к экзамену / шпора до 40

Билет 43

1. Методы культивирования микоплазм, риккетсий, хламидий. среды, методика.

Микробиологическая диагностика туберкулеза

Возбудители туберкулеза — Mycobacterium tuberculosis,

М. bovis — являются кислотоустойчивыми бактериями, характеризующимися медленным ростом на питательных средах. Заражение происходит воздушно-капельным путем, иногда через желудочно-кишечный тракт.

Основные методы, применяемые для микробиологической диагностики туберкулеза, приведены на схеме 8.

Методические указания

Материал для исследования: мокрота, экссудат, гной, промывные воды бронхов, желудка, ликвор, моча. Для консервации и ингибиции сопутствующей микрофлоры патологический материал перед транспортировкой в лабораторию обрабатывают 10% раствором фосфата натрия.

Бактериоскопическое исследование (схема 8). Мокроту помещают в чашки Петри и ставят на черную поверхность. Петлей или препаровальными иглами выбирают гнойный комочек, переносят его на предметное стекло ближе к одному из концов и, растирая между двумя стеклами, готовят мазок. Ликвор отстаивают в холодильнике и готовят мазки из нежной пленки фибрина, в которой находятся микобактерии туберкулеза и клеточные элементы. Мочу центрифугируют

и делают мазки из осадка. Препараты из мочи обязательно обесцвечивают не только кислотой, но и спиртом для дифференциации микобактерий туберкулеза от М. smegmatis, которые могут находиться в моче здоровых людей. В отличие от микобактерий туберкулеза они обесцвечиваются спиртом.

Мазки окрашивают по Цилю — Нельсену и микроскопируют, просматривая до 100 полей зрения в препарате. Микобактерии туберкулеза окрашиваются в ярко-красный цвет, располагаются поодиночке или небольшими скоплениями (см. рис. 17). Единичные бактерии можно обнаружить в препарате, если их содержание не менее 10⁵ в 1 мл мокроты. Поэтому при небольшом содержании микобактерий туберкулеза в материале применяют методы «обогащения» — гомогенизации и осаждения или флотации.

Метод гомогенизации и осаждения. К суточной порции мокроты добавляют равный объем 1%раствора едкого натра (или антиформина) для гомогенизации, флакон плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают в течение 10—15 мин После центрифугирования и нейтрализации кислотой из осадка готовят мазки и окрашивают по Цилю — Нельсену.

Метод флотации. Мокроту гомогенизируют и прогревают при 55°С в течение 30 мин на водяной бане. Затем добавляют 1—2 мл ксилола, дистиллированную воду, повторно встряхивают в течение 10 мин и отстаивают 20 мин при комнатной температуре. На поверхности образуется пена, состоящая из всплывших капелек ксилола с адсорбированными микробами. Пипеткой или петлей из пенообразного слоя готовят мазок, несколько раз наслаивая материал на предметное стекло по мере его высыхания. Мазок обезжиривают эфиром, фиксируют нагреванием и окрашивают по Цилю—Нельсену.

Применение люминесцентной микроскопии повышает число находок микобактерий туберкулеза в патологическом материале.

Микроскопическое исследование является ориентировочным и позволяет судить лишь о наличии кислотоустойчивых бактерий в материале без определения видовой и типовой принадлежности.

Бактериологическое исследование. Для посева используют предварительно обработанный Na₃P0₄ исследуемый материал; необработанный материал непосредственно перед посевом в течение нескольких минут подвергают действию 10% серной кислоты или 4 — 6% раствора едкого натра для освобождения от сопутствующей микрофлоры, затем тщательно встряхивают и центрифугируют. Осадок нейтрализуют и засевают на несколько пробирок со средой Левенштейна — Иенсена или другими специальными средами. Среду Левенштейна — Иенсена готовят из суспензии свежих яиц, картофельной муки, глицерина, аспарагина, КН₂Р0₄, сульфата и цитрата магния и малахитового зеленого. Среду свертывают в наклонном положении при 85°С в течение 45 мин. Посевы инкубируют при 37°С 4 — 6 нед и более, так как микобактерии туберкулеза размножаются очень медленно, особенно в первых генерациях. Культуры этих микобактерий имеют вид сероватого или светло-кремового морщинистого или крошкообразного сухого налета (рис. 70).

При идентификации выделенной культуры микобактерий туберкулеза и дифференциации ее от потенциально-патогенных микобактерий учитывают морфологические и тинкториаль- ные особенности, характер и скорость роста на питательных средах, биохимические свойства и вирулентность для лабораторных животных. Из биохимических свойств чаще всего определяют способность исследуемой культуры синтезировать никотиновую кислоту (ниациновая проба Конно). Это один из важных признаков, с помощью которого удается отличить Mycobacterium tuberculosis, хорошо синтезирующие никотиновую кислоту, от палочек М. bovis, образующих ее в минимальных количествах.

Для определения ниацина к культуре микобактерий в жидкой питательной среде добавляют 1 мл раствора KCN и 1 мл 5% раствора хлорамина. При наличии ниацина через несколько минут появляется ярко-желтая окраска. Для нейтрализации KCN после учета результатов реакции в пробирке добавляют 3—5 мл 10 % раствора гидрокарбоната натрия.

Для ускорения диагностики используют метод микрокультур Прайса. На нескольких предметных стеклах (ближе к одному концу) делают толстые мазки из исследуемого материала. Мазки высушивают, обрабатывают несколько минут 2-6% серной кислотой и нейтрализуют. Затем стекла опускают во флаконы с гемолизированной цитратной кровью в разведении 1:4 — 1:8 и ставят в термостат. Через 7 — 14 дней извлекают стекла, фиксируют препарат, окрашивают по Цилю — Нельсону и микроскопируют (рис. 71) —вирулентные штампы образуют микрокультуры, имеющие вид жгутов или кос (корд-фактор).

Определение чувствительности микобактерий туберкулеза к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам проводят методом серийных разведений. С этой целью по ОД мл взвеси микобактерий туберкулеза засевают в пробирки со средой Левенштейна — Иенсена, содержащей различные концентрации антибактериальных препаратов первого и второго ряда: 5, 10, 50 мкг/мл стрептомицина; 5, 10, 50, мкг/мл ПАСК; 1, 5, 10, 25 мкг/мл тубазида; 30 мкг/мл циклосерина и этионамида. Учитывают результаты на 12 —21-й день инкубации. Клинические границы устойчивости микобактерий туберкулеза: стрептомицин — 5 мкг/мл, ПАСК—10 мкг/мл, тубазид — 1 мкг/мл, циклосерин и этионамид — 30 мкг/мл.

Биопроба. Применяется при первичной диагностике с целью выделения чистой культуры микобактерий туберкулеза из органов животного, зараженного исследуемым материалом, а также для определения вирулентности этих микобактерий. Исследуемый материал обрабатывают серной кислотой для освобождения от посторонней микрофлоры, нейтрализуют и вводят подкожно в количестве 2—3 мл морской свинке с отрицательной туберкулиновой реакцией. Через 4 мес, если животное не погибнет, его забивают, проводят макро- и микроскопическое исследование органов и делают посевы. М. tuberculosis высокопатогенны для морских свинок и малопатогенны для кроликов, М. bovis непатогенны для морских свинок и кроликов.

Микробиологическая диагностика риккетсиозов

Материалом для выделения возбудителей при всех видах риккетсиозов служит кровь, взятая у больного в возможно раннем периоде лихорадки (схема 20). Однако выделение риккетсий с диагностической целью практически не производится, поскольку они размножаются только в клеточных культурах и куриных эмбрионах, а для выделения риккетсий Провацека приходится предварительно заражать кровью вшей

Биопроба. Применяется для дифференциации возбудителей эндемических риккетсиозов от риккетсий Провацека. Для этого самцу морской свинки внутрибрюшинно вводят кровь боль ного. При большинстве эндемических риккетсиозов у животных развивается специфический периорхит, сопровождающийся накоплением риккетсий в мезотелии влагалищных оболочек яичка.

Для обнаружения риккетсий в переносчиках, органах зараженных животных и клеточных культурах готовят препараты, окрашивают их по Здродовскому и микроскопируют. Рик- кетсии Провацека полиморфны. В зависимости от стадии инфекции, вида клеточной культуры различные морфологические типы риккетсий обнаруживаются в цитоплазме и ядрах зараженных клеток (рис. 82). Использование иммунофлюорес- центного метода облегчает обнаружение риккетсий.

2. Особенности вирусного, бактериального, опухолевого, трансплантанционного иммунитета

Противовирусный иммунитет. Основой противовирусного иммунитета является клеточный иммунитет. Клетки-мишени, инфицированные вирусом, уничтожаются цитотоксическими лимфоцитами, а также NK-клетками и фагоцитами, взаимодействующими с Fc-фрагментами антител, прикрепленных к вирусспецифическим белкам инфицированной клетки. Противовирусные антитела способны нейтрализовать только внеклеточно расположенные вирусы, как и факторы неспецифического иммунитета — сывороточные противовирусные ингибиторы. Такие вирусы, окруженные и блокированные белками организма, поглощаются фагоцитами или выводятся с мочой, потом и др. Интерфероны усиливают противовирусную резистентность, индуцируя в клетках синтез ферментов, подавляющих образование нуклеиновых кислот и белков вирусов. Кроме этого, интерфероны оказывают иммуномодулирующее действие, усиливают в клетках экспрессию антигенов главного комплекса гистосовместимости (МНС). Противовирусная защита слизистых оболочек обусловлена секреторными IgA, которые, взаимодействуя с вирусами, препятствуют их адгезии на эпителиоцитах.

Противобактериальный иммунитет направлен как против бактерий, так и против их токсинов (антитоксический иммунитет). Бактерии и их токсины нейтрализуются антибактериальными и антитоксическими антителами. Комплексы бактерия (антигены)-антитела активируют комплемент, компоненты которого присоединяются к Fc-фрагменту антитела, а затем образуют мембраноатакующий комплекс, разрушающий наружную мембрану клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Пептидогликан клеточных стенок бактерий разрушается лизоцимом. Антитела и комплемент (СЗЬ) обволакивают бактерии и «приклеивают» их к Fc- и С3b-рецепторам фагоцитов, выполняя роль опсонинов вместе с другими белками, усиливающими фагоцитоз (С-реактивным белком, фибриногеном, маннан-связывающим лектином, сывороточным амилоидом).Основным механизмом антибактериального иммунитета является фагоцитоз. Фагоциты направленно перемещаются к объекту фагоцитоза, реагируя на хемоаттрактанты: вещества микробов, активированные компоненты комплемента (С5а, С3а) и цитокины. Противобактериальная защита слизистых оболочек обусловлена секреторными IgA, которые, взаимодействуя с бактериями, препятствуют их адгезии на эпителиоцитах.

Противоопухолевый иммунитет основан на Th1-зависимом клеточном иммунном ответе, активирующем цитотоксические Т-лимфоциты, макрофаги и NK-клетки. Роль гуморального (антительного) иммунного ответа невелика, поскольку антитела, соединяясь с антигенными детерминантами на опухолевых клетках, экранируют их от цитопатогенного действиях иммунных лимфоцитов. Опухолевый антиген распознается антигенпрезентирующими клетками (дендритными клетками и макрофагами) и непосредственно или через Т-хелперы (Th1) представляется цитотоксическим Т-лимфоцитам, разрушающим опухолевую клетку-мишень.Кроме специфического противоопухолевого иммунитета, иммунный надзор за нормальным составом тканей реализуется за счет неспецифических факторов. Неспецифические факторы, повреждающие опухолевые клетки: 1) NK-клетки, система мононуклеарных клеток, противоопухолевая активность которых усиливается под воздействием интерлейкина-2 (ИЛ-2) и ?-, ?-интерферонов; 2) ЛАК-клетки (мононуклеарные клетки и NK-клетки, активированные ИЛ-2); 3) цитокины (? - и ? -интерфероны, ФНО- ? и ИЛ-2).

Трансплантационным иммунитетом называют иммунную реакцию макроорганизма, направленную против пересаженной в него чужеродной ткани (трансплантата). Знание механизмов трансплантационного иммунитета необходимо для решения одной из важнейших проблем современной медицины — пересадки органов и тканей. Многолетний опыт показал, что успех операции по пересадке чужеродных органов и тканей в подавляющем большинстве случаев зависит от иммунологической совместимости тканей донора и реципиента.

Иммунная реакция на чужеродные клетки и ткани обусловлена тем, что в их составе содержатся генетически чужеродные для организма антигены. Эти антигены, получившие название трансплантационных или антигенов гистосовместимости, наиболее полно представлены на ЦПМ клеток.

Реакция отторжения не возникает в случае полной совместимости донора и реципиента по антигенам гистосовместимости — такое возможно лишь для однояйцовых близнецов. Выраженность реакции отторжения во многом зависит от степени чужеродности, объема трансплантируемого материала и состояния иммунореактивности реципиента.

При контакте с чужеродными трансплантационными антигенами организм реагирует факторами клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Основным фактором клеточного трансплантационного иммунитета являются Т-киллеры. Эти клетки после сенсибилизации антигенами донора мигрируют в ткани трансплантата и оказывают на них антителонезависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность.

Специфические антитела, которые образуются на чужеродные антигены (гемагглютинины, гемолизины, лейкотоксины, цитотоксины), имеют важное значение в формировании трансплантационного иммунитета. Они запускают антителоопосредованный цитолиз трансплантата (комплемент-опосредованный и антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность).

3. Лепра

Хроническое гранулематозное заболевание, поражаются слизистые оболочки, верхние дыхат. пути, периферическая нервная система, глаза.

Таксономия. семейство Mycobacteriaceae, род Mycobocterium, вид M. leprae.

Морфологические и культуральные свойства: прямая/изогнутая палочка с закругленными концами. Грамположительные, спор и капсул не образуют, имеют микрокапсулу, жгутиков не имеют. Кислото- и спиртоустойчивость, что обуславливает окраску по Цилю—Нельсену. Не культивируется на искусственных питательных средах. Размножается только в цитоплазме клетки путем деления и образуют шаровидные скопления Характерной особенностью лепрозных клеток, относящихся к макрофагам, является наличие бледного ядра и «пенистой» цитоплазмы. Токсинов не образует.

Биохимические свойства. Утилизируют глицерин и глюкозу и имеют специфический фермент О-дифенолоксидазу. Обладают способностью продуцировать внеклеточные липиды. Аэробы по выявлению на мембранных структурах микроорганизма ОВ ферментов: пероксидазы, цитохромоксидазы.

Антигенная структура. Выраженная способность усиливать клеточные иммунные реакции без добавления адъювантов. Ряд антигенов М. leprae являются общими для всех микобактерий, в том числе с вакцинным штаммом BCG, что используется для профилактики лепры.Из М. leprae выделен видоспецифический гликолипид с наличием трисахарида. АТ к гликолипиду обнаруживаются только у больных лепрой, что используется для активного выявления больных лепрой при обследовании лиц с помощью ИФА.

Патогенез, клиника: Антропоноз. Резервуар, источник возбудителя - больной человек (при кашле, чихании – выделяет бактерии).

Основной механизм заражения — аэрогенный, путь передачи — воздушно-капельный. Входные ворота - слизистая оболочка верхних дыхательных путей и поврежденные кожные покровы. Возбудитель распространяется лимфогематогенным путем, поражая клетки кожи и периферической нервной системы. Инкубационный период от 3-5 лет. При высокой резистентности развивается полярная туберкулоидная форма заболевания (ТТ-тип лепры), а при низкой резистентности развивается полярная лепроматозная форма заболевания (LL-тип лепры).

Иммунитет: относительный. В зонах с массивным инфицированием лепра может быть вызвана на фоне существующего естественного или приобретенного иммунитета.

Микробиологическая диагностика: Материал для бактериоскопического исследования: соскобы с кожи и слизистых оболочек носа, мокрота, пунктаты лимфатических узлов. Мазки окрашивают по Цилю—Нельсену. Наибольшее значение бактериоскопия соскобов имеет при LL-форме, при которых М. leprae выявляются во всех высыпаниях в больших количествах. При ТТ-форме заболевания М. leprae в соскобах выявляются очень редко, поэтому окончательную роль в диагностике заболевания имеет гистологическое исследование биоптатов кожи и слизистых оболочек, которое позволяет определить структуру гранулем.

Серологическая диагностика основана на обнаружении антител к фенольному гликолипиду в ИФА. При LL-форме заболевания антитела определяются в 95 % случаев, а при ТТ-форме — в 50 % случаев. В настоящее время получены моноклональные антитела, которые позволяют определять лепрозные антигены в тканях, разрабатывается ПЦР.

Вспомогательное значение имеет изучение иммунного статуса больного, в том числе постановка лепроминовой пробы (лепромин А). У больных LL-формой проба отрицательная, а у больных ТТ-формой она положительная.

Лечение: Препараты сульфонового ряда: дапсон, солюсульфон. Рифампицин, клофазимин и фторхинолоны. Методы генной терапии.

Профилактика: Специфической профилактики нет. Для относительного усиления иммунитета используется вакцина BCG, составной частью которой является лепромин А. Предварительно проводится проверка с помощью лепроминовой пробы. Разработка генно-инженерных вакцин, вакцин с использованием специфических антигенов из М. leprae.

Билет 44

1.Тинкториальные свойства бактерий. Простые и сложные методы окраски.

Морфологические свойства бактерий. Бактерии — микроорганизмы, не имеющие оформленного ядра (прокариоты).

Для бактерий характерны четыре основные формы: сферическая (шаровидная), цилиндрическая (палочковидная), извитая и нитевидная.Бактерии шаровидной формы — кокки — в зависимости от плоскости деления и расположения относительно друг друга отдельных особей подразделяются на микрококки (отдельно лежащие кокки), диплококки (парные кокки), стрептококки (цепочки кокков), стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев), тетракокки (образования из четырех кокков) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков).Палочковидные бактерии располагаются в виде одиночных клеток,в виде запятой, дипло- или стрептобактерий.Извитые формы бактерий — вибрионы и спириллы, а также спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы — извитую форму с несколькими спиральными завитками.

Размеры бактерий колеблются от 0,1 до 10 мкм. В состав бактериальной клетки входят капсула, клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана и цитоплазма, в которой содержатся нуклеоид, мезосомы,рибосомы и включения. Некоторые бактерии снабжены жгутиками и ворсинками. Ряд бактерий образуют споры, которые располагаются терминально, субтерминально или центрально; превышая поперечный размер клетки, споры придают ей веретенообразную форму.

Методы окраски мазков

Простой метод. Фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например фуксином водным (1—2 мин) или метиленовым синим (3—5 мин), промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Сложные методы. Включают последовательное нанесение на препарат красителей, различающихся по химическому составу и цвету, протрав и дифференцирующих веществ. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других.

Окраска по методу Грама. 1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1—2 мин ее снимают, а краситель сливают.Наносят раствор Люголя на 1—2 мин.Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30—60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.Промывают препарат водой.Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1—2 мин, промывают водой, высушивают и микроскопи- руют.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные — в красный (рис. 16).

Отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом. Это зависит от различий в химическом составе и в проницаемости клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также от соотношения РНК и ДНК в их цитоплазме. В клеточной стенке грамположительных бактерий наиболее выражен муреиновый (мукопептидный слой), содержащий гликопептиды и тейхоевую кислоту. Пептидогликаны грамположительных бактерий структурно отличаются от грамотрицательных бактерий. Тейхоевые кислоты стабилизируют ионы магния на поверхности клеток. У грамположительных бактерий на поверхности клетки имеется комплекс протеин — рибонуклеат магния; соотношение РНК и ДНК в их цитоплазме составляет 8 :1; у грамотрицательных бактерий это соотношение равно 1 :1. Изоэлектрическая точка цитоплазмы у грамположительных бактерий находится при pH 2,0—3,0, у грамотрицательных — около 5,0. После обработки раствором йода, являющегося окислителем, происходит сдвиг изоэлектрической точки в кислую сторону, выраженный у грамположительных бактерий в большей степени, чем у грамотрицательных.

Кроме того, проницаемость клеточной стенки у грамположительных бактерий меньше, чем у грамотрицательных. Таким образом, у грамположительных бактерий создаются оптимальные условия для прочной фиксации красителя и резистентности к обесцвечиванию спиртом.

Окраска по Граму имеет важное дифференциально-диагностическое значение и широко используется в микробиологии. К грамположительным бактериям относятся стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза и др., к грамотрицательным—гонококки, менингококки, кишечная палочка и др. Некоторые виды бактерий могут окрашиваться по Граму вариабельно в зависимости от возраста, особенностей культивирования и других факторов, изменяющих структуру клеточной стенки.

Основная ошибка, допускаемая при окраске по Г раму,

состоит в переобесцвечивании или недообесцвечивании мазка спиртом. В первом случае грамположительные бактерии могут утрачивать первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет (характерный для грамот- рицательных бактерий) в результате последующей докраски мазка фуксином. Во втором случае грамотрицательные бактерии могут сохранять сине-фиолетовый цвет генцианового фиолетового. Для правильной окраски следует строго соблюдать технику обесцвечивания (см. п. 3 описания окраски по Г раму).

Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля— Нельсена. 1. На фиксированный мазок наносят карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогревают до появления паров в течение 3—5 мин.Снимают бумагу, промывают мазок водой.На мазок наносят 5% раствор серной кислоты или 3% раствор солянокислого спирта на 1—2 мин для обесцвечивания.Промывают водой.Докрашивают мазок водным раствором метиленового синего в течение 3—5 мин.Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Кислотоустойчивость обусловлена наличием в клеточной стенке и цитоплазме бактерий повышенного количества липидов, воска и оксикислот, в частности миколовой кислоты. Раствор карболовой кислоты разрыхляет клеточную стенку и тем самым повышает ее тинкториальные свойства, а высокая концентрация красителя и нагревание в процессе окраски усиливают реакцию взаимодействия красителя с бактериальными клетками, которые окрашиваются при этом в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а кислотоустойчивые бактерии остаются окрашенными фуксином в красный цвет

Окраска спор по методу Ожешки. 1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают на пламени горелки в течение 2—3 мин.Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем горелки.Окрашивают препарат по Цилю —Нельсену. Споры бактерий при этом приобретают красный цвет, а вегетативные формы—синий .

Окраска зерен волютина по методу Нейссера. 1. На фиксированный мазок наносят ацетат синьки Нейссера на 2—3 мин.Наносят раствор Люголя на 10—30 с.Промывают препарат водой.Мазок докрашивают водным раствором везувина или хризоидина в течение 'А—1 мин.Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Зерна волютина представляют собой соединения, имеющие в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет (рис. 19).

Обнаружение капсул по методу Бурри—Гинса. 1. Готовят препарат по Бурри: смешивают каплю взвеси микробов с каплей туши и при помощи стекла со шлифовальным краем готовят мазок так же, как мазки из крови; затем его высушивают и фиксируют.На мазок наносят водный раствор фуксина на 1—2 мин.

Промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. При этом бактерии окрашиваются в красный цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на чернорозовом фоне.

2. Аллергические реакции 4 типа, их клинико-диагостическое значение

ГЗТ — реакции, возникающие не ранее чем через 24—48 ч. Механизм и клинические проявления связаны с клеточными реакциями.

Эта форма опосредована клеточными механизмами с участием Т-лимфоцитов. К ГЗТ относятся следующие формы проявления: туберкулиновая реакция, замедленная аллергия к белкам, контактная аллергия.

Реакции замедленного типа могут возникать при сенсибилизации организма:1. Микроорганизмами и микробными антигенами (бактериальными, грибковыми, протозойными, вирусными); 2. Гельминтами; 3. Природными и искусственно синтезированными гаптенами (лекарственные препараты, красители); 4. Некоторыми белками.

Реакцию вызывают малые дозы антигенов и лучше всего при внутрикожном введении.

Механизм аллергической реакции этого типа состоит в сенсибилизации Т-лимфоцитов-хелперов антигеном. Сенсибилизация лимфоцитов вызывает выделение медиаторов, в частности интерлейкина-2, которые активируют макрофаги и тем самым вовлекают их в процесс разрушения антигена, вызвавшего сенсибилизацию лимфоцитов. Цитотоксичность проявляют также и сами Т-лимфоциты. О роли лимфоцитов в возникновении аллергий клеточного типа свидетельствуют возможность передачи аллергии от сенсибилизированного животного несенсибилизированному с помощью введения лимфоцитов, а также подавление реакции при помощи антилимфоцитарной сыворотки.

Морфологическая картина при аллергиях клеточного типа носит воспалительный характер, обусловленный реакцией лимфоцитов и макрофагов на образующийся комплекс антигена с сенсибилизированными лимфоцитами.Аллергические реакции клеточного типа проявляются в виде туберкулиновой реакции, замедленной аллергии к белкам, контактной аллергии.

Туберкулиновая реакция возникает через 5—6 ч после внутрикожного введения сенсибилизированным туберкулезной палочкой животным или человеку туберкулина, т. е. антигенов туберкулезной палочки. Выражается реакция в виде покраснения, припухлости, уплотнения на месте введения туберкулина. Сопровождается иногда повышением температуры тела, лимфопенией. Развитие реакции достигает максимума через 24—48 ч. Туберкулиновая реакция используется с диагностической целью для выявления заболеваний туберкулезом или контактов организма с туберкулезной палочкой.

Замедленная аллергия возникает при сенсибилизации малыми дозами белковых антигенов с адъювантом, а также конъю-гатами белков с гаптенами. В этих случаях аллергическая реакция возникает не раньше чем через 5 дней и длится 2—3 нед. Видимо, здесь играют роль замедленное действие конъюгированных белков на лимфоидную ткань и сенсибилизация Т-лимфо-цитов.

Контактная аллергия возникает, если антигенами являются низкомолекулярные органические и неорганические вещества, которые в организме соединяются с белками, образуя конъюга-ты. Конъюгированные соединения, выполняя роль гаптенов, вызывают сенсибилизацию. Контактная аллергия может возникать при длительном контакте с химическими веществами, в том числе фармацевтическими препаратами, красками, косметическими препаратами (губная помада, краска для ресниц). Проявляется контактная аллергия в виде всевозможных дерматитов, т. е. поражений поверхностных слоев кожи.

3. Филовирусы.

Филовирусы.СЕМ. FILOVIRIDAE.РОД FILOVIRUS.Вид: вирус лихорадки

Марбург,вирус лихорадки Эбола.

Лихорадка Марбург (синонимы: болезнь Марбурга, геморрагическая лихорадка Мариди; Marburg disease - англ.) - острая вирусная болезнь, характеризующаяся тяжелым течением, высокой летальностью, геморрагическим синдромом, поражением печени, желудочно-кишечного тракта и центральной нервной системы.

Этиология. Вирусы Марбурга и Эбола сходны по своей морфологии, но отличаются по антигенной структуре. Характерен полиморфизм, вирионы могут быть червеобразной, спиралевидной и округлой формы. Длина их колеблется от 665 до 1200 нм, диаметр поперечного сечения - 70-80 нм. Вирусные частицы содержат РНК, липопротеин; присутствия гемагглютининов и гемолизинов не выявлено. Антигенная активность связана с вирусными частицами, существования растворимого антигена не доказано. Вирусы выделяются и пассируются на морских свинках и в культуре перевиваемых клеток почки зеленой мартышки (Vero). При пассировании в культурах тканей вирус оказывает неполный цитопатический эффект или вовсе его не вызывает. Относится к семейству Filoviridae, роду Lyssavirus.

Воротами инфекции служат повреждённая кожа, слизистые оболочки (ротовая полость, глаза). Характерна диссеминация вируса. Размножение его может происходить в различных органах и тканях (печень, селезёнка, лёгкие, костный мозг, яички и др.). Вирус длительно обнаруживается в крови,. Патогистологические изменения отмечаются в печени (ожирение печёночных клеток, некробиоз отдельных клеток, клеточная инфильтрация), почках (поражение эпителия почечных канальцев), селезёнке, миокарде, лёгких. Множественные мелкие кровоизлияния в различных органах (головной мозг и другие).

Инкубационный период 2—16 суток. Клинические симптомы, тяжесть течения и исходы при заболеваниях, описанных как лихорадка Марбург и геморрагическая лихорадка Мариди, ничем не различаются. Продромальный период отсутствует. Болезнь начинается остро с быстрым повышением температуры тела до высокого уровня, часто с ознобом. С первых дней болезни отмечаются признаки общей интоксикации (головная боль, разбитость, мышечные и суставные боли), через несколько дней присоединяются поражения желудочно-кишечного тракта, геморрагический синдром; развивается обезвоживание, нарушается сознание.

В начальный период больной жалуется на головную боль разлитого характера или более выраженную в лобной области, боли в груди колющего характера, усиливающиеся при дыхании, загрудинные боли, иногда сухой кашель. Появляется ощущение сухости и боль в горле. Отмечается гиперемия слизистой оболочки глотки, кончик и края языка красные; на твёрдом и мягком нёбе, языке появляются везикулы, при вскрытии которых образуются поверхностные эрозии; в отличие от лихорадки HYPERLINK "http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9B%D0%B8%D1%85%D0%BE%D1%80%D0%B0%D0%B4%D0%BA%D0%B0_%D0%9B%D0%B0%D1%81%D1%81%D0%B0"Ласса, выраженного некроза не наблюдается. Тонус мышц, особенно спины, шеи, жевательных мышц повышен, пальпация их болезненна. С 3—4-го дня болезни присоединяются боли в животе схваткообразного характера. Стул жидкий, водянистый, у половины больных отмечается примесь крови в стуле (иногда сгустками) или наблюдаются признаки желудочно-кишечного кровотечения (мелена). У отдельных больных появляется рвота с примесью желчи и крови в рвотных массах. Понос наблюдается почти у всех больных (83 %), длится около недели; рвота бывает реже (68 %), продолжается 4—5 дней.

У половины больных на 4—5-й день болезни на туловище появляется сыпь (иногда кореподобная), у некоторых больных на фоне макулопапулезной сыпи могут отмечаться везикулезные элементы. Сыпь распространяется на верхние конечности, шею, лицо. Иногда беспокоит кожный зуд. При развитии геморрагического синдрома появляются кровоизлияния в кожу (у 62 % больных), в конъюнктиву, слизистую оболочку полости рта. В это время появляются носовые, маточные, желудочно-кишечные кровотечения. В конце 1-й, иногда на 2-й неделе признаки токсикоза достигают максимальной выраженности. Появляются симптомы дегидратации, инфекционно-токсического шока. Иногда наблюдаются судороги, потеря сознания. В этот период больные нередко умирают.

Характерна клиническая картина: острое начало заболевания, тяжелое течение, наличие везикулезно-эрозивных изменений слизистой оболочки полости рта, геморрагический синдром, экзантема, понос, рвота, обезвоживание, тяжелое поражение центральной нервной системы (расстройства сознания, менингеальный синдром), характерные изменения периферической крови.

Марбургская вирусная инфекция может быть окончательно диагностирована только в лабораториях путем проведения целого ряда различных тестов, таких как:иммуносорбентный анализ с применением фиксированных ферментов (ELISA);тесты для выявления антигенов;

реакция сывороточной нейтрализации;полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР);изолирование вируса в культурах клеток.Тестирование клинических образцов представляет крайне высокий биориск и проводится только в условиях обеспечения максимальной биобезопасности.

Лихорадка Эбола - острая вирусная высококонтагиозная болезнь, характеризуется тяжелым течением, высокой летальностью и развитием геморрагического синдрома.

Эпидемиология. Резервуаром вируса в природе считаются грызуны, обитающие около жилья человека. Больной человек представляет опасность для окружающих.

Патогенез. Воротами инфекции являются слизистые оболочки респираторного тракта и микротравмы кожи. На месте ворот инфекции видимых изменений не развивается. Характерна быстрая генерализация инфекции с развитием общей интоксикации и тромбогеморрагического синдрома. При обследовании населения в эндемичных районах у 7% обнаружены антитела к вирусу Эбола, что позволяет допустить возможность легкого и даже бессимптомного течения инфекции, которые остаются не выявленными.

Симптомы и течение. Инкубационный период продолжается от 4 до 6 дней. В клинической симптоматике лихорадка Эбола сходна с лихорадкой Марбург. Различная тяжесть болезни и частота летальных исходов при эпидемических вспышках в различных регионах связана с биологическими и антигенными различиями выделенных штаммов вируса. Заболевание начинается остро, больных беспокоит сильная головная боль, боли в мышцах, понос, боли в животе. Несколько позднее появляется сухой кашель и колющие боли в грудной клетке, развиваются признаки дегидратации. На 5-7-й день болезни появляется макулопапулезная сыпь, после исчезновения которой отмечается шелушение кожи. Геморрагический синдром проявляется в виде носовых кровотечений, кровавой рвоте, маточных кровотечений, у беременных наступает выкидыш. При исследовании крови отмечается нейтрофильный лейкоцитоз, тромбоцитопения, анемия. Смерть наступает обычно на 2-й неделе болезни на фоне кровотечений и шока.

По морфологическим особенностям и размерам вирусы Марбург и Эбола во многом сходны. Это прямые (вирус Эбола) или извитые различным образом нити (вирус Марбург — спиральные, в виде цифры 6, V-образные); концы их закруглены. Иногда встречаются формы с нитевидными ответвлениями. Наружный диаметр вирионов — 70—100 нм, средняя длина — 665 нм, но в электронно-микроскопических препаратах встречаются частицы длиной до 1400 нм (вирус Эбола).

Геном вируса Эбола представлен одной молекулой одноцепочечной негативной РНК с молекулярной массой 4,0—4,2 МД. В центре вириона располагается тяж диаметром 20 нм, который составляет основу цилиндрического спирального рибонуклеопротеида вируса диаметром 30 нм. Между рибонуклеопротеидом и оболочкой вириона располагается промежуточный слой толщиной 3,3 нм. Вирион имеет наружную липопротеиновую мембрану толщиной 20—30 нм, на поверхности которой на расстоянии 10 нм друг от друга располагаются шипы длиной 7—10 нм. В составе вириона, так же как и у вируса Марбург, 7 структурных белков.

В материале от больного вирусы Марбург и Эбола достаточно устойчивы к нагреванию. В крови и плазме они инактивируются при температуре 60 °С в течение 30 мин, в 10%-ной суспензии печени больных обезьян — при 56 °С в течение 1 ч, под действием УФ-лучей — в течение 1—2 мин. В суспензии печени под действием ацетона, метанола или формалина инактивируются в течение 1 ч. Чувствительны к действию жирорастворителей — этанола, хлороформа и дезоксихолата натрия. Хорошо сохраняются при —70 °С, в лиофилизированном виде (более 1 года — срок наблюдения).

Билет 45

1. Понятие о химиотерапевтическом лечении вирусных инфекции.

Химиотерапия — специфическое антимикробное, антипаразитарное лечение при помощи химических веществ. Эти вещества обладают важнейшим свойством — избирательностью действия против болезнетворных микроорганизмов в условиях макроорганизма.

Основоположником химиотерапии является немецкий химик, лауреат Нобелевской премии П.Эрлих, который установил, что химические вещества, содержащие мышьяк, губительно действуют на спирохеты и трипаносомы, и получил в 1910 г. первый химиотерапевтический препарат — сальварсан (соединение мышьяка, убивающее возбудителя, но безвредное для микроорганизма).

В 1935 г. другой немецкий химик Г.Домагк обнаружил среди анилиновых красителей вещество — пронтозил, или красный стрептоцид, спасавший экспериментальных животных от стрептококковой инфекции, но не действующий на эти бактерии вне организма. За это открытие Г.Домагк был удостоен Нобелевской премии. Позднее было выяснено, что в организме происходит распад пронтозила с образованием сульфаниламида, обладающего антибактериальной активностью как in vivo, так и in vitro.

Механизм действия сульфаниламидов (сульфонамидов) на микроорганизмы был открыт Р.Вудсом, установившим, что сульфаниламиды являются структурными аналогами парааминобензойной кислоты (ПАБК), участвующей в биосинтезе фолиевой кислоты, необходимой для жизнедеятельности бактерий. Бактерии, используя сульфаниламид вместо ПАБК, погибают.

Первый природный антибиотик был открыт в 1929 г. английским бактериологом А.Флемингом. При изучении плесневого гриба Penicillium notatum, препятствующего росту бактериальной культуры, А. Флеминг обнаружил вещество, задерживающее рост бактерий, и назвал его пенициллином. В 1940 г. Г. Флори и Э. Чейн получили очищенный пенициллин. В 1945 г. А Флеминг, Г. Флори и Э. Чейн стали Нобелевскими лауреатами.

В настоящее время имеется огромное количество химиотерапевтических препаратов, которые применяются для лечения заболеваний, вызванных различными микроорганизмами.

Химиотерапия ВИЧ-инфекции:

1)Зидовудин,ставудин,фосфазид – Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы.

2)Невирапин, ифавиренц,делавердин - Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы.

3)Саквинавир, ритонавир, индинавир, ампренавир – Ингибиторы протеазы ВИЧ.

Химиотерапия Герпетических инфекций:

1)Ацикловир (зовиракс)- герпес 1, 2 типов,опоясывающий лишай.2)Ганцикловир- герпес 1 типа,цитомегалия.Механизм действия: Конкурентное взаимодействие с вирусной тимидинкинзой,ингибирование вирусной ДНК-полимеразы.

1)Флореналь- Герпес 1, 2 типа,Опоясывающий лишай.Механизм действия: Вирулицидное действие.

1)Бонафтон – Герпес 1, 2 типа,опоясывающий лишай.Механизм действия: Нарушение синтеза вирусных белков и сборки вируса.

Химиотерапия гриппа и ОРВИ:

1)Амантадин,ремантадин-Грипп А.2)Дейтифорин- Грипп А,парагрипп,РС-инфекция.

Механизм: Затруднение освобождения рибонуклеопротеида от матриксного белка и начала транскрипции.

1)озельтамивир(тамифлю)- Грипп А, В.Механизм: Ингибиторы нейраминидазы.

1)Арбидол- Грипп А, В,другие ОРВИ.Механизм: Ингибирует слияние липидной оболочки вируса с

клеточной мембраной, обладает иммуностимулирующим и интерферониндуцирующим действием.

1)Оксолин- Грипп, риновирусные инфекции.Механизм:Вирулицидное действие.

1)Виразол- Грипп А, В, парагрипп, эпидемический паротит,реовирусная инфекция.Механизм: Подавление синтеза РНК и вирусспецифических белков.

2. Роль микроба возбудителя в развитии инфекционного заболевания. Патогенность. Вирулентность. Факторы патогенности.

Инфекция-совокупность физиологических и патологических процессов в макроорганизме,в результате его взаимодействия с микроорганизмом.

Инфекционный процесс-антогонистическое взаимодействие макро- и микроорганизма.

Инфекционное заболевание-крайнее проявление инфекции с ярковыраженными антогонистическими взаимоотношениями.

Периоды:1.Заражение.2.Инкубационный период- от момента заражения до первых клинических признаков (процесс активного размножения возбудителя).3.Продромальный период (предвестников) характеризуется общими неспецифическими проявлениями- недомоганием, головной болью, повышением температуры и другими симптомами преимущественно токсического генеза.4.Период развития (разгара) болезни характеризуется типичными (специфическими) для данной инфекции клиническими проявлениями.5.Период угасания проявлений6.Выздоровление/летальный исход.

Инфекция делится на:1.Эндоинфекция(активация собственной микрофлоры по какой то причине).2.Экзоинфекция-возбудитель попадает в организм несколькими путями(воздушно-капельный;Контактный(прямой-слизистые,непрямой-через одежду ложку);алементарный(пища,воздух,вода);трансмиссивный(через укус насекомого).

Инфекция делится на:Смешанная(несколько возбудителей вызывают инфекцию);Моноинфекция(1 возбудитель);Вторичная инфекция(наслоение 1-го заболевания на другое);Суперинфекция(очень много 1-го микроба);Реинфекция( повторное заболевание новой инфекцией при выздоровлении);Рецедив(повторное заболевание тем же самым заболеванием);Престирующая инфекция(в сост.покоя-хламидиоз).

Требуются определенные условия для реализации:

- достаточная доза микроорганизмов (понятие о критических дозах). Чума- несколько бактериальных клеток, дизентерия- десятки, для некоторых возбудителей- тысячи- сотни тысяч;

- естественный путь проникновения. Существует понятие о входных воротах инфекции, различных для различных групп инфекций- раневых, респираторных, кишечных, урогенитальных с различными механизмами заражения (глаза, кожа, дыхательные пути, желудочно- кишечный тракт, мочеполовая система и др.);

- характеристики возбудителя, его болезнетворные свойства, способность преодолевать защитные механизмы хозяина;

- состояние организма хозяина (наследственность- гетерогенность человеческой популяции по восприимчивости к инфекции, пол, возраст, состояние иммунной, нервной и эндокринной систем, образ жизни, природные и социальные условия жизни человека и др.).

Патогенность - потенциальная,генетически обусловленная способность микроорганизма вызывать инфекционное заболевание.Этапы:1.Адгезия,колонизация.2.Инвазивность,агрессивность(ферменты агрессии-гиалуронидаза,плазмакоагулаза,коллагеназа,нейраминидаза,фибринолизин,лецитиназа).3.повреждающее действие на органы и системы.4.Противодействие защитным силам макроорганизма.(А-протеин стафилококка,капсула,Vi-АГ брюшнотифозной палочки).

Вирулентность – мера патогенности микробов, способных вызывать заболевание+скорость размножения и распространения.Измеряется в DLM,LD50,DCL.

Инфицирующая доза-минимальное кол-во микробов,способное вызывать заболевание.

По способности вызывать заболевания микроорганизмы можно разделить на патогенные, условно- патогенные, непатогенные.

Факторами патогенности считают токсины:

Экзотоксины продуцируются во внешнюю среду (организм хозяина), обычно белковой природы,высокая избирательность и точечность действия,термолабильны,обезвреживаются формальдегидом,высокая антигенность, у Гр «-» и «+» бактерий,могут проявлять ферментативную активность. По механизму действия делятся на: цитотоксины (блокируют синтез белка), мембранотоксины (повышают проницаемость мембран эритроцитов и лейкоцитов;гемолизины, лейкоцидины), функциональные блокаторы (активируют аденилатциклазу;холероген), эксфолианты(нарушают межклеточное взаимодействие).

Эндотоксины высвобождаются только при гибели бактерий, характерны для грамотрицательных бактерий, представляют собой сложные химические соединения клеточной стенки (ЛПС),термостабилен; избирательные и токсические свойства низкие,частично обезвреживаются формальдегидом,антигенность слабая.

3.бордетеллы

Род Bordetella.

Бордетеллы - мелкие коккобациллы, имеют форму овоидной палочки, грамотрицательны, неустойчивы во внешней среде. Основное значение имеют три вида.

1. B.pertussis - возбудитель коклюша - острого инфекционного заболевания, сопровождающегося воспалением гортани, трахеи и бронхов и приступообразным кашлем.

2. B.parapertussis - возбудитель паракоклюша.

3. B.bronchiseptica - возбудитель коклюшеподобного заболевания собак, кошек и кроликов, может вызывать у людей респираторные заболевания по типу ОРВИ (относительно редко).

Культуральные особенности. Бордетеллы требовательны к средам, особенно возбудитель коклюша. Для первичной изоляции этих гемофильных микроорганизмов используют картофельно - глицериновый агар с добавлением крови (среду Борде - Жангу) или казеиново - угольный агар (КУА). На кровяных средах возбудитель коклюша вызывает образование мелких колоний металлического оттенка с потемнением сред, на КУА - буровато - коричневое окрашивание колоний. Основные формы колоний - гладкие (S) - так называемая Iфаза (вирулентные культуры) через промежуточные формы переходят в шероховатые (R) - фаза IV, что сопровождается изменением культуральных, биохимических и антигенных свойств, потерей вирулентности.

Антигенный состав. Имеются общие (родовые) и специфические (видовые) антигены. Видоспецифическими являются соматические О- антигены (агглютиногены), выявляемые в РА.

Факторы патогенности. Главный фактор - термолабильный экзотоксин белковой природы, обладающий тропизмом к нервной и сосудистой системе. Имеется термостабильный эндотоксин, обладающий токсическими и сенсибилизирующими свойствами. Трахеальный цитотоксин вызывает повреждение мерцательного эпителия. Бактерии продуцируют гиалуронидазу, лецитиназу, плазмокоагулазу.

Эпидемиология. Источник инфекции при коклюше и паракоклюше - больные типичными и стертыми формами инфекции. Механизм заражения - воздушно - капельный. Возбудитель, попавший на слизистую оболочку дыхательных путей, размножается, выделяет экзо- и эндотоксины, некротизирует слизистую, раздражают кашлевые рецепторы и кашлевой центр продолговатого мозга, вызывает спазматические приступы кашля.

Лабораторная диагностика. Посев проводят методом “кашлевых пластинок” или материал берут заднеглоточным тампоном с посевом на агар Борде - Жангу и КУА. Идентификация выделенных культур проводится по морфологическим и культуральным свойствам, а также в РА со специфическими сыворотками. Для экспресс - диагностики и идентификации применяют метод флюоресцирующих антител.

Для серологической диагностики используют различные методы - РА, РСК, РПГА с исследованием парных сывороток, взятых в динамике инфекционного процесса.

Лечение. В основе лечения - антибактериальная терапия антибиотиками (гентамицин, ампициллин и др.).

Иммунитет и иммунопрофилактика. Постинфекционный иммунитет стойкий, видоспецифический, обусловлен гуморальными и клеточными факторами.

Для вакцинации используют убитые бордетеллы I фазы. В вакцине АКДС имеется коклюшный компонент (20 млрд микробных тел/ мл).

Билет 46

1. Микрофлора пищевода

2. Иммунологические препараты. Получение. применение.

Иммуномодуляторы – вещества, оказывающие влияние на функцию иммунной системы, изменяющие активность иммунной системы в сторону повешения (иммуностимуляторы) или понижения (иммунодепрессанты) её активности.

К экзогенным иммуномодуляторам относится большая группа веществ различной химической природы и происхождения, оказывающих неспецифическое активирующее или супрессивное действие на иммунную систему, но являющихся чужеродными для организма. Антибиотики, левамизол, полисахариды, ЛПС, адъюванты.

Эндогенные иммуномодуляторы представляют собой достаточно большую группу олигопептидов, синтезируемых самим организмом, его иммунокомпетентными клетками, и способных активировать иммунную систему путем усиления функции иммунокомпетентных клеток. К ним относятся регуляторные пептиды: интерлейкины, интерфероны, гормоны тимуса.

Применение иммуномодуляторов: при первичных и вторичных имму-нодефицитах различного происхождения, при онкологических болезнях, при трансплантации органов и тканей, при лечении иммунопатологических и аллергических болезней, в иммунопрофилактике и лечении инфекционных болезней.

Созданы препараты, обладающие иммуномодулирующим действием: интерферон, лейкоферон, виферон.

3. Медленные инфекции.

Медленные вирусные инфекции характеризуются следующими признаками:

1) необычно длительным инкубационным периодом (месяцы, годы); 2) своеобразным поражением органов и тканей, преимущественно ЦНС; 3) медленным неуклонным прогрессированием заболевания; 4) неизбежным летальным исходом.

Медленные вирусные инфекции могут вызывать вирусы, известные как возбудители острых вирусных инфекций. Например, вирус кори иногда вызывает ПСПЭ(подострый склерозирующий панэнцефалит), вирус краснухи — прогрессирующую врожденную краснуху и краснушный панэнцефалит.

Типичную медленную вирусную инфекцию животных вызывает вирус Мэди/Висна относящийся к ретровирусам. Он является возбудителем медленной вирусной инфекции и прогрессирующей пневмонии овец.

Прионы — возбудители конформационных болезней, вызывающих диспротеиноз.

Патогенез и клиника. Прионные инфекции характеризуются губкообразными изменениями мозга (трансмиссивные губкообразные энцефалопатии). При этом развиваются церебральный амилоидоз (внеклеточный диспротеиноз, характеризующийся отложением амилоида с развитием атрофии и склероза ткани) и астроцитоз (разрастание астроцитарной нейроглии, гиперпродукция глиальных волокон). Образуются фибриллы, агрегаты белка или амилоида. Иммунитета к прионам не существует.

Куру — прионная болезнь, в результате ритуального каннибализма — поедания недостаточно термически обработанного инфицированного прионами мозга погибших сородичей. В результате поражения ЦНС нарушаются координация движений, походка, появляются озноб, эйфория.

Болезнь Крейтцфельдта—Якоба — прионная болезнь (инкубационный период — до 20 лет), протекающая в виде деменции, зрительных и мозжечковых нарушений и двигательных расстройств со смертельным исходом через 9 месяцев от начала болезни. Возможны различные пути инфицирования и причины развития болезни: 1) при употреблении недостаточно термически обработанных продуктов животного происхождения, например мяса, мозга коров, больных губкообразной энцефалопатией крупного рогатого скота; 2) при трансплантации тканей, например роговицы глаза, при применении гормонов и других БАВ животного происхождения, при использовании контаминированных или недостаточно простерилизованных хирургических инструментов.

Синдром Герстманна—Штреусслера— Шейнкера — прионная болезнь с наследственной патологией, протекающая с деменцией, гипотонией, нарушением глотания, дизартрией. Инкубационный период — от 5 до 30 лет.

Фатальная семейная бессонница — аутосомно-доминантное заболевание с прогрессирующей бессонницей, симпатической гиперреактивностью

Скрепи - прионная болезнь овец и коз, характеризующаяся сильным кожным зудом, поражением ЦНС, прогрессирующим нарушением координации движений и неизбежной гибелью животного.

Губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота — прионная болезнь крупного рогатого скота, характеризующаяся поражением ЦНС, нарушением координации движений и

неизбежной гибелью животного.

Микробиологическая диагностика. При прионной патологии характерны губкообразные изменения мозга, астроцитоз (глиоз), отсутствие инфильтратов воспаления; окраска. Мозг окрашивают на амилоид. В цереброспинальной жидкости выявляют белковые маркеры прионных мозговых нарушений (с помощью ИФА, ИБ с моноклональными антителами). Проводят генетический анализ прионного гена; ПЦР для выявления РгР.

Профилактика. Введение ограничений на использование лекарственных препаратов животного происхождения. Ограничение трансплантации твердой мозговой оболочки. Использование резиновых перчаток при работе с биологическими жидкостями больных.

Билет 47

1. Гемофилы.

семейство-Pasteurellaceae;род –Haemophilus;виды- H.influenzae.

ФЕРМЕНТЫ АГРЕССИИ: гиалуронидаза.МИКРОВОРСИНКИ – адгезия затруднение поглощения фагоцитами .КАПСУЛА – препятствует фагоцитозу Ig A-протеаза.ЭНДОТОКСИН (липополисахариды, гликопротеиды).

ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ ПОЛОЖЕНИЕ:Род Haemophilus входит в состав семейства Pasteurellaceae, относящегося к классу Гамма-Протеобактерий. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА:В состав рода Haemophilus, относящегося к семейству Pasteurellaceae, входят мелкие неподвижные полиморфные (чаще они имеют форму коккобацилл и палочек, реже – нитей) некислотоустойчивые аэробные или факультативно-анаэробные облигатные паразиты, для роста которых необходимы ростовые факторы, содержащиеся в эритроцитах. Образуют капсулу.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ:Бактерии рода Haemophilus, особенно Н. influenzae, чаще являются причиной заболеваний детей и лиц пожилого возраста, а также вторичных бактериальных инфекций у больных, ослабленных хроническими соматическими и онкологическими заболеваниями. H. influenzae вызывает у человека острые, реже хронические респираторные заболевания (ринит, синусит, фарингит, трахеит, эпиглоссит, бронхит, пневмонию), абсцессы, эмпиему, гнойный менингит, эндокардит, артрит и сепсис. H. aphrophilus выделяют при подострых эндокардитах человека. H. aegyptius вызывает тяжелый остро протекающий конъюнктивит. H. parainfluenzae, H. haemolyticus и H. parahaemolyticus – нормальные обитатели респираторного тракта человека, но при определенных условиях первые 2 вида могут вызывать эндокардит, а на фоне вирусных инфекций – вторичные острые заболевания ротовой полости, глотки, трахеи и бронхов. H. ducreyi вызывает венерическое заболевание – мягкий шанкр. H. parasuis вызывает у свиней полиартрит и полисерозит. H. paracuniculis вызывает у кроликов энтерит. H. paragallinarum – возбудитель коризы птиц. ТЕСТИРУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ:H. influenzae: кровь, спинно-мозговая жидкость, мазки из зева, носоглотки, мокрота, аспират из придаточных полостей носа, промывные воды бронхов, смывы из глаз, биоптаты конъюнктивы, суставная жидкость, ткани легких. H. aphrophilus – биоптаты эндокарда, кровь. H. aegyptius – смывы с конъюнктивы. H. parainfluenzae, H. haemolyticus и H. parahaemolyticus – кровь, смывы из ротовой полости, глотки, трахеи и бронхов. H. ducreyi: отделяемое и соскобы из язв, аспираты пораженных лимфатических узлов. ПРИНЦИПИАЛЬНАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ Бактериоскопия мазков проб. Обнаружение гемофил в мазках клинического материала. Диагноз на мягкий шанкр ставят уже на этом этапе лабораторных исследований на основании обнаружения грамотрицательных палочек в форме цифры 8 или веретена, располагающихся параллельными цепочками. При подозрении на инфекции других видов гемофил пробы высевают на питательные среды. Посев материала на питательные среды и выделение чистой культуры. Для роста на питательных средах гемофилы требуют факторы, содержащиеся в крови, – Х (гемин) и V (никотинамидадениндинуклеотид). Первоначально пробы высевают на кровяной агар, на следующий день колонии пересевают на шоколадный агар. Бактериоскопия мазков колоний: выявление в мазках бактерий с характерной для гемофил морфологией. Биохимический анализ: проводят для дифференциации видов гемофил. Дополнительные исследования: определяют чувствительность гемофил к антимикробным препаратам на гемофилезном тестовом агаре. РОСТ НА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ:Для культивирования на искусственных питательных средах гемофилы нуждаются в факторах X и V, источником которых является свежая кровь человека и животных. Различных представителей рода дифференцируют по потребностям в указанных факторах. Лучше всего гемофилы растут на средах с нагретой кровью (шоколадном агаре и др.), так как при нагревании из крови высвобождаются необходимые им ростовые факторы. На шоколадном агаре гемофилы растут в виде полупрозрачных, сероватых, нежных, сочных колоний диаметром от 1 до 2 мм; в зависимости от состояний популяции могут формировать три вида колоний: крупные круглые слизистые колонии (М-форма); круглые полупрозрачные голубоватые колонии размером до 1 мм (S-формы); очень мелкие, менее 1 мм в диаметре, непрозрачные колонии (R-форма). При росте на шоколадном агаре культура Н. influenzae издает «мышиный» запах, что является одним из характерных признаков этой группы бактерий.На кровяном агаре гемофилы растут в виде чрезвычайно мелких полупрозрачных колоний (диаметр 0,5 мм и менее), не имеющих характерных особенностей (их трудно дифференцировать от колоний других видов бактерий).

2. Методы культивирования, состав питательных сред

Универсальным инструментом для производства посевов является бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом применяют специальную бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые предварительно изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных пипеток широкий конец закрывают ватой, после чего их помещают в специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.

При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над пламенем горелки. Удерживая другими пальцами той же руки петлю, набирают ею посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и зигзагообразным движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надписывают, указывая дату посева и характер посевного материала (номер исследования или название культуры).

Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий.

Искусственные питательные среды, их классификация.

Основные принципы культивирования микроорганизмов на питательных средах.

1.Использование всех необходимых для соответствующих микробов питательных компонентов.

2.Оптимальные температура, рН, rH₂, концентрация ионов, степень насыщения кислородом, газовый состав и давление.

Микроорганизмы культивируют на питательных средах при оптимальной температуре в термостатах, обеспечивающих условия инкубации.

По температурному оптимуму роста выделяют три основные группы микроорганизмов.

1.Психрофилы- растут при температурах ниже +20 градусов Цельсия.

2.Мезофилы- растут в диапозоне температур от 20 до 45 градусов (часто оптимум- при 37 градусах С).

3.Термофилы- растут при температурах выше плюс 45 градусов.

Краткая характеристика питательных сред.

По консистенции выделяют жидкие, плотные (1,5- 3% агара) и полужидкие (0,3- 0,7 % агара) среды.

Агар- полисахарид сложного состава из морских водорослей, основной отвердитель для плотных (твердых) сред. В качестве универсального источника углерода и азота применяют пептоны- продукты ферментации белков пепсином, различные гидролизаты- мясной, рыбный, казеиновый, дрожжевой и др.

По назначению среды разделяют на ряд групп:

- универсальные (простые), пригодные для различных нетребовательных микроорганизмов (мясо- пептонный бульон- МПБ, мясо- пептонный агар- МПА);

- специальные- среды для микроорганизмов, не растущих на универсальных средах (среда Мак- Коя на туляремию, среда Левенштейна- Иенсена для возбудителя туберкулеза);

- дифференциально- диагностические- для дифференциации микроорганизмов по ферментативной активности и культуральным свойствам ( среды Эндо, Плоскирева, Левина, Гисса);

- селективные (элективные)- для выделения определенных видов микроорганизмов и подавления роста сопутствующих- пептонная вода, селенитовая среда, среда Мюллера.

По происхождению среды делят на естественные, полусинтетические и синтетические.

3. Дисбактериоз

Эубиоз (от греч. еu – хорошо и bios – жизнь) – состояние динамического равновесия между компонентами экосистемы «внешняя среда – макроорганизм – микрофлора» и связанное с ним состояние здоровья.

Дисбактериоз (от греч. dys – приставка, означающая отрицание, и bacteria) – изменения количественного и качественного состава нормальной микрофлоры. Дисбактериоз приводит к состоянию нарушенного функционирования составных частей экосистемы «внешняя среда – макроорганизм – бактериальная микрофлора», в результате чего развивается заболевание, усугубляется болезнь и даже может наступить смерть макроорганизма.

Иногда используется более широкое понятие дисбиоз, характеризующее нарушение равновесия между макроорганизмом и всеми группами микроорганизмов, населяющих его, включая вирусы, грибы, простейшие, гельминты. Под это понятие подпадают такие широко распространенные заболевания, как рота- и энтеровирусные заболевания, вирусные гепатиты, грипп, ОРВИ и другие вирусные инфекции, туберкулез, микозы, описторхоз, лямблиоз, гельминтозы и т. д.

В настоящее время условно выделяют четыре степени кишечного дисбактериоза:

1-я степень, или латентная, компенсированная форма – наблюдаются незначительные количественные изменения в аэробной части микрофлоры, увеличение или уменьшение количества эшерихий.

2-я степень (субкомпенсированная форма) – наряду с количественными, наблюдаются качественные изменения эшерихий, снижается количество бифидобактерий, увеличивается количество условно-патогенных бактерий, псевдомонад, грибов.

3-я степень – значительно снижен уровень бифидо- и лактобактерий, резко изменено количество эшерихий. Создаются условия для развития условно-патогенной флоры. Тяжесть клинических симптомов, кишечные дисфункции, а также степень декомпенсации нарастают.

4-я степень – бифидофлора резко снижена или отсутствует, значительно уменьшено количество лактофлоры, значительные количественные и качественные изменения эшерихий, растет число условно-патогенных микробов в различных ассоциациях. Функциональные расстройства со стороны различных органов желудочно-кишечного тракта могут сопровождаться деструктивными изменениями кишечной стенки, что чревато развитием бактериемии и сепсиса. Микрофлора может выявляться в других органах и биологических средах, которые в норме стерильны (кровь, моча и др.), появляются дополнительные очаги инфекции.

Основные причины дисбактериоза.

Экзогенные причины:

• Ухудшение экологического состояния антропогенного генеза; воздействие ксенобиотиков (промышленных и бытовых загрязнителей, биохимически чужеродных соединений, пестицидов, гербицидов, нитратов, нитритов, стимуляторов роста и т. д.)

• Воздействие радиации, в том числе в малых дозах; избыточное ультрафиолетовое облучение

• Несбалансированное питание (дефицит пищевых волокон, микро- макроэлементов, избыток консервированных и рафинированных продуктов, недостаток витаминов и т. д.)

• Неадекватное использование антибиотиков

• Кишечные инфекции как бактериальной, так и вирусной этиологии (сальмонеллез, шигеллез, иерсиниоз, кампилобактериоз, рота- и энтеровирусные заболевания и т. д.)

• Высокая степень урбанизации и связанная с ней высокая вероятность передачи и быстрого распространения различных инфекционных заболеваний

• Физический и эмоциональный стресс («медвежья болезнь»)

• Резкая смена климатических и географических поясов («диарея путешественника»), сезонные колебания

• Химио- и гормонотерапия; лечение цитостатиками и иммунодепрессантами; регулярное употребление слабительных раздражающего действия

• Гиподинамия

• Злоупотребление алкоголем

Эндогенные причины:

• Возраст (младенческий и старческий)

• Хронические воспалительные заболевания ЖКТ, особенно с секреторной недостаточностью; стойкие дискинезии ЖКТ

• Аномалии строения ЖКТ, врожденные и приобретенные вследствие травм, заболеваний и операций

• Иммунодефицитные состояния различного происхождения, хронические инфекции

• Заболевания обмена веществ (в том числе сахарный диабет, атеросклероз и другие)

• Аллергии, особенно связанные с ЖКТ

• Онкологические заболевания