- •Министерство здравоохранения Российской Федерации гоу впо Оренбургский государственный медицинский университет Кафедра микробиологии, иммунологии, вирусологии
- •Модуль Клиническая микробиология занятие№2
- •Лабораторная диагностика (рис. 2)
- •Методика (метод серийных разведений)
- •Модуль Клиническая микробиология 3 а н я т и е №3
- •Газовая гангрена
- •Столбняк
- •Ботулизм
- •Псевдомембранозный колит
- •Неспорообразующие (неклостридиальные) анаэробные инфек- ции
- •Аннотация к препаратам по теме: «микробиология анаэробных инфекций»
- •II. Лечебно-профилактические препараты
- •Модуль Клиническая микробиология 3 анятие4
- •Тема: «Медицинская микология. Грибы как возбудители оппортунистических ин- фекций»
Ботулизм - тяжелое
нейропаралитическое заболевание
человека и животных, которое вызывается
одним из 7 типов нейротоксинов,
продуцируемых Clostridiumbotulinum. Ботулизм относится
к пищевым токсикоинфекциям.
Этиология.
Возбудитель -Clostridiumbotulinum. Грамположительные
палочки, образуют субтерминально
расположенную овальную спору, напоминая
теннисную ракетку. Облигатные анаэробы.
Дифференцируются на 7 сероваров по
антигенной специфичности экзотоксинов
(A,B,C,fl,E,F,G).
Наиболее распространены серовары
возбудителя ботулизма А, В, С, Е.
Эпидемиология.
Сапроноз. Источник инфекции - почва,
вода. Факторы передачи - пищевые продукты
(консервы домашнего приготовления).
Путь передачи - пищевой. Восприимчивость
высокая. Болезнь возникает, как правило,
в результате употребления пищевых
продуктов, содержащих токсиныClostridiumbotulinum.
Патогенез.Пищевая токсикоинфекция. Фактор
патогенности - термостабильный экзотоксин
нейрогенного действия: блокирует
передачу нервного импульса в
периферических синапсах. Развиваются
параличи вследствие поражения бульбарных
центров (расстройство аккомодации,
двоение в глазах, нарушение глотания,
афония).
Лабораторная
диагностика.
Первый принцип
диагностики - обнаружение токсина и
определения его серовара. Используют
реакцию нейтрализации токсина на белых
мышах, чувствительность которой
составляет 10 пг/мл (пикограмм/мл), а
также ПЦР для выявления гена ботулинического
нейротоксина.
Иммунитет.
Антитоксический, типоспецифический,
ненапряженный.
Терапия.
Специфическая - противоботулинические
сыворотки против токсинов А, В, Е
(наиболее распространенных).
Профилактика.Специфическая - ботулинический
полианатоксин (по эпидпоказа- ниям),
смесь моновалентных противоботулинических
сывороток (экстренная профилактика).
Этиология.Возбудитель-
Clostridiumdifficile. Грамположительные,
спорообразующие палочки. Облигатные
анаэробы.
Эпидемиология.Часто развивается по типу внутрибольничной
инфекции. Источник инфекции -
бактерионосители. Путь передачи -
контактно-бытовой. Восприимчивость
высокая у лиц с иммунодефицитом.
Патогенез.Условно-патогенный вид. Основные факторы
патогенности: энтеротоксин, цитотоксин.
Развивается геморрагический некроз
толстой кишки, как следствие дисбактериоза.
Лабораторная
диагностика.Основные методы 1-ого принципа:
бактериологический, биологический
(реакция нейтрализации токсина
антитоксином на мышах).
Иммунитет.
Ненапряженный, антибактериальный,
антитоксический.
Терапия-
антибиотики.
Профилактика.Рациональное применение антибиотиков,
соблюдение санитарно- гигиенического
и противоэпидемического режима в
стационаре.
Неклостридиальные
анаэробы составляют обширную группу
облигатных анаэробов, включающих
различные таксономические категории.
Неспорообразующие анаэробы (бактероиды,
фузобактерии, превотеллы и др) являются
составной частью нормальной микрофлоры
человека. Они обитают на слизистой
оболочке ротовой полости, желудочно-
кишечного тракта, мочеполовых путей
человека. При определенных условиях,
снижающих уровень кислорода и
окислительно-восстановительного
потенциала в тканях, неспо
20Псевдомембранозный колит
Неспорообразующие (неклостридиальные) анаэробные инфек- ции
рообразующие
анаэробы вызывают гнойно-воспалительные
заболевания различной локализации.
В этиологии воспалительных заболеваний
ротовой полости важная роль принадлежит
анаэробным грамположительным бактериям
родов PrevotellaиPorphyromonas;
брюшной полости, органов малого таза
и мочеполовой системы - представителям
родаBacteroides; кишечника -
бактероидам и пептострептококкам.
Бактероидная инфекция - это чаще
эндогенная инфекция, связанная с
повреждением слизистых оболочек, где
вегетируют представители семействаBacteriodaceae. Моноинфекцию
вызывают чаще В.fra-gilis,
остальные встречаются в ассоциациях
между собой и другими бактериями. В
лабораторной диагностике используют
бактериологический метод с выделением
чистой культуры в строго анаэробных
условиях.
Экспресс-индикация
гнойно-воспалительных заболеваний,
вызываемых неспорообразующими,
анаэробами проводится газожидкостной
хроматографией для выявления микробных
метаболитов - летучих жирных кислот
(уксусная, пропионовая, масляная,
капроновая и др.), а также ароматических
производных (фенилпропионовая,
фенилуксусная кислоты), метаболитов
фенола, индола, пирола и др.
Этиология.
Основные виды возбудителей:Bacteroidesfragilis,Porphyromonasgingi-valis,Fusobacteriumnucleatum,Prevotellamelaninogenicus,Leptotrichiabuccalis,Bilophilawadswozthia.
Полиморфные грамотрицательные палочки.
Облигатные анаэробы.
Эпидемиология.Эндогенная инфекция в условиях
иммунодефицита. Внутрибольничная,
оппортунистическая инфекция.
Патогенез.
Условно-патогенные виды. Представители
нормальной микрофлоры человека:
толстой кишки, полости рта, половых
путей, верхних дыхательных путей.
Факторы патогенности: капсула, пили,
ферменты агрессии, эндотоксин, экзотоксин
(лейкоци- дин). Формы поражения:
гнойно-воспалительные заболевания
разной локализации, ангина Венсана
(фузобактерии в ассоциации со спирохетой
ротовой полости).
Лабораторная
диагностика.
Основной метод - бактериологический в
условиях анаэробиоза.
Иммунитет.
Ненапряженный, антибактериальный.
Терапия- антибиотики.
Профилактика.Санитарно-гигиенические и
противоэпидемические мероприятия в
стационаре.
21
Схема лабораторной
диагностики газовой гангрены, столбняка
Экспресс-метод
22
Схема лабораторной
диагностики ботулизма Экспресс-метод
23
Схема лабораторной
диагностики заболеваний, вызванных
неспорообразующими
анаэробными
бактериями Экспресс-метод
Транспортные
среды: 10% лизи- рованная кровь в глицерине,
10% лизированная кровь в физиологическом
растворе, пеп- тонно-дрожжевой бульон
с глюкозой и др.
Анаэробный
гемагар, анаэробный гемагар с канамицнном
(неомицином, гентамицином, налидиксовой
кислотой), питательная среда для
контроля стерильности и др.
Анаэробный
гемагар
24
ВОПРОСЫ ДЛЯ
ПОДГОТОВКИ:
Своеобразие условий
заражения возбудителями столбняка,
ботулизма, газовой гангрены.
Патогенез столбняка,
ботулизма, газовой гангрены. Факторы
вирулентности возбудителей.
Методы лабораторной
диагностики клостридиозов.
Особенности
иммунитета при столбняке, ботулизме,
газовой гангрене.
Специфическая
профилактика и лечение столбняка,
ботулизма, газовой гангрены.
Значение
неспорообразующих анаэробов в патологии
человека.
Методы лабораторной
диагностики и терапии неклостридиальных
анаэробных инфекций.
ПЛАН САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ
РАБОТЫ:
Изучить схемы
лабораторной диагностики ботулизма,
столбняка, газовой гангрены и
неклостридиальных анаэробных инфекций.
Выполнить практические
работы:
«Использование
экспресс метода для обнаружения
экзотоксинов возбудителей газовой
гангрены в исследуемом материале»
«Бактериологический
метод диагностики неклостридиальной
анаэробной инфекции» Работа
1
Цель:
Ознакомиться
с экспрессным методом обнаружения
экзотоксинов возбудителей газовой
гангрены в исследуемом материале.
Задача.
В хирургическом
отделении у больного развилось осложнение
послеоперационной раны. Клинически
была заподозрена газовая гангрена. При
микроскопии раневого экссудата
обнаружены крупные грамположительные
палочки с закругленными концами. С
учетом быстрого прогрессирования
анаэробной инфекции была проведена
экспресс-диагностика для обнаружения
экзотоксинов в крови больного. Для
этого поставлена РПГА. Изучите
микропрепарат из раневого отделяемого.
Учтите результат РПГА, дайте диагностическую
оценку.
Методика.
Жидкие
эритроцитарные антительные диагностикумы
представляют собой1% взвесь формалинизированных и
сенсибилизированных антитоксинами
эритроцитов барана. В полистероловых
пластинах готовят двукратные разведения
исследуемой сыворотки в 0,9 %-ном растворе
хлорида натрия в объеме 0,5 мл. В каждую
из лунок с разведениями сыворотки
прибавляют 0,25 мл антительного
диагностикума т.е. эритроцитов с
адсорбированными антитоксинами к
экзотоксинам соответствующих видов
возбудителей газовой гангрены.
Обязательными контролями являются: 1.
Контроль на отсутствие спонтанной
агглютинации диагностикума. Для его
постановки в лунки с 0,5 мл физраствора
добавляют 0,25 мл диагностикума. 2. Контроль
на отсутствие в испытуемой сыворотке
агглютининов к эритроцитам барана. Для
этого к 0,5 мл исследуемой сыворотки
добавляют в разведении1:100взвесь несенсибилизированных
формалинизированных эритроцитов
барана. 3. Контроль с положительной
сывороткой для РПГА. Реакция учитывается
по наличию агглютинированных эритроцитов,
покрывающих дно лунки в виде «зонтика».
Отрицательный результат учитывается
в случае оседания неагглютинированных
эритроцитов в виде маленького «колечка»
в центре лунки.
25
|
Микроскопический метод |
РПГА | ||||||||
|
Иссле дуемый матери ал |
Микроскопия исследуемого материала(рисунок) |
Диагностикумы антительные эритроцитарные |
Разведение сыворотки больного | ||||||
|
цельная |
1/2 |
1/4 |
1/8 |
1/16 |
К | ||||
|
|
|
Perfringens Novyi Histolyticum Septicum |
|
|
|
|
|
| |
Вывод:
1. Подтверждается
ли диагноз? Если да, то каким методом и
почему?
Является ли данная
инфекция моно- или полимикробной? Ответ
объясните, используя данные микроскопии
и РПГА.
Какими экспресс-методами
можно обнаружить экзотоксины в
клиническом материале? Работа 2
Цель:
Изучить
бактериологический метод диагностики
не-клостридиальной анаэробной
инфекции
Задача.
Больной
поступил в хирургическое отделение по
поводу проникающего ранения брюшной
полости. После операции на 2-е сутки
развились симптомы перитонита Для
установления этиологии перитонита
проведено микроскопическое и
бактериологическое исследование
перитонеального экссудата путем посева
на питательные среды (Эндо, желточно-солевой
агар, МПА) В микропрепарате из
перитонеального экссудата были
обнаружены грамотрицательные
палочки. Роста микрофлоры на питательных
средах не выявлено. Учитывая наличие
клинических симптомов, характерных
для неклостридиальных анаэробов,
проведено повторное бактериологическое
исследование экссудата для обнаружения
анаэробной флоры. Учтите результат
бактериологического исследования.
Установите этиологию перитонита.
Оформите протокол.
Методика.
Исследуемый
материал засевают на питательные среды
для транспортировки анаэробов. Затем
делают посев на специальную питательную
среду, например
26
|
Исследуемый материал |
Микроскопия исследуемого материала |
Среда для |
Метод создания анаэроб ных условий |
Характеристика колоний |
Микроско пия колоний |
Микроско пия чистой культуры |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
II
этап. Идентификация чистой культуры
анаэробов |
Рост на среде с канамицином |
Проба на аэротолерантность |
Биохимические свойства по анаэротесту |
Вид микроорганизма | ||||||||||
|
ряд |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
| |||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| ||||||
|
|
|
|
|
|
| |||||||||
Вывод:
Назовите этиологический
фактор перитонита.
27




2. Чем объясняется
отсутствие роста микрофлоры на
питательных средах: МПА, Эндо, ЖСА?
Укажите возможные
пути проникновения в брюшную полость
возбудителя, вызвавшего перитонит у
данного больного
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ
РАБОТЫ ВО ВНЕУЧЕБНОЕ ВРЕМЯ АНАЭРОБНЫЕ
ИНФЕКЦИИ (КЛОСТРИДИОЗЫ)
Основные физиологические
свойства спорообразующих
возбудителей
анаэробных
инфекций
Морфология
спорообразующих клостридий Морфологические
признаки клостридий
Природный резервуар
клостридий
Заболевания, причиной
которых являются клостридии СТОЛБНЯК
Вид возбудителя
(латынь)
Расположение споры
у клостридии столбняка
Механизмы заражения
столбняком
Входные ворота при
столбняке новорожденных
Входные ворота при
столбняке
Строго анаэробный
тип дыхания, выделение экзотоксина,
размножение в мертвых тканях, способность
превращаться в споры
Крупные (10 мкм)
грамположительные спорообразующие
палочки клостридии
Диаметр споры
превышает диаметр поперечного
размера Бактерии
Почва
Столбняк, газовая
инфекция, ботулизм, псевдомембранозный
колит
Clostridiumtetani
Терминальное, в
виде "барабанной палочки" Раневой,
артифициальный '
Пупочный канатик
Слизистая оболочка
матки рожениц
Основной фактор
вирулентности возбудителя столбняка
Экзотоксин
28
Цель использования
биологической пробы при диагностике
столбняка
Цель бактериологического
метода в диагностике столбняка
Препарат, используемый
для создания активного иммунитета
против столбняка
Контингент для
плановой вакцинации
Контингент для
экстренной вакцинации против столбняка
Препарат для создания
пассивного иммунитета против
столбняка
Показания для
использования противостолбнячной
сыворотки
Метод введения
противостолбнячной лошадиной
сыворотки ГАЗОВАЯ ИНФЕКЦИЯ
Вид основного
возбудителя (латынь)
Расположение спор
у возбудителей газовой инфекции
Факторы патогенности
возбудителей газовой инфекции
Факторы, способствующие
развитию газовой инфекции
Особенность
патогенеза газовой инфекции
Причина быстрого
развития отека, некроза ткани при
газовой инфекции
Основные методы
диагностики газовой инфекции
Препараты, используемые
для специфиче-
Обнаружение
экзотоксина в исследуемом материале
Проверка стерильности
перевязочного, шовного материала,
препаратов для парентерального
введения, степени загрязнения окружающей
среды (почва, воздух), реже для подтверждения
клинического диагноза
Столбнячный анатоксин
Дети с 3-х месяцев
Люди, получившие травмы
Противостолбнячная
сыворотка
Вводится больным
столбняком, больным с травмами, ожогами
и т.д
Дробно, по Безредко
ClostridiumperfringensСубтерминально
или в центре
Экзотоксины, ферменты
Характер раны
(анаэробные условия, мертвая ткань);
состояние макроорганизма (шок,
кровопотеря); ассоциация с аэробными
микроорганизмами (кокковая флора и
т.д.)
Бурное развитие
воспалительной реакции, некроз ткани
в месте входных ворот, симптомы общей
интоксикации
организма .
Высокая ферментативная
активность и ток- сигенность возбудителей
газовой инфекции
Бактериологический
и биологическая проба
Сыворотки
антитоксические противогангре-
29
ского лечения и
экстренной профилактики газовой
инфекции
Специфическая
активная профилактика газовой
инфекции БОТУЛИЗМ
Вид возбудителя
ботулизма (латынь) Расположение споры
Основной фактор
вирулентности
Наиболее опасны
для человека токсины типов
Основной путь
заражения ботулизмом
Отличие экзотоксина
палочки ботулизма от экзотоксинов
других пищевых инфекций
Методы лабораторной
диагностики ботулизма
Реакция, используемая
для обнаружения и дифферецирования
типа ботулотоксина
Препараты для
активной специфи ческой профилактики
ботулизма
Препарат для
экстренной профи лактики у людей,
употреблявших продукты, явившиеся
источником ботулизма, но еще не
заболевших
нозные поливалентные
Противогангренозные
анатоксины
Clostridiumbotulinum
Субтерминальное,
в виде «теннисной ракетки»
Экзотоксины
сероваров А, В, С,
D, Е,F,GА, В, Е
Пищевой
Сильнейшее
нейротропное действие и слабое
энтеротропное действие
Бактериологический
и биологическая проба
Реакция нейтрализации
на мышах с использованием антитоксических
сывороток
1. Трианатоксин.
Содержит смесь ботулинических анатоксинов
А, В, Е
Тетраанатоксин.
Содержит
анатоксины
ботулинические типов А, В, Е и столбнячный
анатоксин
Смесь моновалентных
противоботулиниче- ских сывороток
против токсинов А, В, Е
Специфическое
лечение ботулизма Противоботулинические
сыворотки против
токсинов А, В, Е ДРУГИЕ ВОЗБУДИТЕЛИ
КЛОСТРИДИАЛЬНОЙ
АНАЭРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ
Вид возбудителя,
вызывающего псевдо- Clostridiumdifficileмембранозный
колит (латынь)
Основные факторы
патогенности С. difficileЭнтеротоксин, цитотоксин
Условия, способствующие
развитию псев-
домембранозного колита
Нерациональная
длительная антибиотикоте- рапия и
терапия цитостатиками
30
|
№ пп |
Вопросы |
Ответы |
|
1. |
Мог ли развиться столбняк у данного больного в результате автокатастрофы? |
|
|
2. |
Основные клинические симптомы, позволяющие поставить диагноз «столбняк» |
|
|
3. |
Возможная причина развития столбняка у данного больного? |
|
|
4. |
Укажите врачебные ошибки, которые могли способствовать развитию заболевания |
• |
|
5. |
Какой препарат используется для создания активного иммунитета против столбняка, какой иммунитет по направленности он создает и на какой срок |
|
31
|
№ п/п |
Название препарата |
Состав |
Показания к применению |
Характер действия в организме |
Единица измерения силы антитоксических сывороток |
|
1 |
Противоботулиническая антитоксическая сыворотка (диагностическая) |
|
|
|
|
|
2 |
Противостолбнячная антитоксическая сыворотка (диагностическая) |
|
|
|
|
|
3 |
Противогангренозная антитоксическая сыворотка (диагностическая) |
|
|
|
|
|
4 |
Анатоксин столбнячный адсорбированный (АС- анатоксин) |
|
|
|
|
|
5 |
Секста(пента-, тетра-, три-)-анатоксин |
|
|
|
|
|
6 |
Противостолбнячная лошадиная сыворотка (ПСС) |
|
|
|
|
|
7 |
Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный (ПСЧИ) |
|
|
|
|
32
|
8 |
Сыворотки противоботулинические типов А, В, Е лошадиные очищенные |
|
|
|
|
|
9 |
Противогангренозная поливалентная лошадиная сыворотка |
|
|
|
* |
