§ 10. Метод выделения токсических веществ, основанный на изолировании их водой, подкисленной щавелевой кислотой

В современном химико-токсикологическом анализе для изолирования алкалоидови других токсическихвеществиз биологического материала используетсявода, подкисленнаящавелевой кислотой. На применении этой извлекающейжидкостиоснован метод выделенияалкалоидовпо А. А. Васильевой. Этот метод сыграл определенную роль в развитии химико-токсикологического анализа в нашей стране. Однако метод А. А. Васильевой имеет и ряд недостатков (см. гл. V, § 1). Из-за наличия недостатков оригинальный метод А. А. Васильевой в настоящее время не применяется в химико-токсикологическом анализе. Ниже приводится описание современного метода выделенияалкалоидови других токсическихвеществиз биологического материала, основанный на изолировании ихводой, подкисленнойщавелевой кислотой.

100 г мелко измельченного трупного материала вносят в колбу вместимостью 500 мл. Трупный материал заливают 200 мл воды, подкисленной насыщенным воднымрастворомщавелевой кислотыдо рН = 2,0...2,5. Смесь биологического материала и подкисленнойводыоставляют на 2 ч при периодическомперемешиваниисодержимого колбы. После указанного времени кислую водную вытяжку сливают с трупного материала, который еще раз в течение часа настаивают сводой, подкисленнойщавелевой кислотойдо рН = 2,5, а затем кислую водную вытяжку сливают с трупного материала. Кислые водные вытяжки соединяют и процеживают через двойной слоймарли. Процеженную вытяжку подвергаютцентрифугированию. Надосадочнуюжидкостьиз центрифужногостаканапереносят в делительную воронку. Этужидкость3—4 раза взбалтывают с новыми порциямихлороформа(по 15—20 мл). Хлороформные вытяжки из кислой среды соединяют и исследуют на наличие токсическихвеществ, которые экстрагируютсяхлороформомиз кислой среды.

Оставшуюся в делительной воронке кислую водную вытяжку подщелачивают 25 %-м раствором аммиакадо рН = 10 и 3—4 раза взбалтывают схлороформом(порциями по 15—20 мл). Хлороформные вытяжки из щелочной среды соединяют и исследуют на наличиеалкалоидов, их синтетических аналогов и других органическихвеществосновного характера.

Описанный выше метод, основанный на изолировании токсических веществводой, подкисленнойщавелевой кислотой, имеет ряд преимуществ перед методом изолирования этихвеществэтиловым спиртом, подкисленным той же кислотой. При изолированииалкалоидови других токсическихвеществподкисленнойводойв несколько раз сокращается время анализа. Для выделения токсическихвеществс помощью этого метода не требуется применениеэтилового спирта. Однако описанный выше метод изолирования токсическихвеществнепригоден для выделения из биологического материала соединений, нерастворимых в подкисленнойводе. Кроме этого,данныйметод ограниченно пригоден для выделения токсическихвеществиз загнившегося биологического материала.

§ 11. Метод выделения токсических веществ, основанный на изолировании их водой, подкисленной серной кислотой

Воду, подкисленнуюсерной кислотой, для изолированияалкалоидовиз биологического материала впервые применил Г. Драгендорф в 1865 г. В связи с рядом недостатков (см. гл. V, § 1) метод Драгендорфа не нашел широкого применения в химико-токсикологическом анализе.

В. Ф. Крамаренко изучил основные причины потерь алкалоидовпри выделении их из биологического материала по методу Драгендорфа и по ряду других методов. При этом установлено, что частичная потеряалкалоидовв ходе химико-токсикологического анализа объясняется связыванием этихвеществс биологическим материалом. Потериалкалоидовтакже могут быть в результате неправильного выбора рН извлекающейжидкости, применяемой для изолирования этихвеществиз биологического материала, а также в результате неправильного выбора рН среды при очистке полученных вытяжек и при экстракцииалкалоидовиз предварительно очищенных вытяжек.

Учитывая результаты указанных исследований, В. Ф. Крамаренко предложил описанный ниже метод выделения алкалоидовиз биологического материала. 100 г измельченных органов трупов вносят встаканвместимостью 250—500 мл и заливают 0,02 н.растворомсерной кислотыс таким расчетом, чтобы твердые частицы биологического материала были покрыты этойжидкостью. Содержимоестаканаперемешивают стекляннойпалочкойи с помощью универсальногоиндикаторапроверяют рН среды. Если рН среды превышает 2,5, то к смеси биологического материала и подкисленнойводы.по каплям прибавляют 20 %-йрастворсерной кислотыдо рН-2,5. Содержимоестаканаоставляют на 2 ч при периодическомперемешивании, а затем процеживают черезмарлю. Твердые частицы биологического материала еще дважды настаивают с новыми порциями 0,02 н.растворасерной кислоты, доводя рН до 2,5 и настаивая в течение часа.

Кислые водные вытяжки из биологического материала соединяют, переносят в стакандляцентрифугированиявместимостью 200 мл и центрифугируют. Надосадочнуюжидкостьсливают, а остаток в центрифужномстаканеперемешивают стекляннойпалочкойи заливают 20—30 мл 0,2 н.растворасерной кислоты. Содержимое центрифужногостакананастаивают в течение 2 ч и центрифугируют. Надосадочнуюжидкостьприсоединяют к ранее полученной надосадочнойжидкости. Объединенные надосадочныежидкости(центрифугат А) подвергают дальнейшему исследованию.

1. При исследовании загнившегося биологического материала на наличие токсических веществк центрифугату А прибавляют кристаллическийсульфат аммониядо насыщенияжидкостиэтимэлектролитом. Через 1—2 ч образующийся осадок примесей отделяют отжидкостицентрифугированием. Надосадочнуюжидкостьсливают с осадка и проверяют степень кислотности этойжидкости. При необходимостижидкостьдоводят до рН = 2,0...2,5 прибавлением 10 %-горастворасерной кислоты. Подкисленную до рН = 2,0...2,5жидкостьдважды взбалтывают сдиэтиловым эфиром(по 40 мл). Эфирные вытяжки, содержащие примеси, отделяют от кислой водной фазы и в дальнейшем не исследуют.

Кислую водную фазу подщелачивают 20%-м растворомгидроксида натриядо рН = 8,5...9,0 и 3 раза взбалтывают схлороформом(объемхлороформа, взятый для каждой экстракции, должен быть в три раза меньше объема водной фазы). Хлороформные вытяжки соединяют, профильтровывают и на водяной бане отгоняютхлороформдо небольшого объема (10—15 мл). Оставшийсяхлороформвыпаривают навоздухедосуха. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,1 н.растворасоляной кислоты. В полученномраствореопределяют наличиеалкалоидов.

Если растворсухого остатка в 0,1 н.растворесоляной кислотыимеетбуруюокраску или содержит окрашенные взвешенные частицы, то его 1—2 раза взбалтывают с равным объемомизоамилового спирта. Этотспирт, содержащий примеси, отделяют от кислой водной фазы, в которой определяют наличиеалкалоидови других токсическихвеществ.

2. При исследовании незагнившегося биологического материала осаждениепримесей из вытяжексульфатом аммонияне производится, Центрифугат А дважды взбалтывают сдиэтиловым эфиромпо 30 мл. Эфирные вытяжки отделяют и в дальнейшем не исследуют. Кислую водную фазу подщелачивают 20%-мрастворомгидроксида натриядо рН = 8,5...9,0 и 3 раза взбалтывают схлороформом(объемхлороформадля каждой экстракции должен быть в 3 раза меньше, чем объем водной фазы). Хлороформные вытяжки соединяют ихлороформотгоняют на водяной бане до небольшого объема (10—15 мл). Оставшийсяхлороформнавоздухевыпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,1 н.растворасоляной кислоты. В полученномраствореопределяют наличиеалкалоидови других токсическихвеществ.

3. В тех случаях, когда биологический материал подвергают исследованию на наличие ядовитых веществ, экстрагирующихся из кислых водных вытяжек, центрифугат А доводят 20 %-мрастворомгидроксида натриядо рН = 4...5 и 3 раза взбалтывают схлороформом(объемхлороформадолжен быть в 3 раза меньше, чем объем водной фазы). Хлороформные вытяжки соединяют и отгоняютхлороформ, как указано выше. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,1 н.растворасоляной кислоты. В этомраствореопределяют наличие ядовитыхвеществ, экстрагирующихся из кислой среды.

ВЕЩЕСТВА, ЭКСТРАГИРУЕМЫЕ ОРГАНИЧЕСКИМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ ИЗ КИСЛЫХ ВОДНЫХ ВЫТЯЖЕК

К этой группе токсических веществотносятся барбитураты, производныексантина, отдельныеалкалоидыи некоторые другие ядовитые соединения.