Методика определения групп крови

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО осуществляется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время применяется три способа определения групп крови по системе АВО:

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ),

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки, используемые для определения группы крови, соответствуют четырем группам крови 0 (I), А (I I), В (I I I), AB (IV). Их получают из крови, реже из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Используется кровь от доноров, трупная или плацентарная кровь. Кровь отстаивается и забирается сыворотка, к которой добавляется консервант (борная кислота из расчета 3,0 г порошка на 100 мл сыворотки). После отстаивания сыворотка разливается по стерильным ампулам или флаконам, которые сразу же запаиваются или герметично закупориваются.

Требования, предъявляемые к стандартным изогемагглютинирующим сывороткам:

1. агглютинация с соответствующими эритроцитами должна появиться в течение 15-20 с, а через 2 мин. она должна быть четкой;

2. не давать агглютинацию с эритроцитами одноименной и первой групп;

3. титр сыворотки должен быть не ниже 1 : 32;

4. сыворотка должна быть без признаков микробного загрязнения, прозрачной;

5. каждая ампула должна иметь паспорт с обозначением группы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы.

Во избежание ошибок при определении групп крови сыворотки окрашивают в определенный цвет. Окраска стандартных изогемагглютинирующих сывороток: 0(I)- неокрашивается, А(II) - синий цвет, B(III) – розовый, AB(IV)- желтый. Сыворотки хранят герметично закрытыми, в темном месте, лучше в холодильнике.

Понятие о титре

Реакция агглютинации с различными сыворотками и эритроцитами может в одних случаях наступить довольно быстро и быть четко выражена, в других она менее выражена и возникает более медленно. Иногда агглютинация и при большом разведении сыворотки четко выявляется, в других случаях даже слабое разведение приводит к не проявлению её. Все это обусловлено тем, что чувствительность эритроцитов и сыворотки подвержена значительным колебаниям. Под титром агглютинации понимается максимальное разведение сыворотки, при котором еще может наступать реакция агглютинации. При определении титра сыворотки, постоянной величиной являются стандартные эритроциты; при определении титра эритроцитов, постоянной величиной является стандартная сыворотка. Титр понятие относительное, так как титр эритроцитов точно устанавливается только по отношению к испытуемой сыворотке, а титр сыворотки только к испытуемым эритроцитам. К другим эритроцитам он может быть другой, но колебания его обычно бывают небольшими. Однако целый ряд эритроцитов обладает одинаковой чувствительностью, также как и ряд сывороток имеет одинаковый титр. Титр зависит и от метода определения. При определении капельным методом на тарелке у здоровых людей титр сыворотки колеблется в пределах 1:8-1:32. Если титр определяется в пробирках, он получается значительно выше.

Практическое значение имеет тот факт, что титр агглютининов новорожденных крайне низкий, а по мере развития человека он повышается; достигая максимума в возрасте от 5 до 20 лет, дальше он начинает падать. Титр агглютиногенов может меняться при заболеваниях. Повышение его отмечается при ряде воспалительных процессов, резкое снижение бывает при тяжелой общей инфекции. Слабый титр сыворотки отмечен при лейкемии. У здоровых же людей титр сыворотки остается почти неизменным.

ЗАВИСИМОСТЬ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ ОТ

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ

На ход агглютинации может оказывать влияние целый ряд физических и химических факторов.

Температура. При низкой температуре происходит неспецифическая "холодовая агглютинация". Для неё характерно возникновение агглютинации вне зависимости от группы крови. "Холодовая агглютинация" обусловлена наличием в сыворотке особого холодового агглютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах. При температуре выше 20°С он никогда агглютинации не дает. Поэтому несоблюдение температурного режима при определении группы крови может привести к ошибке.

Химические факторы. Течение агглютинации зависит от степени концентрации солевого раствора, в котором находятся эритроциты. Повышение его концентрации приводит к её ослаблению, а при содержании 4, 25 % во взвеси эритроцитов агглютинация уже не наступает. Ускорение агглютинации наблюдается при добавление 10 % раствора лимоннокислого натрия.

Феномен Томсена. Агглютинация, возникающая при взаимодействии одноименных агглютиногенов и агглютининов, является специфической. Неспецифическая агглютинация может быть обусловлена рядом факторов. Одним из видов такой агглютинации является феномен Томсена, описанный в 1927 г. Суть этого феномена заключается в следующем: нестерильно взятые и отмытые эритроциты, независимо от их групповой принадлежности, простояв в течение суток при комнатной температуре, начинают давать агглютинацию с сыворотками всех групп включая собственную. Причина возникновения феномена Томсена - бактериальное загрязнение крови. При микроскопическом исследовании такой агглютинации видно, что эритроциты лежат близко один к другому, а между ними заметны границы, чего нет при истинной агглютинации. Макроскопически агглютинацию при этом феномене нельзя отличить от истинной. Поэтому можно неправильно определить групповую принадлежность крови, все эритроциты будут трактоваться как принадлежащие к группе (AB)IV.

Панагглютинация (аутоагглютинация). Явление неспецифической агглютинации может наблюдаться и в свежей бактериально не загрязнённой крови. Встречается она сравнительно редко и называется панагглютинацией, или аутоагглютинацией. При этом виде агглютинации сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже собственной группы, а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, в том числе с сывороткой группы (AB)IV. Панагглютинация может возникать при целом ряде заболеваний (болезнях крови, септикопиемии, заболеваниях гепатолиенальной системы, пневмонии, нефритах и т. д.), иногда выявляется и у здоровых людей. Панагглютинация возникает только при комнатной температуре, при температуре, близкой к температуре тела, она обычно не наступает. До настоящего времени причина этого явления неизвестна. Макроскопически панагглютинация неотличима от специфической агглютинации.

Псевдоагглютинация. Явление псевдоагглютинации обусловлено склеиванием эритроцитов в монетные столбики независимо от их агглютинабельных свойств. При этом они не разрушаются, мембраны сохраняются, что четко видно под микроскопом. При добавлении 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия псевдоагглютинация исчезает.