МОДИФИКАЦИЯ ГИДРОКСИГРПП СЕРИНА, ТРЕОНИНА, ТИРОЗИНА
|
|
|
|
|
O- |
|
O- |
|
O |
- |
O |
P O |
- |
-O P O |
|
|
O |
|
||
|
- |
|
|
|
||
|
|
O P O |
|
|
|
|
O |
H3C |
O |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
CH2 |
CH |
|
CH2 |
|
||
|
|
|
||||
NH CH CO |
NH CH CO |
NH CH CO |
|
|||
- |
O - |
|
|
O |
|
|
|
P |
|
O - |
|
N |
O |
O |
|
|
O P O- |
||
N |
|
||
|
C |
||
CH2 |
|
O |
|
CH |
|||
NH CH |
CO |
|
2 |
NH CH CO |
|||
Что необходимо знать
•Взаимодействие нуклеофильных центров белков с реагентом Сэнгера.
•Модификация имидазольного остатка в гистидине. Взаимодействие с реагентом Паули (солями диазония).
Метод аффинной модификации
•основан на применении реагентов, способных осуществить высокоспецифичную химическую модификацию биологических объектов за счет предшествующего химической реакции образования специфичного комплекса: реагент объект модификации
Конструирование аффинных реагентов:
•выбор структуры, обеспечивающей специфичное связывание реагента с изучаемым объектом;
•выбор реакционноспособной группы для будущего реагента;
•выбор способа объединения этих двух структурных элементов в единой молекуле реагента
Аффинная модификации надмолекулярных структур
(В. Будкер, А. Гиршович, “Russian field”)
|
Z |
X |
X |
|
|
|
|
|
L |
|
L |
||
L |
S1 |
L |
S1 |
S1 |
||
S1 |
|
|
|
|
|
X |
|
|
|
|
|
|
|
S2 |
|
S2 |
S2 |
|
|
S2 |
«Природный» |
Комплекс мишень•аффинный реагент |
|
комплекс |
||
Z – реакционноспособная группа; Х - линкер |
||
|
выбор структуры (L), обеспечивающей специфичное связывание реагента с изучаемым объектом (S);
выбор реакционноспособной группы для будущего реагента (Z); выбор способа объединения этих двух структурных элементов в единой молекуле реагента через мостик (X).
Ароматические азиды как функциональные группы для аффинных реагентов
Достоинство метода фотоаффинной модификации возможность
приготовить реакционную смесь в темноте и лишь после формирования специфических комплексов провести облучение, т. е. включить процесс модификации в определенное время. Арилазидные группировки можно возбуждать светом в ближнем ультрафиолетовом диапазоне, избегая при этом возбуждения и фотохимических реакций самих компонентов исследуемого комплекса. Использование интенсивных источников облучения позволяет проследить за кинетикой фотоаффинной модификации биополимеров.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
H N |
|
R |
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
N3 |
|
|
|
.. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
:N |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
R = |
|
|
|
|
|
hn |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
-OR' |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
RH |
|
|
|
|
|
-NR'2 |
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
-CR'3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
-N2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
-SR' |
||
X |
|
|
|
|
|
|
|
|
X |
|
|
||||||||||
|
|
|
|
X |
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
302
Арилазидные группировки для фотоаффинной модификации белков
N3 |
NH(CH2)nNH2 |
N3 |
F |
COOH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
N |
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
|
|
|
|
|
|
O- |
N |
|
|
|
|
|
|
|
NO |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
P |
|
|
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||||||
|
3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O- |
|
|
|
|
|
|
R |
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||