[Мікробіологія] Лекції / #2 med-physiology
.pdf
Streak-plate – метод штриховых пластин (чашек), посев
1: Flame metal inoculating loop, let cool momentarily.
2-3: Using sterile |
4: With one hand remove |
technique transfer a lid of dish. With other |
|
loop of bacterial |
hand lightly brush the |
culture or single |
loop back and forth on one |
colony onto loop |
quadrant of the dish |
Методы механического разделения бактерий
Streak
8 :Incubate o/n at 37°C
4: Reflame metal inoculating loop, let cool momentarily.
5,6,7: Rotate petri dish |
° Use 1st streak as |
inoculum for 2nd streak (only pass the loop through the 1st streak once). Repeat once more rotating dish 90° and sterilizing loop again
Spread Plate method –
распространение,
растекание, размазывание по чашке - посев на поверхность агара для получения сплошного «газона» микроорганизмов
1 |
2 |
Spread Plate method
3: Remove lid of petri dish.
Исследуемый материал распределяют по поверхности
агара шпателем
Pour plate method – метод разлива в чашки (посев заливкой)
– рост колоний по всей толще среды, а не только на поверхности
Подсчет числа микроорганизмов
•Колониеобразующая
единица
(colony-forming unit - CFU) - позволяет определить концентрацию
(количество)
микроорганизмов в единице объема.
Определение биохимических свойств микроорганизмов
Фермент |
Среда для детекции |
Положительная реакция |
|
|
|
САХАРОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ
К |
Дифференциально- |
|
Лактозопозитивные энтеробактерии |
|||||||||
А |
диагностические |
|
среды |
(Escherichia |
coli, |
|
Klebsiella |
|||||
Р |
для |
|
энтеробактерий |
pneumonia), |
образуют |
ярко |
||||||
|
окрашенные |
|
|
колонии, |
||||||||
Б |
(Эндо, |
Левина, |
и |
др.); |
|
|
||||||
лактозонегнативные |
(Salmonella, |
|||||||||||
О |
содержат |
|
лактозу, |
|||||||||
|
Shigella) – бледно-розовые или |
|||||||||||
Г |
анилиновые красители. |
|||||||||||
бесцветные колоний. |
|
|
||||||||||
И |
Полиуглеводные |
|
среды |
При разложении глюкозы желтеет |
||||||||
Д |
(Клиглера, |
Олькеницкого |
столбик среды, при разложении |
|||||||||
Р |
||||||||||||
и др.). |
Среда |
Клиглера |
лактозы желтеет скошенная часть |
|||||||||
А |
имеет малиново-красный |
среды, |
|
при |
разложении |
|||||||
З |
углеводов с образованием CO2 в |
|||||||||||
цвет |
и |
содержит: |
0,1% |
|||||||||
Ы |
среде |
появляются |
газовые |
|||||||||
глюкозы, |
|
1% |
лактозы, |
|||||||||
|
|
пузырьки или разрыв столбика; |
||||||||||
|
соли |
Fe2+, |
феноловый |
|||||||||
|
при образовании H2S почернение |
|||||||||||
|
красный (индикатор рН). |
|||||||||||
|
по ходу укола. |
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ
Ферменты |
Среда для детекции |
Положительная реакция |
П
Р
О
Т
Е
А
З
Ы
И
П
Е
П
Т
И
Д
А
З
Ы
5% обезжиренное |
Происходит свёртывание с |
молоко |
образованием сгустков |
|
казеина и пептонизация и |
|
лизис казеина, при которой |
|
молоко становится |
|
прозрачным. |
Свёрнутая сыворотка |
Происходит разжижение. |
Столбик желатина |
Происходит разжижение |
|
(желатин разжижают Proteus |
|
vulgaris, Bacillus anthracis). |
Молочный агар в |
Появляются зоны просветления |
чашках Петри |
вокруг колоний на фоне |
имеет мутно-белый |
мутно-белой среды |
цвет |
|
|
|
ЛИПОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ
Ферменты Среда для детекции Положительная реакция
Л |
Желточный агар |
Лецитиназа расщепляет лецитин на |
|
Е |
(к 300 мл стерильного |
фосфохолин и диглицерид, и |
|
Ц |
МПА, расплавленного |
вокруг колоний появляются |
|
И |
|||
и охлажденного до |
опалесцирующие зоны, или |
||
Т |
|||
45-500С, добавляют |
|||
И |
«венчики помутнения»; |
||
источник лецитина |
|||
Н |
лецитиназа есть у Staphylococcus |
||
желток куриного |
|||
А |
aureus, клостридий, |
||
яйца) |
|||
З |
|||
фузобактерий. |
|||
А |
|
||
|
|
||
|
|
Лецитиназная активность |
|
|
|
||
|
|
стафилококков на ЖСА |
|
|
|
Вокруг роста культуры |
|
|
|
образуется «радужный |
|
|
|
венчик» с перламутровым |
|
|
|
оттенком. |