Методичкапо Микробиологии

5.Микробная клетка как комплекс антигенов, их свойства. Антигенная мимикрия.

6.Антитела, классы иммуноглобулинов, их характеристика.

7.Типы иммунного ответа: гуморальный, клеточный, иммунологическая толерантность, иммунологическая память.

8.Гуморальный иммунный ответ, клеточная кооперация в гуморальном иммунном ответе.

9.Динамика образования антител. Первичный и вторичный иммунный ответ.

10.Серологический метод диагностики, определение природы антител.

11.Реакция агглютинации, ее особенности, варианты постановки, механизм, практическое применение.

12.Нагрузочная реакция иммунитета.

13.Реакция Кумбса для определения неполных антител.

14.Агглютинирующие иммунные сыворотки (комплексные и монорецепторные), способы получения, практическое применение.

15.Микробные диагностикумы.

16.Ig A как основной фактор специфического иммунитета полости рта, его функции в полости рта. Роль Ig G и Ig M как защитных факторов полости рта.

Задания к практической работе студентов

Задание №1. Поставить ориентировочную реакцию агглютинации с целью определения видовой принадлежности выделенного микроорганизма по схеме:

Наличие агглютинации оценить знаком (+), а ее отсутствие – ( –). Сделать заключение. В каком методе диагностики ставят данную реакцию агглютинации?

21

Задание №2. Учесть развернутую реакцию агглютинации, поставленную с целью определения титра антител в сыворотке больного с клиническим диагнозом «Бруцеллез». Для этого готовят ряд последовательных разведений сыворотки физиологическим раствором, к которым добавляют бруцеллезный диагностикум. Результат занести в таблицу:

Сделать заключение, ответив на поставленные вопросы.

1.Какой это метод диагностики?

2.Что такое титр антител? Какой он в данном случае?

3.Зачем ставят контроли сыворотки и антигена?

4.Как интерпретировать полученные результаты?

Задание №3. Учесть реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации, поставленную с целью определения титра антител в парных сыворотках больного с клиническим диагнозом «дизентерия». Сыворотки больного разводят физиологическим раствором с 1:10 до 1:320. К каждому разведению сыворотки добавляют дизентерийный диагностикум. Результат занести в таблицу и сделать заключение.

1.Какой метод диагностики?

2.Что такое титр антител? Каковы титры антител на 5 и 10 день болезни?

3.Зачем исследуют парные сыворотки больного?

4.Как интерпретировать полученные результаты?

22

ЗАНЯТИЕ №9

Тема: Реакция преципитации, ее варианты. Реакция флокуляции, нейтрализации токсина антитоксином,

иммунофлюоресценции.

Собственно иммунологический метод диагностики

Вопросы для подготовки

1.Реакция преципитации. Характеристика антигенов, вступающих в реакцию, механизмы, отличия от реакции агглютинации, варианты постановки, практическое применение.

2.Характеристика токсинов, анатоксинов, антитоксической сыворотки. Их получение, единицы измерения активности, титрование, практическое применение.

3.Реакция флокуляции, ее особенности, практическое применение.

4.Реакция нейтрализации токсина антитоксином, практическое применение.

5.Реакция иммунофлюоресценции – прямая и непрямая, механизмы, практическое применение.

6.Преципитирующие, флюоресцирующие иммунные сыворотки, их получение, практическое применение.

7.Иммунные лечебно-профилактические сыворотки (антимикробные, антивирусные, антитоксические), их получение, практическое применение.

8.Собственно иммунологический метод диагностики, индикация и идентификация антигенов с помощью иммунологических реакций.

Задания к практической работе студентов

Задание №1. Учесть реакцию флокуляции, поставленную с целью определения титра антитоксина по схеме:

Отметить наличие инициальной флокуляции и рассчитать титр антитоксина.

Задание №2. Поставить реакцию кольцепреципитации с целью определения видовой принадлежности белка по схеме:

23

Учесть результаты, сделать заключение.

Задание №3. Учесть реакцию преципитации в агаре с целью определения токсигенности дифтерийных палочек.

Задание №4. Индикация и идентификация ботулинического токсина в пищевом продукте в реакции нейтрализации токсина антитоксином на мышах. Результаты этого эксперимента представлены в таблице:

24

1.Какой метод диагностики?

2.Определить наличие и тип ботулинического токсина.

ЗАНЯТИЕ №10

Тема: Клеточный иммунный ответ. Реакции иммунного лизиса. Реакция связывания комплемента (РСК). Иммуноферментный анализ. Аллергический метод диагностики

Вопросы для подготовки

1.Клеточный иммунный ответ, клетки, механизм.

2.Клеточные медиаторы (лимфокины и монокины), их роль в иммунном ответе.

3.Аллергический метод диагностики инфекционных болезней. Аллергены, их действующее начало, механизм действия.

4.Факторы специфического иммунитета, действующие в полости рта.

5.Реакции иммунного лизиса: бактериолиза и гемолиза. Компоненты реакций, практическое использование.

6.Комплемент, его строение, функции, пути активации, механизм присоединения комплемента к комплексу Аг-Ат.

7.Реакция связывания комплемента, механизм реакции, варианты использования при диагностике инфекционных заболеваний.

8.Подготовка к постановке основного опыта РСК: определение титра и рабочей дозы комплемента, гемолитической сыворотки, антигена.

9.Иммуноферментный анализ, механизм реакции, ее особенности, варианты использования для диагностики инфекционных заболеваний.

Задания к практической работе студентов

Задание №1. Подготовка к постановке основного опыта РСК: учесть реакции гемолиза для определения титра и рабочей дозы гемолитической сыворотки, комплемента и антигена.

Что такое титр и рабочая доза гемолитической сыворотки, комплемента, антигена? Полученные сведения занести в тетрадь.

Задание №2. Учесть РСК, поставленную с целью идентификации возбудителя по следующей схеме:

25

1.Какой метод диагностики?

2.Зачем ставятся контроли антигена и сыворотки?

3.Что установили в результате этой реакции? Сделать заключение по результатам этой работы.

Задание №3. Учесть РСК, поставленную с парными сыворотка-

ми больного с клиническим диагнозом «клещевой энцефалит» Полученные сведения занести в таблицу:

1.Какой метод диагностики использован?

2.Перечислить компоненты реакции.

3.Что такое титр антител?

4.Какой титр антител определили на 5 и на 15 день болезни?

5.Зачем исследуют парные сыворотки больного?

Сделать заключение по проделанной работе.

ЗАНЯТИЕ №11

Контрольное занятие по разделу «Инфекция и иммунитет»

Вопросы для подготовки

1.Понятие «инфекция», «инфекционный процесс», «инфекционная болезнь». Условия, необходимые для возникновения инфекционных болезней.

2.Роль микроба-возбудителя в возникновении инфекции. Кри-

26

терии патогенности. Вирулентность, методы ее определения.

3.Факторы адгезии, ее механизмы.

4.Факторы инвазии микроорганизмов. Ферменты бактерий как факторы инвазии и агрессии.

5.Сравнительная характеристика эндотоксинов и экзотоксинов: их природа и свойства, механизм действия.

6.Источники инфекции и механизмы передачи. Систематика заразных болезней по механизму передачи (респираторные, кишечные, кожно-венерические, кровяные). Антропонозы, зоонозы. Пути проникновения микробов в организм больного, тропизм микробов.

7.Формы инфекции: экзогенная, эндогенная, очаговая, генерализованная, моно- и смешанная, вторичная инфекция. Реинфекция, суперинфекция.

8.Динамика развития инфекционного процесса. Периоды: инкубационный, продромальный, разгар инфекции и исход. Этапы инфекционного процесса (адгезия, колонизация, инвазия, генерализация).

9.Понятие об иммунитете. Классификация различных видов и форм иммунитета. Характеристика врожденного и приобретенного иммунитета.

10.Неспецифические факторы защиты организма: гуморальные и клеточные

11.Центральные и периферические органы иммунитета. В- и Т- лимфоциты, их субпопуляции, функции.

12.Фагоцитоз, фагоцитирующие клетки, их характеристика. Функции фагоцитов. Основные стадии фагоцитоза, завершенный и незавершенный фагоцитоз. Методы определения фагоцитарной активности фагоцитов. Значение антител в фагоцитозе.

13.Гуморальные факторы неспецифической защиты: пропердин, комплемент, лизоцим, бета-лизины, трансферин, лактоферин, С-реактивный белок. Их краткая характеристика, механизм действия. Значение оценки этих показателей в клинической практике.

14.Комплемент, его характеристика и функции. Классический и альтернативный пути активации комплемента, его значение в иммунологических реакциях. Определение титра комплемента.

15.Антигены, их свойства. Классификация антигенов. Полноценные антигены, гаптены и полугаптены.

16.Антигенная структура бактериальной клетки. Основные

27

свойства бактериальных антигенов. Микробная мимикрия.

17.Антитела, основные классы иммуноглобулинов, их строение и функции. Защитная роль антител в приобретенном антиинфекционном иммунитете.

18.Местный антиинфекционный иммунитет. Роль секреторных антител в местном иммунитете.

19.Гуморальный иммунный ответ, характеристика клеток, участвующих в этом процессе. Клеточная кооперация в гуморальном иммунном ответе. Динамика антител при инфекционных заболеваниях. Первичный и вторичный иммунный ответ.

20.Клеточный иммунный ответ, клетки и механизмы. Способы его выявления. Аллергический метод диагностики.

21.Цитокины, их роль в иммунном ответе.

22.Методы иммунологической диагностики инфекционных болезней (собственно иммунный, серологический, аллергический), их цель, интерпретация, полученных результатов.

23.Иммунологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний. Реакция агглютинации, ее варианты, механизм. Нагрузочные реакции иммунитета (РНГА). Агглютинирующие сыворотки, диагностикумы, их действующее начало, механизм действия, область применения.

24.Реакция преципитации, ее варианты, механизм, область применения. Преципитирующие сыворотки, их получение и титрование.

25.Реакции иммунного лизиса (бактериолиза, гемолиза). Компоненты реакций, практическое применение.

26.Реакция связывания комплемента, компоненты реакции. Определение титра и рабочей дозы комплемента, гемолитической сыворотки и антигена. Практическое применение РСК.

27.Неполные антитела, их характеристика. Обнаружение неполных антител к резус-фактору у беременных женщин (реакция Кумбса прямая и непрямая).

28.Иммунофлюоресценция (прямая и непрямая) в диагностике инфекционных болезней. Компоненты реакции и необходимое оборудование.

29.Реакция нейтрализации токсина антитоксином, практическое применение. Анатоксины, антитоксические сыворотки, их получение, титрование, применение.

30.Реакция флокуляции, компоненты реакции, практическое применение.

28

31.Иммуноферментный анализ в диагностике инфекций (выявление микробных антигенов или антител), компоненты реакций.

32.Индикация микробных антигенов в патологическом материале с помощью иммунологических реакций.

33.Теории иммунитета: Эрлиха, Ерне, Бернета.

34.Иммунологическая толерантность, ее виды, механизмы. Иммунологический паралич Фелтона.

35.Иммунологическая память, клетки, механизм.

36.Вакцины живые, убитые, химические, анатоксины, синтетические вакцины. Современные рекомбинантные вакцины. Принципы получения каждого вида вакцин, механизмы создаваемого иммунитета. Адъюванты в вакцинах.

37.Препараты, содержащие антитела (антитоксические, антимикробные сыворотки, гамма-глобулины и иммуноглобулины), их характеристика, получение, титрование. Серотерапия и серопрофилактика.

38.Факторы неспецифической резистентности и специфического иммунитета, действующие в полости рта.

ЗАНЯТИЕ №12

Тема: Асептика и антисептика. Методы стерилизации и дезинфекции, используемые в стоматологии

Вопросы для подготовки

1.Определение асептики и антисептики. Классификация методов асептики и антисептики.

2.Стерилизация и дезинфекция – определение понятий. Цель проведения стерилизации и дезинфекции.

3.Стерилизация шприцев, металлических инструментов, бактериальных петель, бумаги, марли, ваты, резиновых изделий, патогенных культур, питательных сред с углеводами и без них, сывороток, витаминов, антибиотиков, оптических приборов, применяемых для эндоскопических методов исследования.

4.Тепловая стерилизация (кипячение, сухим жаром, паром под давлением, текучим паром, дробная стерилизация, тиндализация), механизм действия, режим стерилизации при каждом из этих методов. Используемая аппаратура. Достоинства и недостатки каждого метода.

29

5.Подготовка к стерилизации лабораторной посуды.

6.Методы контроля температуры стерилизации в автоклавах и сухожаровых шкафах (физический, химический, биологический).

7.Механическая стерилизация (фильтры Зейтца, фарфоровые свечи Шамберлена и мембранные фильтры), объекты стерилизации.

8.Физическая стерилизация (УФЛ, ультразвук, гамма- и рентгеновские лучи, высушивание), механизм действия, область применения.

9.Тиндализация и пастеризация, режим стерилизации, область применения.

10.Химическая стерилизация (газовая и погружной метод), механизм действия, область применения. Недостатки этого метода.

11.Основные группы дезинфектантов и антисептиков, механизм действия, способы и цель использования.

Задания к практической работе студентов

Задание №1. Изучить действие УФЛ на жизнедеятельность бактерий. Разные виды бактерий (кишечная палочка, белый стафилококк, бациллы) засеваются газоном в чашки Петри с МПА. Затем чашка наполовину открывается и ставится под кварцевую лампу на 5 и 15 минут.

Учесть результаты опыта и проанализировать их. Все полученные данные оформить в виде таблицы.

1.Как действуют УФЛ на бациллы и бактерии, на пигментные и непигментные бактерии, при прямом действии на микробы и через стекло?

2.Механизм действия УФЛ.

Задание №2. Учесть результаты посевов на стерильность резиновых пробок и тампонов, проведенные в аэробных и анаэробных условиях.

Необходимо проанализировать полученные результаты и сделать заключение об эффективности проведенной стерилизации.

При наличии роста в посевах проанализировать возможные варианты нарушения режима стерилизации, а также сделать рекомендации по контролю за стерилизацией для предотвращения нарушения режима стерилизации.

Задание №3. Определить клиническую устойчивость штам- мов-возбудителей гнойно-септических заболеваний, выделенных

30