Учебное издание. Учебное пособие.

Иммунобиологические препараты

для диагностики, профилактики и

лечения инфекционных заболеваний

Юрова В.А., Бутакова Л.Ю., Илинская Б.В, Крафт Л.А., Куклина Н.В., Карабасова Е.Б., Сазанская А.А., Винникова Ю.В.,

Подписано в печать 25.11.2002 Бумага: офсетная Тираж: 500 экз.

Отпечатано в типографии: «ПРИНТ - технология» ул. Папанинцев, 126

Министерство здравоохранения Российской Федерации Алтайский государственный медицинский университет

Юрова В.А., Бутакова Л.Ю., Куклина Н.В.,

Крафт Л.А., Сазанская А.А., Карабасова Е.Б.,

Винникова Ю.В., Илинская Б.В.

Иммунобиологические препараты

для диагностики, профилактики и

лечения инфекционных заболеваний

Учебное пособие для самостоятельной подготовки студентов к практическим занятиям по микробиологии

Барнаул, 2002

Министерство здравоохранения Российской Федерации Алтайский государственный медицинский университет

Юрова В.А., Бутакова Л.Ю., Илинская Б.В, Крафт Л.А., Куклина Н.В., Карабасова Е.Б., Сазанская А.А., Винникова Ю.В.,

Иммунобиологические препараты

для диагностики, профилактики и

лечения инфекционных заболеваний

Барнаул, 2002

Учебное пособие для самостоятельной подготовки студентов к практическим занятиям по микробиологии

ISBN 5-9505-0009-i

Введение

Составители: Юрова В.А., Бутакова Л.Ю., Илинская Б.В, Крафт Л.А., Куклина Н.В., Карабасова Е.Б., Сазанская А.А., Винникова Ю.В.,

Рецензент:

зав. кафедрой детских инфекций, профессор Выходцева Г.И., доцент кафедры инфекционных болезней Орлов В.И.

В учебном пособии изложены теоретические вопросы, касающиеся природы и использования иммунобиологических препаратов - диагностических и лечебно-профилактических: вакцин, сывороток, бактериофагов и др.

Студенты факультетов лечебного профиля (лечебного, педиатрического, стоматологического) нуждаются в более глубоком изучении механизмов действия бактериологических препаратов, ответной реакции организма на введение вакцинных и сывороточных препаратов, осложнений, возникающих при использовании некоторых препаратов.

Иммунобиологические препараты для диагностики, профилак­тики и лечения инфекционных заболеваний: Юрова В.А., Бутакова Л.Ю., Крафт Л .А., Куклина Н.В., Сазанская А.А., Карабасова Е.Б., Винникова Ю.В., Илинская Б.В.- Барнаул, 2002. - 46 с.

(с) Алтайский государственный медицинский университет, 2002

© Юрова В.А., Бутакова Л. Ю., КрафтЛ.А., Куклина Н.В., Сазанская А.А.,

Карабасова Е.Б., Винникова Ю.В., Илинская Б.В., 2002

В профилактике, диагностике, лечении инфекционных заболеваний широко используются иммунобиологические препараты, изготавливаемые из живых и убитых микроорганизмов (бактерий, риккетсий, вирусов), продуктов их жизнедеятельности (токсинов), а также отдельных антигенов микробной клетки, извлеченных различными методами. Также для лечебных и диагностических целей используются сыворотки и специфические гамма-глобулины. Кроме того, широко используются в диагностических и лечебных целях препараты бактериофагов.

Сведения о составе, получении, механизме действия иммунобиологических препаратов необходимы врачу в его практической деятельности. Вместе с тем, возможность ознакомления с вновь созданными вакцинными и сывороточными препаратами, особенностями их применения у практических врачей есть не всегда. Кроме того, в современных учебниках не полностью отражены вопросы, касающиеся получения, механизма действия и использования иммунобиологических препаратов.

Все вышесказанное привело к необходимости создания учебного пособия, содержащего сведения об иммунобиологических препаратах. Данное пособие включает информацию о получении, активном начале, применении иммунобиологических препаратов, об осложнениях, возникающих при использовании некоторых из них. Пособие предназначено для подготовки студентов третьего курса лечебного, педиатрического, стоматологического и медико-профилактического факультетов к практическим занятиям по частной микробиологии.

Классификация иммунобиологических препаратов

I.Диагностические препараты.

• Препараты, содержащие антигены - диагностикумы, аллергены, токсины.

• Препараты, содержащие антитела - диагностические сыворотки.

• Диагностические бактериофаги.

II.Лечебно-профилактические препараты.

• Препараты, содержащие антигены - вакцины.

• Препараты, содержащие антитела - лечебные сыворотки и гамма-глобулины.

• Бактериофаги.

• Микробы-антагонисты.

• Интерфероны.

Раздел I

Диагностические препараты

Диагностические препараты используются при лабораторной диагностике ряда заболеваний, точный диагноз которых может быть поставлен только при помощи бактериологических и вирусологических исследований. Кроме того, диагностические препараты необходимы при подтверждении лабораторными методами диагноза заболевания, имеющего атипичное течение, либо заболевания, характеризующегося полиморфизмом симптомов. Помимо этого, диагноз заболеваний, не встречающихся на данной территории и в данное время, должен быть обязательно подтвержден лабораторными методами.

В диагностике инфекционных заболеваний широко применяются микробиологические приемы диагностирования. При этом используются бактериологический, вирусологический, серологический, аллергический, иммунологические методы диагностики, а также методы молекулярной гибридизации и ПЦР. Для каждого из этих методов необходимы определенные диагностические иммунобиологические препараты: диагностикумы, диагностические сыворотки (видовые, типовые, комплексные, адсорбированные и др.), комплемент, аллергены, бактериофаги, системы для проведения РИФ и ИФА, зонды нуклеиновых кислот.

Классификация диагностических препаратов

1.Препараты, содержащие антитела - диагностические сыворотки:

• агглютинирующие;

• преципитирующие;

• антитоксические;

• гемолитические;

• противовирусные;

• люминесцирующие;

• антиглобулиновые.

2.Препараты, содержащие антигены:

а) диагностикумы:

• бактериальные;

• эритроцитарные;

• вирусные;

б) токсины;

в) аллергены.

3. Диагностические бактериофаги.

1. Диагностические сыворотки

В диагностике инфекционных заболеваний широко используются иммунные реакции для идентификации микроорганизмов (вирусов) или токсинов. Для постановки таких реакций необходимы специфические диагностические сыворотки.

1.1. Агглютинирующие сыворотки.

Агглютинирующие сыворотки получают путем иммунизации кроликов взвесью убитых микроорганизмов или их антигенов с последующим взятием у них крови и приготовлением сыворотки. Агглютинирующие сыворотки применяют для идентификации микроорганизмов в реакции агглютинации. Недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, т.к. они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены. Поэтому, в настоящее время большинство сывороток используется адсорбированными, адсорбированные сыворотки содержат только типовые или видовые антитела, соответствующие определенному типу или виду антигена. Для получения таких сывороток применяют метод Кастеллани - метод адсорбции. Этот метод заключается в истощении сыворотки на групповые агглютинины путем насыщения ее родственными гетерогенными бакте­риями. При этом происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. Таким путем можно получить монорецепторные сыворотки - сыворотки, содержащие антитела только к одному антигену, и поливалентные сыворотки, дающие реакции агглютинации с двумя-тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген. Титром агглютинирующей сыворотки называется то ее наибольшее разведение, при котором идет реакция агглютинации.

Агглютинирующие сыворотки широко применяют, например, при диагностике заболеваний, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами и другими представителями семейства энтеробактерий.

1.2. Преципитирующие сыворотки.

Преципитирующие сыворотки получают иммунизацией кроликов антигенами бактерий, их экстрактами и токсинами. Титром преципитирующей сыворотки называется то максимальное разведение антигена, при котором идет реакция преципитации. Преципитирующие сыворотки выпускаются с высоким титром - не менее 1:100000. Это связано с тем, что антиген, определяемый в реакции преципитации, имеет мелкодисперсную структуру и в единице объема его может содержаться больше, чем в таком же объеме сыворотки - антител.

Специфические преципитирующие сыворотки применяются при диагностике инфекционных заболеваний (сибирская язва, чума, туляремия, дифтерия, и др.), в судебно-медицинской экспертизе для определения видовой принадлежности белка, в санитарной практике для обнаружения соответствия белковых веществ в продуктах (при подозрении на фальсификацию).

Реакция преципитации может быть поставлена в виде кольцепреципитации или реакции преципитации в геле.

1.3.Гемолитические сыворотки.

Гемолитические сыворотки получают путем иммунизации кроликов взвесью эритроцитов барана. Титром сыворотки называют то ее макси­мальное разведение, которое в присутствии комплемента вызывает ге­молиз 3% взвеси эритроцитов барана. Гемолитические сыворотки ис­пользуют для титрования комплемента и при постановке реакции свя­зывания комплемента в индикаторной системе.

1.4.Противовирусные сыворотки.

Иммунные противовирусные сыворотки получают путем иммуниза­ции различных животных в зависимости от вида вируса. Например, сы­воротку против аденовирусов получают иммунизацией кроликов, сыво­ротку против вируса гриппа - иммунизацией белых хорьков и т.д.

Диагностические противовирусные сыворотки используются для оп­ределения вида или типа вируса в РТГА, РСК., РН.

1.5.Люминесцирующие сыворотки. Люминесцирующие сыворотки представляют собой иммунные сы­воротки, содержащие специфические антитела, меченые флюоресциру­ ющими красителями. При приготовлении люминесцирующих сывороток проводят присоединение к глобулиновой фракции иммунной сыворотки различных флюорохромов путем прочной химической связи. Люминес­ цирующие сыворотки используют при постановке РИФ.

1.6. Анпшглобулиновые сыворотки.

Антиглобулиновые сыворотки (АГС) содержат антитела к иммуног­лобулинам сыворотки человека или кролика - в зависимости оттого, ка­кая иммунная сыворотка используется в реакции. АГС получают путем иммунизации иммуноглобулинами человека или кролика. Такие сыво­ротки используют для постановки непрямой РИФ, реакции ИФА, реак­ции Кумбса.

2. Диагностикумы

При серологической диагностике инфекционных заболеваний необ­ходимы препараты, содержащие антигены. Такие препараты называют­ся диагностикумы. Для приготовления диагностикумов подбираются штам­мы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и спо­собностью длительно сохранять антигенные свойства. Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего исполь­зуют химические вещества, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микроорганизмы хуже сохраняют антигенные свойства и используются редко.

2.1.Бактериальные диагностикумы.

Бактериальные диагностикумы содержат инактивированную микроб­ную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий. Примером таких диагностикумов являются:

а)бактериальные диагностикумы сальмонелл брюшного тифа, пара­ тифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне, единый бруцеллезный ди- агностикум и др.; они содержат взвесь бактерий, инактивирован- ных формалином, и применяются в реакции агглютинации для об­ наружения антител в сыворотке больных;

б)сальмонеллезные О-диагностикумы - содержат О-антигены раз­ личных групп сальмонелл, применяются для выявления антител к О-антигену при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглюти­ нации с сывороткой больных;

в)сальмонеллезный Н-диагностикум и Vi-диагностикум брюшного тифа.

2.2.Эритроцитарные диагностикумы.

Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (об­работанные танином или формалином) с адсорбированными на них ан­тигенами, извлеченными из бактерий. Эритроцитарные диагностикумы используются в РИГА (реакция непрямой гемагглютинации) для обна­ружения антител. В том случае, когда РИГА используется для выявле­ния антигена в патологическом материале, применяют антительные ди­агностикумы, т.е. эритроциты с адсорбированными на них антителами. Существуют дизентерийный, сальмонеллезный, псевдотуберкулезный и др. эритроцитарные диагностикумы.

2.3. Вирусные диагностикумы.

Вирусные диагностикумы содержат инактивированные вируссодер-жащие жидкости или живые вирусные частицы, используются при се­рологической диагностике вирусных инфекций в реакциях связывания комплемента, торможения гемагглютинации, нейтрализации для обна­ружения и определения титра антител.

3.Аллергены

Аллергены - это препараты, представляющие собой взвесь убитых микробных клеток или извлеченных из них различных фракций. Аллер­гены применяются для выявления гиперчувствительности замедленного типа при различных инфекционных заболеваниях. Положительная ре­акция ГЗТ может свидетельствовать об инфицированности организма определенным возбудителем, либо об активном инфекционном процес­се. Примером таких диагностических препаратов являются туберкулин, тулярин, бруцеллин, токсоплазмин, дизентерии и др.

4.Бактериофаги

Диагностические бактериофаги используются в диагностике с це­лью индикации бактерий в объектах окружающей среды, идентифика­ции микроорганизмов, выделенных от больного или из инфицированных объектов внешней среды. Также производят фаготипирование культур с целью определения источника и путей передачи инфекции при анали­зе эпидемиологической ситуации. Для фаготипирования используют ти­повые диагностические бактериофаги. Для получения диагностических бактериофагов можно использовать умеренные бактериофаги (получе­ние препаратов бактериофагов см. в разделе «Лечебные бактериофа­ги»).