Тема 2.3. Морфологические особенности

И УЛЬТРАСТРУКТУРА АКТИНОМИЦЕТОВ И СПИРОХЕТ

Введение. Актиномицеты (Actinomyces) относятся к порядку Actinomycetales, включающему семейства Actinomycetaceae, Strep-tomycetaceae и Nocardiaceae. Актиномицеты имеют нитевид­ную форму. Они способны к ветвлению и могут образовывать структуры, напоминающие мицелий одноклеточных грибов (рис. 2.3.1). Встречаются также палочко- и кокковидные фор­мы. Нити имеют длину 100—600 мкм и толщину 0,2—1,2 мкм. Актиномицеты неподвижны, лишены выраженной капсулы, жгутиков и пилей. Как и другие бактерии, актиномицеты ок­рашиваются простыми методами или по методу Грама. Акти­номицеты относятся к фирмикутным бактериям и окрашива­ются грамположительно. В отличие от других бактерий они способны размножаться не только поперечным делением, но и спорами.

Спирохеты относятся к порядку Spirochaetales. Они представ­ляют собой извитые подвижные бактерии. Патогенные спиро­хеты входят в семейство Spirochaetaceae и принадлежат к трем родам: Borrelia, Treponema и Leptospira. Их основные морфоло­гические признаки представлены в табл. 2.3.1.

Клетка спирохеты имеет форму нити, закрученной в виде спирали. Клеточная стенка обладает строением, типичным для грациликутных бактерий. В периплазматическом пространстве располагаются сократительные фибриллы — эндофлагеллы, которые прикрепляются к полюсам клетки с обоих концов, оплетают тело бактерии по направлению к центру клетки, где они переплетаются между собой. Фибриллы обладают сокра-

Таблица 2. 3.1. Морфологические признаки спирохет Род Число и характер Характер движения Окраска по методу завитков Романовского— Гимзы Borrelia 3—10, крупные, Толчкообразное, Сине-фиолетовая неравномерные сгибательно-по-ступательное Treponema 8—12, мелкие, Плавное, сгиба- Бледно-розовая равномерные тельно-поступа-тельное Leptospira Многочисленные Очень активное, Розово-сиренева-первичные завит- вращательно-по- тая ки, вторичные ступательное завитки в виде буквы S

План

Программа

Определение формы актиномицетов в препарате, ок­рашенном по методу Грама.

Методы изучения морфологии спирохет с дифферен­циацией по морфологическим признакам.

Определение формы и подвижности спирохет в при­жизненных препаратах.

Исследование спирохет в окрашенных препаратах.

Изучение электронограмм спирохет и спирилл.

Демонстрация

Препарат из чистой культуры актиномицетов. Окраскапо методу Грама.

Подвижность лептоспир (темнопольная микроскопия).

Боррелии в препарате толстой капли крови (окраска по методу Романовского-Гимзы).

а Задание студентам

Изучить морфологию актиномицетов в препарате. За­рисовать.

Изучить морфологию лептоспир с помощью методатемнопольной микроскопии. Зарисовать.

Изучить морфологию боррелий в препарате толстой капли крови. Зарисовать.

Методические указания

Морфологию спирохет изучают в нативных препаратах и в мазках, окрашенных по методу Романовского-Гимзы. Пре­параты исследуют с помощью темнопольной или фазово-кон-трастной микроскопии, наблюдая за активным и характерным движением спирохет и особенностями их формы.

Приготовление мазка из крови. На чистое обезжи­ренное стекло ближе к одному из его концов поместить каплю крови. Другое предметное стекло со шлифованым краем прижать под углом 45° к капле крови, а затем скользящим движением передвинуть его к другому концу нижнего стекла. При этом кровь распределится по предметному стеклу тонким слоем. Высушить препарат на воздухе, фиксировать в жидком фиксаторе (метило­вый спирт или смесь этилового спирта и эфира).

Окраска препарата по методу Романовского-Гимзы (смесь метиленового синего, эозина и азура). На мазок нанести рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10—20 мин. Затем препарат про­мыть водой и высушить на воздухе.

Боррелии — возбудители возвратного тифа (B.recurrentis) окра­шиваются в фиолетовый, эритроциты крови — в розово-корич­невый, ядра лейкоцитов — в фиолетовый цвет. Трепонемы ок­рашиваются в бледно-розовый, лептоспиры — в розово-сире­неватый цвет.

Признак Риккетсии Хламидии Микоплазмы Размеры, 0,5— 4 мкм, поли- 0,25— 1,0 мкм, 0,2— 0,3 мкм, круг-форма морфны: встреча- шаровидные, ово- лые, овальные ются кокковид- идные или палоч- или нитевидные ные, палочковид- ковидные клетки* клетки ные, реже ните­видные клетки Особен- КС по типу фа- КС по типу гра- Лишены КС. Име-ности циликутных. Не циликутных; ли- ют выраженный строения имеют макрокап- шены пептидо- S-слой. Не имеют сулы, жгутиков, гликана. Не име- макрокапсулы, Неподвижны. Не ют макрокапсу- жгутиков. Не об-образуют споры лы, жгутиков. Не- разуют споры, подвижны. Не об- Подвижны за счет разуют споры внешнего цито-скелета Окраска По методу Здро- По методу Рома- — довского невского— Гимзы (микроколонии внутри клеток) Методы Световая, фазово- Световая, фазово- Электронная мик-выявле- контрастная, лю- контрастная, лю- роскопия ния минесцентная, минесцентная электронная мик- (для выявления роскопия микроколонии внутри клеток); электронная мик­роскопия

План

Программа

1. Изучение морфологии риккетсий, хламидий и мико-плазм.

Демонстрация

Хламидий в инфицированных клетках эпителия урет­ры, мазках-отпечатках из органов и культурах клеток.

Электронограммы риккетсий, хламидий и микоплазм.

Задание студентам

Изучить морфологию риккетсий в препарате, окрашенном по Здродовскому.

Изучить морфологию хламидий.

3. Изучить морфологию микоплазм.

Методические указания

Окраска риккетсий по методу Здродовского

Окрасить мазок разведенным фуксином Циля (10—15 ка­пель на 10 мл дистиллированной воды) в течение 5 мин.

Промыть водой.

Обработать мазок 0,5 % раствором лимонной кислоты или 0,01 % раствором хлористоводородной кислоты.

Промыть водой.

Окрасить метиленовым синим в течение 1 мин.

Промыть водой и высушить препарат.

Риккетсий, окрашенные по методу Здродовского, имеют красный цвет, цитоплазма клеток, в которых они паразитиру­ют, — голубая, ядра — синие.