Вопрос 59

59. Цитогенетический и экспресс цитогенетический методы изучения наследственности человека. Основные этапы работ, применение в медицине.

Цитогенетический метод:

С помощью цитогенетического метода устанавливают кариотип пациента или плода, на основании чего делают заключение о наличии хромосомной патологии. Метод включает несколько этапов:

1 этап: Взятие материала.

На практике для анализа обычно используют фибробласты, клетки костного мозга, амниотической жидкости, хориона. Наиболее удобны лейкоциты периферической крови.

2 этап: Культивирование клеточного материала.

Клетки переносят в искусственную среду и добавляют стимуляторы митоза, например фитоге-магглютинин.

3 этап: Накопление метафазных клеток.

Остановка митозов всех клеток на стадии метафазы достигается добавлением в среду колхицина - вещества разрушающего нити веретена деления и препятствующего расхождению хромосом к про-тивоположным полюсам.

4 этап: Гипотонизция клеток.

Обработка клеток гипотоническим раствором сопровождается их набуханием, разрывом ядерной оболочки, потерей межхромосомных связей, что облегчает последующий анализ метафазной пла-стинки.

5 этап: окрашивание препаратов.

В зависимости от задач применяют простое (рутинное – по Романовскому – Гимза), дифференциальное или флуоресцентное окрашивание метафазных пластинок.

Эксперсс-цитогенетический метод:

Применяется при диагностики хромосомных болезней, вызываемых числовыми нарушениями гетеросом. Кроме того, он находит широкое применение в судебной медицине и криминалистике когда по пятнам крови необходимо определить половую принадлежность. Метод включает несколько этапов:

1 этап :взятие материала.

На практике для анализа обычно используют клетки буккального эпителия или нейтрофилы периферической крови.

2 этап: окрашивание препаратов.

Используют простое (рутинное) окрашивание гематоксилином и другими основными красителями.

3 этап: микроскопирование и анализ препаратов

Диагностика основана на обнаружении полового хроматина – конденсированной и инактивирован-ной Х-хромосомы. В клетках буккального эпителия половой хроматин представлен в виде «телец Барра», а в нейтрофилах – в виде «барабанных палочек»

0- Нормальный мужчина ХУ или больная женщина Х0(синдром Шерешевского – Тернера)

1- Нормальная женщина ХХ или больной мужчина ХХУ(синдром Клайнфельтера)

2– Больная женщина ХХХ (синдром трипло – Х) или больной мужчина ХХХУ (синдром Клайнфельте-ра)

3– Больная женщина ХХХХ (полисомия Х) или больной мужчина ХХХХУ (синдром Клайнфельтера)

Вопрос 60

60. Генные заболевания, механизмы возникновения и классификация. Патогенез, основные про-явления, диагностика и подходы к лечению на примере финилкетонурии.

Генные болезни (генные мутации):

Генетическая:

Аутосомные болезни (доминантные, рецессивные)

Сцепленные с полом (Х-доминантные, Х – рецессивные, У – сцепленные)

Патогенетическая:

1. Болезни обмена веществ

2. Врожденные пороки развития

3. Комбинированные состояния

У человека обнаружены различные виды генных мутаций: замена одной пары нуклеотидов другой, изменение последовательности нуклеотидов, выпадение или вставка одного или нескольких нук-леотидов.

В зависимости от того, какая произошла мутация, ферментная активность может быть изменена различным образом: повышена или понижена – вплоть до полного отсутствия фермента. фенотипи-чеки такие болезни проявляются как наследственные болезни обмена веществ – ферментопатии.

Причиной заболевания является мутация гена фенилаланингидроксилазы (ФАГ) фермента, обеспечивающего превращение фенилаланина в тирозин, ведет к накоплению в организме токсических промежуточных продуктов.

При дефекте фермента фенилаланингидроксилазы фенилаланин не превращается в тирозин и накапливается в крови больных в больших концентрациях. Это приводит к частичному превращению фенилаланина в фенилуксусную и фенилмолочные кислоты, накопление которых наряду с повышенной концентрацией самого фенил аланина оказывает токсическое действие на мозг ребенка. В результате у детей наблюдается различная степень дефекта умственного развития.

Основные проявления финилкетонурии:

Высокие концентрации фенил аланина повреждение ЦНС повышенная нервно-мышечная возбудимость, судороги, слабоумие.

Низкие концентрации меланина гипопигментация радужной оболочки, волос, кожных покровов

Диагностика:

В основе диагностики лежит биохимический метод

1. В моче больных детей обнаруживаются продукты метаболизма фенилаланина (фенилпи-руват, фениллактат, фенилацетат)

2. В крови больных детей обнаруживаются повышенная концентрация фенилаланина

Лечение

Главный способ лечения фенилкетонурии – диетотерапия, ограничивающая поступление в организм фенилаланина до минимальной возвратной потребности (овощи, фрукты).