§1. Промикроскопировать готовые препараты-мазки из культуры коклюшной палочки с окраской по Граму и зарисовать.

Ознакомиться с ростом коклюшной и паракоклюшной палочек на средах Борде-Жангу, казеиново-угольной и средах "пестрого ряда". Демонстрация.

§2. Разбор методов микробиологической диагностики коклюша: бактериологического и серологического. Дифференциация коклюшной и паракоклюшной палочек.

Г. Знакомство с иммунопрепаратами: адсорбированный дифтерийный анатоксин, дифтерийный токсин для реакции Шика, противодифтерийная сыворотка, адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин, адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина и др.

Свойства дифтерийной палочки и близких к ней коринебактерий.

Вид	Саха-роза	Глю-коза	Крах-мал	Проба Пизу	Проба на уреазу	Токси-генность
Дифтерийная палочка
Дифтероид
Ложнодифтерийная палочка

Обозначить знаками + или -. Знак + означает наличие признака.

Знак – означает отсутствие признака.

Рисунок 1. Выделенная культура анаэробов. Окраска по Граму.

Рисунок 2. Corynebacterium diphtheriae. Окраска по Нейссеру.

Рисунок 3. Corynebacterium diphtheriae. Окраска метиленовым синим.

Рисунок 4. Схема определения токсигенных свойств дифтерийных бактерий методом преципитации в агаре.

Рисунок 5. Bordetella pertussis. Окраска по Граму

Методы микробиологической диагностики дифтерии.

А. Бактериологический

Материал: от больного – слизь и воспалительный налет из зева, носа, миндалин, носоглотки и т.д., на бактерионосительство – слизь из зева и носа.

Рисунок 6.

Методы микробиологической диагностики коклюша.

А. Бактериологический.

Материал: слизь из носоглотки или частицы слизи, выбрасываемые при кашле.

Рисунок 7.

Б. Серологический.

Реакция агглютинации и РСК.

Контрольные вопросы.

Какие микробиологические методы применяются для диагностики дифтерии?

Какой материал берется для исследования при подозрении на дифтерию и при обследовании на бактерионосительство?

Какие морфологические признаки присущи дифтерийной палочке?

Каковы тинкториальные особенности возбудителя дифтерии?

По каким признакам дифференцируют типы гравис, митис и интермедиус?

По каким биохимическим признакам отличают дифтерийную палочку от дифтероидов?

В чем заключается сущность пробы Пизу?

Какими методами и как определяют токсигенность возбудителя дифтерии?

Каковы пути и способы заражения дифтерией?

Какова роль дифтерийного батерионосительства в эпидемиологии дифтерии?

Как и с какой целью ставят пробу Шика?

В чем проявляется положительная проба Шика и о чем она свидетельствует?

Как используют РПГА для обнаружения в сыворотке детей антитоксина?

Почему для микробиологической диагностики дифтерии необходимо выделение чистой культуры возбудителя и изучение его свойств?

Какие бактерии откосятся к группе гемоглобинофильных и почему они так именуются?

Каковы морфологические, тинкториальные, кулътуральные и биохимические признаки коклюшной палочки?

По каким отличительным признакам дифференцируют коклюшную палочку от паракоклюшной?

Какие методы микробиологической диагностики применяют при коклюше?

Как проводится бактериологическая и серологическая диагностика коклюша?

Какие иммунопрепараты применяют для специфической профилактики дифтерии и коклюша?

Какими факторами патогенности обладает возбудитель дифтерии?

Каковы способы и пути передачи возбудителя дифтерии?

Что поражает (какие органы и системы органов) дифтерийный токсин?

Каковы особенности генетического контроля синтеза токсина у возбудителя дифтерии?

Каковы природа и структура дифтерийного токсина?

Каков молекулярный механизм действия дифтерийного токсина и какой процесс в клетке он блокирует?

Каким образом осуществляется активация дифтерийного токсина?

Каким образом возможно превращение нетоксигенной дифтерийной бактерии и токсигенную?

Каковы особенности современной классификации дифтерийных бактерий, и какие критерии с этой целью используются?

Приложение к занятию 12.

А. Дифференциальные признаки возбудителей коклюша и паракоклюша.

Признак	Коклюшная палочка	Паракоклюшная палочка
Рост на простом агаре	-	+
Образование коричневого пигмента на казеиново-угольгом агаре	-	+
Образование уреазы	-	+
Использование цитратов	-	+
Гемолиз	+	+
Лакмусовое молоко-коагуляция	-	+
Капсула	+	-
Проба Дольда	некроз	некроз
Агглютинация сыворотками: коклюшной палочки	++	+-
паракоклюшной палочки	+-	++

Б. Для бактерий рода Bordetella характерен специфический тканевой тропизм к цилиарному эпителию респираторного тракта соответствующего хозяина. Патогенными для человека являются возбудитель коклюша (B.pertussis) и паракоклюша (B.parapertussis). В некоторых случаях B.bronchoseptica вызывает коклюшеподобное заболевание у человека. Наиболее важным признаком, имеющим диагностическое значение, является содержание фимбриальных видоспецифических антигенов: коклюшных - 1,2,3; паракоклюшного - 14 и бронхосептического – 12, выявляемых в реакции агглютинации со специфическими сыворотками. Основным фактором патогенности B.pertussis является коклюшный токсин (он же является основным протективным антигеном). У B.parapertussls и B.bronchoseptica обнаружены "молчащие" гены коклюшного токсина.

ЗАНЯТИЕ 13.

Дата_______

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ДИФТЕРИИ

(продолжение).

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ТУБЕРКУЛЕЗА И ПРОКАЗЫ.

План занятия.

А. Микробиологический диагноз дифтерии (продолжение).

Регистрация результатов посева, сделанного на прошлом занятии. Определение биохимической активности выделенной культуры дифтерийных бактерий и постановка пробы на токсигенность.

Б. Микробиологический диагноз туберкулеза и проказы.

1. Правила взятия и пересылки в лабораторию патологического материала от больного туберкулезом.

2. Морфология туберкулезных бактерий - микроскопия готовых препаратов.

3. Культурадьные свойства туберкулезных бактерий. Рост туберкулезной палочки на жидких и твердых питательных средах (демонстрация).

4. Бактериоскопическая диагностика туберкулеза. Микроскопия материала с окраской по способу Циля-Нильсена. Методы обогащения.

5. Бактериологическая диагностика туберкулеза. Применение метода микрокультур для ускоренной диагностики туберкулеза (разбор и демонстрация).

6. Палочка проказы - микроскопия готовых препаратов.

7. Изучение иммунопрепаратов, применяемых для диагностики и профилактики туберкулеза.

Методические указания.

А. Микробиологический диагноз дифтерии (продолжение).

Произвести макро- и микроскопическое изучение выросших подозрительных колоний. Препараты окрасить синькой Леффлера, по Граму и по Нейссеру. Результаты зарегистрировать в тетради. При обнаружении коринебактерий сделать посев на среды с глюкозой, сахарозой, цистином и мочевиной. Одновременно сделать посев для определения токсигенности бактерий.

Б. Микробиологический диагноз туберкулеза и проказы.

§1. Материалом для исследования чаще служит мокрота. Реже используются моча, гной, спинномозговая жидкость, испражнения. Материал собирают в стерильную баночку, закрывают пробкой. К присылаемому на анализ материалу прилагается бланк лечебного учреждения, в котором четко указывается название материала, цель исследования и предполагаемый диагноз. Кроме того, указывается фамилия, имя, отчество и возраст больного.