Изучение бронхолитической активности дигидроэргокристина проводили по методу “Регистрация бронхоспазма с помощью пистонрекордера”. Для опытов использовали морских свинок обоего пола массой 300-500 г. Животных наркотизировали уретаном (1,5 г/кг, внутрибрюшинно). Спонтанное дыхание выключали диплацином (30 мг/кг, внутривенно). Бронхоспазм вызывали внутривенным введением ацетилхолина в дозе 10 мкг/кг. Для регистрации величины бронхоспазма использовали бронхоспазм-трансдьюсер фирмы Ugo Basile, графическую запись осуществляли с помощью самописца той же фирмы. Дигидроэргокристин вводили внутривенно в дозе 1 мг/кг через 18 минут после второго контрольного введения ацетилхолина. Затем ацетилхолин вводили на фоне препарата через 2 минуты и далее каждые 20 минут. Опыты показали, что на фоне введения дигидроэргокристина в дозе 1,0 мг/кг снижение величины ацетилхолинового бронхоспазма через 2, 20, 40, 60, 80, 100 и 120 минут составляла 17,4, 12,2, 7,3, 7,9, 16,1 и 12,2% соответственно, что свидетельствовало о наличии у дигидроэргокристина умеренной бронхолитической активности.

Токсикологическое изучение дигидроэргокристина выявило соответствие полученных показателей имеющимся в литературе данным о токсичности дигидроэргокристина - мезилата.

Заключение.

Дигидроэргокристина мезилат (С35H415O5*CH3SO3H), полученный из эргокристинового штамма спорыньи обладает способностью блокировать прессорный вазомоторный рефлекс и биоэлектрическую активность в симпатических нервах, что указывает на его способность предупреждать развитие констрикторных реакций мозговых сосудов адренергической природы. По данной активности дигидроэргокристин не уступает препарату сравнения – дигидроэрготоксину.

297

Изучение общефармакологических свойств показало наличие у дигидроэргокристина гипотензивных и брадикардических эффектов выраженной α-адренолитической и слабой серотонинолитической активности, отчетливое ангиопротекторное действие.

Кроме того, у препарата выявлены незначительно выраженные другие фармакологические свойства (снижение спонтанной двигательной активности, седативные, противовоспалительные, бронхолитические и противосвертывающие эффекты).

По совокупности полученных экспериментальных данных, а также принимая во внимание тот факт, что находившееся на изучении вещество является аналогом по фармакологическим свойствам, токсичности и химическому строению зарубежным дигидроэргокри- стин-содержащим препаратам, Минздрав России (Приказ МЗ РФ № 382 от 25.10.99) разрешил применение дигидроэргокристина в широкой медицинской практике в виде таблеток для перорального применения по 0,00025 г в качестве альфа-адреноблокатора для лечения нарушений мозгового кровообращения, сопровождающихся артериальной гипертензией.

ЛИТЕРАТУРА.

1.Ergot, Alkaloids and Related Compounds (1978) Ed. by Berde B., Schild H.O. Springer-Verlag. V.49.

2.Mosa B., Vtei Galena. (1980) Information on dihydroergotoxine SPOFA (substance and preparations).

3.Markwardt F. et al (1977)/Trombosis Res. №10., P.783-789.

4.Marttindale. (1982) The Extra Pharmacopgeia.-12th ed. London., The Pharmaceutical Press.

Kolkhir V.K., Omelnitskiy P.P., Sakovitch G.S., Glazova N.G., Alibecov S.D., Shkarenkov A.A., Sokolskaya T.A., Vichkanova S.A., Zvonkova E.N., Pineev C.A., Kuznecov

U.B., Krutikova N.M.

All-Russian Research Institute of Medicinal and Aromatic Plants, Moscow, Russia

DIHYDROERGOCRISTIN - α-ADRENOLITIC REMEDY FOR THE

TREATMENT

OF BLOOD-CIRCULATION DISTURBANCES OF THE BRAIN.

As a result of many-years selectional investigations in VILAR was a creation of a new ergocristin-producing stamm of spur (ergot). On the basis of ergocristin dihydroergocristin (DE) have been obtained. The pharmacological study allowed identifying it with DE, what is used in the medicinal practice. The new drug on the DE-basis was recommended for the medicinal use.

КОЛХИР В.К., МАЙНСКОВ А.В., САКОВИЧ Г.С., ЛЕСКОВА Т.Е., БАГИНСКАЯ А.И., МИНЕЕВА М.Ф., ОМЕЛЬНИЦКИЙ П.П., ВИЧКАНОВА С.А.

298

ВИЛАР, ТОО “Виктовит”, Москва, Россия

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КАСМИНА – НОВОГО ОТЕЧЕСТВЕННОГО АНТИТРОМБОТИЧЕСКОГО СБОРА

Повышение свертывающего потенциала крови – один из ведущих факторов патогенеза наиболее распространенных сердечно-сосудистых заболеваний (атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, хроническая венозная недостаточность и др.) и одна из основных причин таких тяжелых осложнений этих заболеваний как тромбозы и тромбоэмболии [1]. Поэтому антикоагулянты входят в арсенал патогенетических средств лечения этих заболеваний [2, 3]. Однако применение современных сильнодействующих синтетических антикоагулянтов требует большой осторожности, прежде всего, в связи с возможными кровотечениями. Как правило, их применяют в острых случаях в условиях постоянного врачебного контроля. Они противопоказаны при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки и ряде других заболеваний. Антикоагулянтных средств, которые могут использоваться более широко, в том числе и с целью профилактики тромбообразования, очень немного. К ним относятся некоторые лекарственные растения: каштан конский, левзея сафлоровидная, патриния средняя, гингко билоба, чеснок и некоторые другие [4].

Разработанный в институте лекарственный растительный сбор “Касмин”, обладает мягким антикоагулянтным действием и целым рядом других фармакологических свойств, обеспечивающих его многостороннее положительное влияние при сердечно-сосудистых заболеваниях.

Всостав касмина входят пять видов измельченного официнального фармакопейного лекарственного растительного сырья: каштан конский, оказывающий, наряду с противосвертывающим действием, вентонические и противовоспалительные эффекты; корни солодки, обладающие антиагрегационными, противовоспалительными, противоязвенными, гиполипидемическими и антиаллергическими свойствами; мята перечная или мелисса, проявляющие успокаивающую и анальгезирующую активности; плоды боярышника, оказывающие мягкое кардиотоническое и сосудорасширяющее действие; плоды шиповника, обладающие общеукрепляющими (источник витаминов С и Р и провитамина А), гиполипидемическими и желчегонными свойствами [5, 6, 7]. Подбор компонентов и их количественных соотношений в сборе проводили не только с учетом их фармакологической активности, но и с точки зрения технологичности производства и соответствующих потребительских свойств (вкус, цвет, запах).

Вусловиях экспериментального изучения проведен подробный анализ действия сбора на показатели свертывающей системы крови, исследовали его влияние на функциональное состояние основных систем и органов, на процессы воспаления и регенерации. Касмин изу-

299

чали в виде водного настоя, приготовленного по следующей прописи: содержимое 4 г сбора (2 чайные ложки сбора или содержимое 1 фильтр-пакета, или пакета из ламинированной бумаги) заливали кипящей водой (1 стакан), накрывали крышкой и настаивали 30 минут.

Влияние касмина на гемокоагуляцию изучали в условиях опытов in vitro (1-50 мкл/мл крови), при однократных внутривенном (100 мг/кг) и пероральном (500 мг/кг) введениях кроликам, массой 2,0-3,5 кг, а также при многократном введении кроликам (200 мг/кг) на фоне применения непрямого антикоагулянта фенилина (30 мг/кг). В экспериментах in vivo кровь для анализа отбирали у животных в исходном состоянии и через 5-60 мин после внутривенного, или через 15-120 мин после внутрижелудочного введений касмина. При изучении влияния касмина на эффекты фенилина при их совместном применении настой сбора вводили кроликам внутрижелудочно в течение 6-ти дней, на 7-ой день животные получали касмин и фенилин одновременно; контрольной группе животных однократно внутрижелудочно вводили фенилин. Кровь для исследования отбирали в исходном состоянии, а также через 24 и 48 часов после введения фенилина. Оценку состояния системы гемостаза проводили по общепринятым тестам [8]. Определяли время рекальцификации плазмы (Тр), толерантность плазмы крови к гепарину (ТПГ), тромбиновое время (Та), тромбоэластографические показатели (ТЭГ, на приборе "Тромб-2"): время реакции (R), время образования сгустка (К), максимальная амплитуда тромбоэластограммы (Ма). Кроме того, в экспериментах in vitro исследовали влияние касмина на АДФ - индуцированную агрегацию тромбоцитов кроликов с использованием прибора “Агрегометр”. Результаты экспериментов обрабатывали разностным методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента [9].

Эксперименты в условиях in vitro позволили обнаружить прямое действие касмина на факторы гемокоагуляции и агрегацию тромбоцитов. Уже при концентрации касмина 1 мкл/мл крови наблюдалось заметное замедление процесса свертывания крови, характеризующееся удлинением времени R на 25 % и времени К на 36 % по сравнению с контролем (табл. 1). Эффект возрастал с увеличением концентрации касмина в крови: при 10 мкл/мл крови время R и время К достоверно увеличивались на 46 % и 59 % соответственно, по сравнению с контролем. Касмин в изученных концентрациях оказывал и умеренное антиагрегационное действие, что характеризовалось дозо-зависимым уменьшением степени АДФ - индуцированной агрегации тромбоцитов кроликов на 3.4-37.2 %% по сравнению с контролем

(табл. 1).

Таблица 1.

Влияние касмина на гемокоагуляцию и агрегацию тромбоцитов в условиях опытов in vitro

300

Эксперименты на животных подтвердили наличие антикоагулянтного эффекта у касмина. После однократного внутривенного введения касмина кроликам в дозе 100 мг/кг уже через 5 мин наблюдалось увеличение на 50% времени свертывания в реакции рекальцификации, времени К ТЭГ - на 74 %; на 38% уменьшалась толерантность к гепарину по сравнению с исходным уровнем, почти в 2 раза удлинялось время R ТЭГ. Выраженное, и достоверное по большинству определяемых параметров, снижение свертывающего потенциала крови кроликов наблюдали и через 60 минут после введения касмина (табл.2).

Таблица 2.

Влияние касмина на гемокоагуляцию у кроликов при внутривенном введении в дозе 100 мг/кг

Примечание: Тр - время рекальцификации плазмы, ТПГ - толерантность плазмы к гепарину, Та - тромбиновое время, R - время реакции, К - время образования сгустка, Ма - максимальная амплитуда тромбоэластограммы;

* - p<0,05, ** - p<0,01 по сравнению с исходным уровнем.

Антикоагулянтный эффект касмина отчетливо проявлялся после его однократного внутрижелудочного введения в дозе 500 мг/кг. Через 30 мин после его введения на 25 % увеличивалось время свертывания плазмы крови в реакции рекальцификации (р<0.01), в 1,8 раза возрастало время образования сгустка тромбоэластограммы, заметно уменьшалась толерантность плазмы к гепарину. Противосвертывающий эффект касмина наблюдался и через два часа после его введения (табл. 3).

Таблица 3.

301

Влияние касмина на гемокоагуляцию у кроликов при внутрижелудочном введении в дозе 500 мг/кг

Примечание: Тр - время рекальцификации плазмы, ТПГ - толерантность плазмы к гепарину, Та - тромбиновое время, R - время реакции, К - время образования сгустка, Ма - максимальная амплитуда тромбоэластограммы;

* - p<0,05, ** - p<0,01 по сравнению с исходным уровнем

Известно, что фенилин при приеме внутрь вызывает гипопротромбинемию, связанную с нарушением процесса образования протромбина в печени. Максимум противосвертывающего эффекта наблюдается через 24-30 часов после приема антикоагулянта. В наших экспериментах (табл.4) максимальный эффект фенилина наблюдался через 24 часа после его введения: в 2,1 раза увеличивалось время свертывания в реакции рекальцификации, на 73% уменьшалась толерантность плазмы к гепарину и на 63% увеличивалось протромбиновое время по сравнению с показателями интактной группы. Профилактическое (6-ти кратное) введение касмина усиливало антикоагулянтный эффект фенилина: на 8% увеличивалось протромбиновое время, на 17% - время рекальцификации, на 23,7% уменьшалась толерантность к гепарину, по сравнению с группой животных, получавших один фенилин. Через 2 суток время рекальцификации и толерантность к гепарину в обеих опытных группах приближалась к норме, а протромбиновое время еще было достоверно увеличено по сравнению с интактной группой животных.

Таблица 4.

Влияние касмина на гемокоагуляцию на фоне применения фенилина (М+m)

302

* - p<0,05 по сравнению с интактной группой

Изучение гиполипидемической активности касмина проводили на нормолипидемических и гиперлипидемических белых беспородных крысах обоего пола массой 150-180 г. В первом случае касмин в дозах 50 и 100 мг/кг вводили животным внутрижелудочно в течение 4-х дней. Контрольные животные получали адекватное количество воды. В конце эксперимента животных забивали декапитацией и отбирали кровь, для последующего определения уровня общего холестерина, триглицеридов и бета-липопротеидов. Определение биохимических показателей сыворотки крови проводили с использованием спектрофотометра МРС2000. Модель гиперлипидемии у крыс вызывали однократным внутрибрюшинным введением тритона WR-1399 (неионовый детергент) в дозе 250 мг/кг. Касмин вводили внутрижелудочно в дозах 50 и 100 мг/кг. Контрольные животные получали адекватное количество воды. Содержание липидов измеряли в сыворотке крови крыс через 18 часов после введения тритона. Установлено (табл.5), что в дозах 50 и 100 мг/кг касмин не оказывал существенного влияния на уровень общего холестерина сыворотки крови у нормо- и гиперлипидемических крыс по сравнению с контролем. В тоже время, в условиях обеих моделей, касмин способствовал существенному снижению уровня бета-липопротеидов (на 26 и 44 %% соответственно дозе у нормолипидемических крыс, на 13 и 58 %% - у гиперлипидемических крыс) и триглицеридов (на 36 % при дозе 50 мг/кг у нормолипидемических крыс и на 21.5 и 20 %% (p<0.05) у гиперлипидемических крыс).

303

Изучение влияния касмина на процессы регенерации проведено с использованием индометациновой [10] и этаноловой [11] моделей экспериментальных язв желудка у крыс. О гастропротекторных свойствах касмина судили по комплексу показателей: гибель крыс в опытных и контрольных группах, процент крыс с язвами желудка, средней частоте возникновения язвенных дефектов, средней площади этих дефектов. Исходя из данных параметров, вычисляли индекс Паулса [12] - интегральный показатель противоязвенного действия. Индометациновые язвы желудка были воспроизведены у 12 белых беспородных крыс-самцов, массой 200-240 г. Животные были разделены на 2 группы: контрольную и опытную. До начала эксперимента крысы в течение 36 часов голодали со свободным доступом к воде. Касмин в дозе 1 г/кг вводили животным опытной группы дважды с часовым промежутком. Контрольная группа получала в том же объеме воду. Через час после последнего введения препарата животным внутрижелудочно вводили индометацин в дозе 30 мг/кг. Через 17 часов крыс забивали декапитацией. Брюшную полость вскрывали, извлекали желудок, разрезали его по малой кривизне и подсчитывали число и площадь язвенных дефектов. Этаноловые поражения желудка были воспроизведены у 19 белых беспородных крыс-самок массой 180220 г. Накануне эксперимента животные были лишены пищи в течение 36 часов (вода без ограничения). В день проведения эксперимента касмин в дозах 0.5 и 1.0 г/кг вводили крысам внутрижелудочно в объеме 1.0 мл/100 г массы животного дважды с часовым промежутком и третий раз - за 30 минут до введения 80 % этанола в объеме 1 мл/крысу. Еще через час крыс забивали декапитацией, извлекали желудки и проводили макроскопическую ревизию слизистой.

В случае индометационовой модели язв, введение касмина несколько уменьшало (на 12 %) частоту возникновения язвенных дефектов слизистой желудка крыс по сравнению с контролем, но значительно (на 69 %) уменьшало среднюю площадь язвенных поражений и в 32 раза - индекс Паулса. При этом терапевтический эффект составил 3,2 по отношению к контролю (табл. 6). На этаноловой модели язв касмин оказывал отчетливое дозозависимое гастропротекторное действие на слизистую желудка крыс, о чем свидетельствует уменьшение процента больных крыс, средней частоты возникновения и площади язвенных дефектов, индекса Паулса.

Таблица 6.

Влияние касмина на экспериментальные язвы желудка у крыс

304

Седативные эффекты касмина изучали на модели хлоралгидратного сна у мышей. Касмин белым беспородным мышам массой 18-20 г вводили в дозах 50-1000 мг/кг внутрижелудочно, а контрольным животным вводили по 0.2 мл дистиллированной воды, за 20 мин до подкожного введения хлоралгидрата в дозе 300 мг/кг. Регистрировали латентные периоды сна и длительность сна по рефлексу переворачивания из бокового положения. Введение касмина сокращало латентные периоды сна на 13,5-43,3% в зависимости от дозы, длительность

сна увеличивалась на 6,1-41,5%. Длительность сна опытных животных заметно увеличивалась. При возрастании дозы препарата эффект увеличения продолжительности сна был более

выражен (табл. 7).

Таблица 7

.

Влияние касмина на хлоралгидратный сон у мышей (n=10)

Результаты опытов свидетельствуют о том, что касмин в больших дозах потенцирует снотворный эффект хлоралгидрата, т.е. оказывает умеренное седативное действие.

305

Для оценки анальгетической активности касмина была выбрана модель "уксуснокислых корчей" у мышей. Данная модель воспроизводится путем внутрибрюшинного ведения животным химического агента - 0.75 % раствора уксусной кислоты - в объеме 0,25 мл/животное. В экспериментах использовали белых беспородных мышей-самцов массой 1820 г. Касмин вводили внутрижелудочно однократно в дозе 100 мг/кг за 30 мин до введения уксусной кислоты. Контрольные животные получали воду. Регистрацию количества "корчей" (боковая реакция) у животных осуществляли визуально в течение 10 мин после воспроизведения модели. Как показали результаты исследования, касмин обладает умеренной анальгетической активностью, что проявлялось в уменьшении числа корчей на 25.6 % у опытных животных по сравнению с контрольными.

Изучение диуретической активности касмина проводили по общепринятому методу [13] на белых беспородных крысах обоего пола массой 170-200 г. Животные находились на постоянном пищевом и водно-солевом режиме. Сбор мочи осуществляли в течение 5-ти часов в чешских обменных клетках на фоне водной нагрузки в объеме 5 мл/100 г. Установлено, что под влиянием касмина интенсивность мочеиспускания животных достоверно увеличивалась более чем в 2 раза, что свидетельствует о выраженной диуретической активности препарата.

Изучение влияния касмина на артериальное давление проводили в экспериментах на белых беспородных крысах обоего пола массой 200-220 г с использованием полиграфа RM6000 фирмы "Nichon Kohden". Касмин вводили животным внутрижелудочно в дозе 100 мг/кг. Систолическое и диастолическое артериальное давление у крыс регистрировали в исходном состоянии и в течение 90 минут после введения касмина. После введения касмина наблюдалась слабая тенденция к снижению систолического и диастолического давления, различия с исходным показателем составляли 2-12%. Учитывая эти результаты, а также то, что у контрольных животных в некоторых случаях наблюдалось небольшое повышение показателей артериального давления, можно сделать вывод о том, что касмин оказывает незначительное гипотензивное действие.

Острую токсичность касмина исследовали по методу Литчфилда-Уилкоксона на белых беспородных мышах массой 18-20 г при двух способах введения препарата в виде настоя: внутрибрюшинном и внутрижелудочном.

При внутрижелудочном введении касмин, в дозах 2.5-10 г/кг, не вызывал гибели животных. Установлены следующие параметры острой токсичности касмина при его внутри-

брюшинном введении: ЛД16 - 870 мг/кг, ЛД50 - 1800 (1538-2106) мг/кг и ЛД84 - 3810 мг/кг,

в пересчете на сухое сырье. Полученные данные свидетельствуют о том, что касмин по пока-