
- •ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ
- •При прохождении белков по секреторным путям эукариотической клетки происходит уменьшение уровня глутатиона и
- •Химические модификации
- •Модификация цистина
- •Химическая модификация аминокислотных остатков. Аналитическое применение
- •Пост-колоночная детекция аминокислот
- •Детекция пролина
- ••Формирование тромба in vivo в модели тромбоза, индуцированного лазером. Эта картинка воспроизведена из
- •Реакции ароматического нуклеофильного замещения. Взаимодействие с реагентом Сэнгера.
- •Метод Эдмана для секвенирования пептидов
- •Модификация гистидина. Взаимодействие с реагентом Паули (солями диазония).
- •Модификация белков с целью изменения биологической функции
- •СОЗДАНИЕ РНКазомиметика. Кислотно-основной катализ расщепления фосфодиэфирных
- •Модификация имидазольного остатка гистидина. В случае РНКазы приводит к ее инактивации
- •Модификация бокового радикала гистидина в центре связывания пептидной цепи при взаимодействии ее с
- •МОДИФИКАЦИЯ ГИДРОКСИГРУППЫ СЕРИНА
- •МОДИФИКАЦИЯ ГИДРОКСИГРПП СЕРИНА, ТРЕОНИНА, ТИРОЗИНА
- •Что необходимо знать
- •Метод аффинной модификации
- •Конструирование аффинных реагентов:
- •Аффинная модификации надмолекулярных структур
- •Ароматические азиды как функциональные группы для аффинных реагентов
- •Арилазидные группировки для фотоаффинной модификации белков
- •Аминокислотные остатки белков, подвергшиеся фотоаффинному мечению арилазидными реагентами
- •Продукты фотоиндуцировнного взаимодействия арилазидных реагентов с боковыми радикалами тирозина и триптофана
- •Продукты фотоиндуцировнного взаимодействия арилазидных реагентов с боковыми радикалами тирозина и триптофана
- •Модификация триптофана
- •Тип заместителя в бензольном кольце определяет природу частиц, образующихся при облучении арилазидных реагентов
- •Nature Biotechnology 1999
- •МОДИФИКАЦИЯ ТИРОЗИНА. СУЛЬФИРОВАНИЕ БЕЛКОВ
- •активатор
ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ
• Кое-что вспомним

При прохождении белков по секреторным путям эукариотической клетки происходит уменьшение уровня глутатиона и NAD(Р)Н, поэтому белки находятся часто в структурах, стабилизированных S-S мостиками
O |
|
O |
|
C |
NH |
C |
NH |
|
CH |
O2 |
CH |
|
|
|
|
HS |
|
-S |
|
|
SH |
S |
OH |
CH |
CH |
|
|
NH |
C |
NH C |
|
|
O |
O |
|
|
|
глутатион |
|
|
|
редуктаза |
O
C NH
CH
S S
CH
NH C
O
NADP+ |
NADPH + H+ |

Химические модификации |
|
- |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
NO |
|
|
NO |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
NO2 |
|
|
|
|
2 |
|
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
COO |
|
|
|
|
COO |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
COO |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
412 нм |
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
S |
- |
|
|
S |
|
E412 = 1,3*104 |
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
S |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
S |
|
|
pH 8 |
|
|
Природные модификации |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
CH2 |
O |
|
OOC |
COO |
|
|
|
OH |
|
|
|
H |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
N |
|
C |
C |
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
N |
C |
C |
|
O2N |
|
S S |
NO2 |
|
|
S |
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||||
H |
H |
|
|
реактив Эллмана |
|
|
|
|
|
|
|
|
CH2 |
O |
||||
|
|
|
|
|
|
H2C |
O |
|
|
|
|
|||||||
|
R''' |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
S |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
N |
C |
C |
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
S |
|
|
R''' |
S S |
|
|
(б) |
H |
H |
|
|
|
|
|
S |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
N |
|
|
O2 |
|
|
|
|
|
H2C |
O |
||
|
CH2 |
O |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
(в) |
|
( ) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
N |
C |
C |
|
S |
|
|
а |
|
|
|
|
|
N |
|
C |
C |
||
|
HN |
|
|
|
|
|
|
|
|
H |
|
H |
|
|||||
H |
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
SO3H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
S NO |
|||
|
CH2 |
O |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
NO |
|
|
|
CH2 |
O |
|
N |
C |
C |
|
HCOOH, H2O2 |
|
|
|
|
|
|
N |
|
C |
C |
||||
H |
H |
|
|
|
|
|
(е) |
|
(ж) |
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
H |
|
H |
R' |
|||||
|
CH2COO- |
|
|
|
|
SH |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
S |
|
|
|
|
|
|
|
|
O- |
O- |
|
|
S |
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
CH2 O |
|
|
|
|
|
|
||||
|
CH2 O |
|
|
ICH COO- |
|
R' O P O P O- |
|
|
CH2 O |
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
O |
|
|
|
|
||||
N |
C C |
|
|
|
2 |
N |
C |
C |
|
|
N |
|
C |
C |
||||
|
|
(г) |
pH 8,6; |
|
|
(д) |
|
|
|
|||||||||
H |
H |
O |
|
H |
H |
|
|
|
|
|
H |
|
H |
|
||||
|
|
|
|
трис-HCl |
|
|
|
|
|
|
|
ppi |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
N |
R'' |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
R O |
|
|
|
|
|
|
S |
|
|
|
|
|
(з) |
|
( |
) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
|
|
|
|
|
и |
|
|
|
|
CH2 |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
|
S |
|
||
|
CH2 |
O |
|
|
|
O |
|
|
R |
O |
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
CH2 |
|
OH |
OH |
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
CH2 O |
|||||
N |
C |
C |
|
R'' |
|
N |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
H |
H |
|
|
|
|
|
|
|
O |
|
|
OH |
OH |
N |
|
C |
C |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
O |
|
|
C NH2 |
|
|
|
H |
|
H |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
H3C |
|
|
|
|
|
|
|
|
N |
|
|
|
|
O |
|
|
|
|
|
H2 |
|
|
|
|
никотинамид |
|
|
|
|
|
|
|
|||||
R' = |
|
|
|
|
|
|
|
C |
|
|
|
|
||||||
C |
C C |
CH3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
NH2 |
|
|
|
|||||
H3C |
|
(H2C C C CH2)n |
|
|
|
R O |
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
CH2 O |
N |
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
n = 2 - остаток фарнезила |
|
|
|
|
|
|
|
|
R = ppA |
||||||||
|
n = 3 - остаток геранилгернила |
|
|
|
|
OH |
OH |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|

Модификация цистина


Химическая модификация аминокислотных остатков. Аналитическое применение
Определение количества сульфгидрильных групп на белке
•Реагент Эллмана - 5,5’-дитио-бис(2- динитробензойная кислота)
•Поглощение 5-тио-2-нитробензоата= 412 нм = 13 600

Пост-колоночная детекция аминокислот
|
|
O |
|
|
|
|
O |
|
|
|
|
|
C |
|
H2N CH C |
O |
|
C |
OH |
|
H2O |
|
|
C |
O |
OH |
C |
|
|
O |
||
|
|
C |
|
R |
C |
NH CH C |
OH |
|||
O |
|
O |
|
|
O |
|
O |
R |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
C |
|
|
|
|
C |
|
O |
|
|
|
C |
N CH |
R |
|
|
|
C N C H |
C |
|
|
|
C |
C |
O |
|
|
C |
R |
O |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
O |
|||
O H |
O |
|
|
|
OH |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
C |
||||
|
|
O |
|
|
|
O |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
C O |
||
|
|
C |
H |
|
|
C |
H |
O |
|
|
|
|
H2O |
|
|
C |
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
C |
N |
|
C NH2 |
R C |
H |
O |
||
|
|
C H |
|
H2O |
||||||
|
|
C |
|
R |
|
C |
O |
|
|
|
|
|
O |
|
|
|
Дикет о гидрин дам ин |
|
|
|
|
O |
O |
|
|
|
O |
O |
|
|
|
|
C |
H |
C |
|
H |
|
C |
C |
|
Ñèí å-ô èî ëåò î âû é |
|
C N C |
|
|
|
|
C N |
C |
|
|||
|
|
|
|
|
Ðóýì àí à |
|||||
C |
|
C |
|
|
|
C |
C |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
||||
O |
O |
|
|
|
O |
O |
|
|
|

Детекция пролина
O |
|
O |
|
|
O |
HN |
N |
CO2 |
H2O |
O |
COOH |
O |
|
|
н ин гидрин |
ï ðî ëèí |
æ åëò û é |
|
|

