У ферментов, подчиняющимся принципам кинетики Михаэлиса и Ментен с позиций процессов, протекающих в
- ••Таким образом, природа вынуждена обратиться к "кооперативным" системам, в которых маленькие изменения в
- ••Аллостерический белок определяется как белок, содержащий два или больше топологически различающихся центра связывания
- ••Кооперативность - модификация константы связывания лиганда белком предшествующим связыванием другого лиганда. Константы связывания
- ••. Км обычно принимается как константа связывания субстрата, поскольку ее проще измерять, чем
- •Значения Vmax и Km определяются при экстраполяции линий до пересечения с осью абсцисс
- ••Два лиганда один из которых влияет на связывание другого, могут быть химически идентичны,
- •У аллостерических ферментов
- ••Аллостерический фермент содержит ряд активных центров, в самом простом случае по одному на
- •• Центральная линия графика - типичная сигмовидная кривая в отсутствии любого эффектора. В
- ••Денатурация – нарушение пространственной структуры фермента с последующей потерей активности фермента. Денатурация вызывается
- •Ингибиторы бывают разные:
- ••Среди примеров необратимо действующих ингибиторов можно назвать диизопропилфторфосфат (ДИПФФ). Это соединение вошло в
- ••Ацетилсалициловая кислота (известный всем аспирин) является необратимым ингибитором циклооксигеназы- фермента участвующего в синтезе
- ••Ингибитором синтеза протеогликанов стенки бактерий является пенилиллин, структура которого напоминает D- аланин, встраиваемый
- ••Предшествующее связывание субстрата к активному центру в свою очередь, вызывает изменения конформации центра
- •Различают два механизма конкурентного торможения.
- •Конкурентные ингибиторы не
- ••Малоновая кислота тормозит активность дегидрогеназы янтарной кислоты, занимая активный центр на ферменте. Учитывая
- •Конкурентное торможение
- ••Регуляция активности ферментов путем химической модификации: Реакции ограниченного протеолиза, аденилирования, рибозилирования, ацетилирования, фосфорилирования
- ••Активность фермента можно изменить путем ковалентной модификации его структуры.
- •Регуляция активности ферментов
- ••Гормон, циркулирующий в крови, попадает в межклеточную жидкость и контактирует с поверхностью клетки,
- ••Уровень, образовавшийся под действием АЦ, цАМФ определяется не только активностью АЦ, но и
- ••цГМФ оказывает эффекты противоположные цАМФ.
- •Изоферменты, их природа,
- ••1) скорстью катализа;
- ••Изоферменты имеют адаптивное значение, т. е. придают специфику метаболизма.
- ••Существует 5 изоферментных форм:
- ••Остальные изоферменты занимают промежуточное положение.
- •Изменение активности ферментов в онтогенезе.
- •Глюкоза утилизируется анаэробным путем (анаэробный гликолиз), т. к. ткани плода не способны к
- •3. Грудной
- •6. Зрелый.
•Денатурация – нарушение пространственной структуры фермента с последующей потерей активности фермента. Денатурация вызывается рядом факторов, включая высокую температуру, экстремальные значения рН и химические денатурирующие реактивы типа мочевины.
Ингибиторы бывают разные:
обратимые и необратимые
•Вещества со свойствами ингибиторов ферментов можно грубо разделить на обратимые и необратимые. Обратимые ингибиторы связываются с ферментом, используя слабые связи, подобные тем, которые используются ферментом в связывании субстрата. Эти связи формируются быстро, но также быстро и легко разрушаются. Следствием такого связывания обратимого ингибитора является эффективное мгновенное действие, но после удаления ингибитора фермент сохраняет свою активность. Ингибитор находится в равновесии с ферментом, формируя комплекс ингибитора фермента:
•
Необратимые ингибиторы известны также как инактиваторы фермента. Они связываются с ферментом, формируя прочные, обычно ковалентные связи: Необратимые ингибиторы известны также как инактиваторы фермента. Они связываются с ферментом, формируя прочные, обычно ковалентные связи:
E+ I = EI
•Среди примеров необратимо действующих ингибиторов можно назвать диизопропилфторфосфат (ДИПФФ). Это соединение вошло в историю энзимологии как соединение использовавшееся для исследования роли химических групп в в структуре активного центра. ДИПФФ ковалентно связывается с гидроксильной группой серина и если эта группа важна в катализе реакции, фермент терял свою активность. Эти исследования позволило выявить группу ферментов, в активном центре которых активную роль играет серин (сериновые протеазы)
•Ацетилсалициловая кислота (известный всем аспирин) является необратимым ингибитором циклооксигеназы- фермента участвующего в синтезе простагландинов.
•Ингибитором синтеза протеогликанов стенки бактерий является пенилиллин, структура которого напоминает D- аланин, встраиваемый в структуру протеогликанов. Связываясь с активным центром фермента бактерии благодаря своей схожести с переходным состоянием промежуточного продукта в активном центре, пенициллин образует ковалентную связь и тормозит работу фермента
•Предшествующее связывание субстрата к активному центру в свою очередь, вызывает изменения конформации центра связывания ингибитора, которое предотвращает связывание ингибитора. И субстрат и ингибитор не могут одновременно связаться с ферментом. В этом виде конкурентного торможения ингибитор может иметь любую химическую структуру, поскольку они связываются с различными участками фермента.
Различают два механизма конкурентного торможения.
1.Конкурентное торможение путем связывания активного центра.
2. Конкурентное торможение путем изменения конформации фермента.
Конкурентные ингибиторы не
влияют на Vmax, они понижают Км.
•Оказывая эффект на:
•Km
•Эффект на Vmax
•Наиболее часто приводимый пример конкурентного ингибирования - это использование малоновой кислоты для торможение дегидрогеназы янтарной кислоты. Наиболее близким структурным аналогом сукцината является малоновая кислота.
•Малоновая кислота тормозит активность дегидрогеназы янтарной кислоты, занимая активный центр на ферменте. Учитывая обратимость реакции, избыток янтарной кислоты снимет действие малоновой кислоты.