AVEKM 2011

Биологическая химия

22

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

М.В. Рамазанов МАРКЕРЫ ВОСПАЛЕНИЯ КАК ПРЕДИКТОРЫ ДЕСТРУКЦИИ ОРГАНОВ БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ

(научный руководитель – д.м.н., проф. Д.М. Никулина)

Астраханская государственная медицинская академия Астрахань, Россия

Введение. В настоящее время большое внимание исследователей и клиницистов привлек поиск биохимических маркеров деструкции тканей и разработка методов их детекции, среди которых наиболее специфическими и чувствительными являются иммунохимические методы. Использование иммунохимических методов качественного и количественного определения маркеров воспалительно-деструктивных процессов позволило бы решить как задачи диагностики, так и выбора тактики лечения, оценки динамики заболевания и контроля эффективности проводимой терапии.

Цель. В ходе работы проведен широкий клинический анализ содержания ферритина (Ф), лактоферрина (Лф), связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ) и С-реактивного белка (СРБ) в биопатологических жидкостях (сыворотка крови и перитонеальный экссудат) при следующих нозологических формах: острый и хронический холецистит, осложненные аппендициты, острый распространенный перитонит, перфоративная язва желудка, некоторые онкологические заболевания.

Результаты. Количественный иммунохимический анализ Ф, Лф, СБАГ и СРБ по всем названным формам показал удивительно сходную картину: уровень ферропротеинов (Ф и Лф) в сыворотке крови при остром и хроническом холецистите, осложненных аппендицитах, перфоративной язве, онкологических заболеваниях, по отношению к группе контроля, был достоверно повышен в разы, а уровень СБАГ и СРБ – повышен в десятки раз.

Выводы. Полученные данные по достоверному повышению уровня Ф, Лф, в сыворотке крови и экссудатах при остром холецистите, осложненных аппендицитах, остром распространенном перитоните, перфоративной язве, некоторых онкологических заболеваниях показывают диагностическую ценность, как маркеров острого деструктивного процесса.

М.А. Астраханцев, Е.А. Скворцова, В.С. Лубков, З.С. Загидуллина, Н.Д. Балуева, Л.В. Державина ПОКАЗАТЕЛИ КАТАЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ И ТБК-АКТИВНЫХ

ПРОДУКТОВ В ПЕЧЕНИ И ПЛАЗМЕ У КРЫС С АЛЛОКСАНОВЫМ ДИАБЕТОМ ПРИ ВВЕДЕНИИ ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ

(научный руководитель – к.б.н., доц. И.В. Вольхина)

Ижевская государственная медицинская академия Ижевск, Россия

Введение. Недостаточность инсулина и гипергликемия при сахарном диабете повышают уровень окислительного стресса при снижении активности антиоксидантной защиты (АОЗ). Липоевая кислота признана в качестве «универсального антиоксиданта».

Цель. Исследованы изменения содержания ТБК-активных продуктов (ТБКАП) и каталазной активности (КА) в печени и плазме крови крыс при аллоксановом диабете с различной устойчивостью к стрессу на фоне введения α- липоевой кислоты (ЛК).

Материалы и методы. Крысы-самцы были разделены на стресс-реактивных (СР) и стресс-устойчивых (СУ) с помощью теста «открытое поле». После индукции аллоксаного диабета опытной группе животных вводилась ЛК (Тиоктацид) в дозе 50 мг/кг массы с 4 по 40 дни опыта. Показатели определяли на 5, 10, 20, 30, 40 дни эксперимента. Достоверность различия параметров вычисляли по критерию Стьюдента.

Результаты.. Обнаружено увеличение КА в печени на 5, 20 и плазме на 20 день опыта по сравнению с контролем. Статистически значимых различий в показателях КА печени у СР и СУ животных не наблюдалось.

Содержание ТБКАП в плазме повышалось на 5, 10 дни опыта; на 20, 30, 40 дни опыта было ниже, чем в контроле. Содержание ТБКАП в печени повышалось на 10, 30 дни эксперимента.

Выводы. Введение крысам с аллоксановым диабетом ЛК оказало положительное влияние на состояние компонентов АОЗ, способствовало уменьшению проявлений окислительного стресса.

23

Биологическая химия

Е.Л. Андреева, Т.Е. Веденькина, Р.М. Турдыева ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНЫ ЖЕЛУДКА И КИШЕЧНИКА ПРИ АЛЛОКСАНОВОМ ДИАБЕТЕ У КРЫС НА ФОНЕ ВВЕДЕНИИ ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ

(научный руководитель – асп. Е.А.Скворцова)

Ижевская государственная медицинская академия Ижевск, Россия

Цель. Исследовали изменения содержания гликозаминогликанов (ГАГ) в стенке желудка и кишечника при аллоксановом диабете у крыс с различной устойчивостью к стрессу на фоне введения липоевой кислоты (ЛК).

Материалы и методы. Крысы-самцы с массой 180-200 г. тестировались в «открытом поле» и были разделены на группы: стресс-реактивные (СР) и стресс-устойчивые (СУ). Инсулинзависимый сахарный диабет вызывали однократным подкожным введением аллоксана тетрагидрата в дозе 155 мг/кг массы. ЛК вводили внутримышечно в дозе 50 мг/кг с 4 по 40 дни опыта. Контрольной группе вводили только ЛК. В гомогенатах желудка и кишечника определяли суммарные ГАГ по уровню гексуроновых кислот карбозоловым методом на 5, 10, 20, 30, 40 дни опыта. Достоверность различия параметров вычисляли по критерию Стьюдента.

Результаты. Содержание ГАГ в стенке желудка было высоким в 5 день опыта, у СР выше, чем у СУ, постепенно снижалось к 40 дню, не достигая контрольных значений. Изменение содержания ГАГ в стенке кишечника носило фазный характер с максимумом в 10 и 30 дни, приближаясь к показателям контроля к 40 дню опыта. У СУ животных содержание ГАГ в стенке кишечника было выше чем у СР в 5 и 20 дни опыта.

Выводы. Сдвиги в содержании ГАГ при аллоксановом диабете на фоне введения ЛК наблюдаются как в желудке, так и в стенке тонкого кишечника, но более выражены в желудке, что свидетельствует о раннем поражении верхнего отдела ЖКТ при сахарном диабете и длительном восстановлении его функции.

О.С. Новожилова, Д.Д. Обручникова, А.С. Муромцева ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ ПРИ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева Саранск, Россия

Введение. Нейтрофилы принадлежат к числу центральных участников воспаления, существенную роль в котором играют дегидрогеназы. Накопление лактатдегидрогеназы (ЛДГ) приводит к гипоксии, характеризующейся снижением активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ).

Цель. Оценить активность дегидрогеназ нейтрофилов крови при бронхолегочных заболеваниях.

Материалы и методы. Материалом исследования служила кровь доноров и кровь больных бронхолегочными заболеваниями (бронхит, пневмония, бронхиальная астма) в стадии обострения и ремиссии. Определение активности ЛДГ проводили по методу Sevela et al., СДГ – по методу Пастушенкова и др.

Результаты. Воспалительные заболевания бронхолегочного аппарата сопровождаются развитием гипоксии, что приводит к активации гликолиза, с чем связано повышение активности ЛДГ и снижение активности СДГ в стадии обострения по сравнению с контролем на 36,5% и 47% соответственно при бронхиальной астме, на 31,6% и 41,3% – при пневмонии и на 23,4% и 35,1% – при бронхите. Наблюдаемая динамика свидетельствует о напряженности адаптационных механизмов. В стадии ремиссии снижалась активность ЛДГ и повышалась активность СДГ – при бронхите на 14,6% и 13,8% соответственно по отношению к стадии обострения, на 13,5% и 12,1% – при пневмонии, на 7,9% и 9,8% – при бронхиальной астме.

Выводы. После лечения уменьшаются проявления гипоксии, снижается активность анаэробного гликолиза, происходит стабилизация мембран клеток и органелл, что приводит к увеличению активности мембраносвязанных ферментов (СДГ).

24

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

Э.С. Бельских, Д.В. Фрольцов, П.И. Черепанов, Д.В. Тебенихин НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА У КРЫС ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ ГИПОКИНЕЗИИ

(научные руководители - к.б.н., доц. В.И. Звягина, к.м.н., доц. М.А. Фомина, проф. В.В. Давыдов)

Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова Рязань, Россия

Введение. Гипокинезия является фактором, запускающим оксидативный стресс (ОС). Одним из антиоксидантов, способным защитить организм от ОС, является фитоэкдистерон, однако его использование с данной целью изучено недостаточно.

Цель. Изучить влияние длительной гипокинезии на показатели ОС стресса у крыс и возможность их коррекции фитоэкдистероидами.

Материалы и методы. Исследование проводилось на белых беспородных крысах самцах массой 230-270 г, которых разбили на 3 группы(n=6): контрольную(1) и две опытные - с гипокинезией в течение 120 суток (2) и получавшие фитоэкдистерон на фоне гипокинезии (3), в виде 0,1% раствора перорально из расчета 5мл на кг массы животного ежедневно. Определяли показатели МДА (по методике Стальной И.Д.), СОД (по методике Костюка) в пересчете на мг гемоглобина, метаболитов NO (по В.А. Метельской).

Результаты. Во 2й и 3й группах отмечалось значительное возрастание активности СОД (на 180% и 219% соответственно, р≤0,01), что вероятно связанно с адаптацией организма к развитию ОС, развивающегося в условиях гипокинезии. Так же отмечалось выраженное снижение количества метаболитов NO ( на 30,81% и 29,5% соответственно, р≤0,01), что по всей видимости является следствием отсутствия напряжения сдвига, являющегося в условиях нормальной двигательной активности стимулом выработки и секреции NO. Изменения показателей МДА не носили статистически достоверный характер.

Выводы. Длительная гипокинезия приводит к увеличению активности СОД, снижению количества метаболитов NO в крови, применение при этом фитоэкдистерона в целях коррекции не оказывает значительного влияния на изменение изучаемых показателей ОС.

Е.А. Воробьев, И.А. Курпас, К.С. Леньшина, Ю.А. Миронова РОЛЬ БЕЛКОВ ПЛАЗМЫ В ТРАНСПОРТЕ ПРЕПАРАТА РАДАХЛОРИН

(научный руководитель – к.б.н., доц. В.П. Фаенкова)

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова Санкт-Петербург, Россия

Введение. На сегодняшний день в России в качестве наиболее распространенного препарата для фотодинамической терапии используется Радахлорин. Однако механизмы его транспорта в кровеносном русле изучены недостаточно.

Цель. Поиск белков-переносчиков препарата Радахлорин (РХ).

Материалы и методы. В исследовании использовалась плазма и сыворотка здоровых доноров, очищенный человеческий альбумин и полученные ультрамикроцентрифугированием ЛОНП, ЛНП, окисленные ЛНП и ЛВП. Белки 0,5 часа инкубировались с РХ. Электрофоретическое исследование проводили в 10% ПААГ при pH=7,4 и 8,6 в 0,025 М трис – HCl при температуре 4оС в течении 4 часов в аппарате для вертикального электрофореза Helicon. Детекцию РХ проводили по его флуоресценции препарата при облучении диодом с длиной волны 408 нм. Окраску пластинок проводили красителем Кумасси ярко голубым в течении 4 часов.

Результаты. При pH=8,6 обнаружено связывание РХ с низкомолекулярными компонентами плазмы и сыворотки крови, обнаружено расширение низкомолекулярной белковой полосы. При исследовании связывания с ЛНП часть РХ остается на старте вместе с ЛНП, РХ обнаружен в белковой полосе ЛНП. РХ связывается с компонентами окисленных ЛНП, остающимися на старте. Также РХ сильно связывается с ЛОНП, но эти комплексы также остаются на старте, а полоса свободного РХ очень слабой интенсивности. С ЛВП РХ связывается и на старте, и в районе белковой полосы ЛВП.

При pH=7,4 РХ сильно связывается с низкомолекулярными компонентами сыворотки и плазмы крови, а также с ЛВП. Обнаружено слабое связывание РХ с ЛОНП и альбуминами. После инкубации с белками подвижность свободного РХ снижается.

Вывод. По результатам исследования выявлено связывание РХ с низкомолекулярными компонентами плазмы и сыворотки, ЛНП, окисленными ЛНП, ЛОНП, ЛВП и альбуминами.

25

Биологическая химия

В.Ю. Воробьева, М.А. Сташкевич ОЦЕНКА ХАРАКТЕРА РАСПАДА 5-ФУ В ОПУХОЛЕВОЙ ТКАНИ

(научный руководитель – доц. Е.В. Хомутов)

Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького Донецк, Украина

Введение. Определение активности ключевого фермента распада пиримидиновых нуклеотидовдигидропиримидиндегидрогеназы (ДПД) широко используется для оценки потенциальной токсичности и эффективности терапии рака 5-фторпиримидинами.

Цель. изучить фармакокинетику 5-фторурацила (5-ФУ) в нормальной и опухолевой тканях пациентов с раком желудка при внутриартериальном введении препарата до операции и оценить активность ДПДв этих тканях.

Материалы и методы. Исследование было проведено на 16 пациентах с аденокарциномой желудка на разных стадиях заболевания. Концентрация 5-ФУ определялась методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.Активность ДПД определялась УФ-спектрофотометрическим методом.

Результаты. В узле аденокарциномы концентрация 5-ФУ экспо-ненциально уменьшается со временем (r = 0,73, р=0,039) и обратнопропорционально зависит от активности ДПД (r=0,52, р=0,18), а в нормальных, смежных с опухолевым узлом тканях такие зависимости не наблюдались: ни концентрация 5-ФУ, ни активность ДПД не зависели от времени после введения препарата.

Выводы. В относительно здоровых тканях наблюдаются существенные индивидуальные различия в метаболизме 5-ФУ, в то время, как при раковом перерождении клетки приобретают метаболическое сходство вследствие интенсивной пролиферации. Таким образом, определение активности ДПД можно использовать для предсказания токсичности терапии 5-ФУ (т.е. влияния на весь организм, где наблюдаются различия в экспрессии данного фермента). Данный показатель будет, в то же время, малоэффективным для предстазания эффективности лечения вследствие конвергенции метаболизма в опухолях различных пациентов.

Г.М. Тазиева, Г.Д. Гатиятуллина КАТАЛАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ В ПЕЧЕНИ ПРИ АЛЛОКСАНОВОМ ДИАБЕТЕ У КРЫС НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ

(научный руководитель – асп. Е.А. Скворцова)

Ижевская государственная медицинская академия Ижевск, Россия

Введение. Липоевая кислота обладает высоким терапевтическим потенциалом в состояниях, сопровождающихся оксидативным стрессом.

Цель. Изучение изменения каталазной активности (КА) в печени при аллоксановом диабете у крыс с различной устойчивостью к стрессу на фоне введения липоевой кислоты (ЛК).

Материалы и методы. Крысы-самцы с массой 180-200 г. тестировались в «открытом поле» и были разделены на группы: стресс-реактивные (СР) и стресс-устойчивые (СУ). Инсулинзависимый сахарный диабет вызывали однократным подкожным введением аллоксана тетрагидрата в дозе 155 мг/кг массы. Опытной и контрольной группе вводили ЛК внутримышечно в дозе 50 мг/кг с 4 по 40 дни эксперимента. В гомогенатах печени определяли КА по методу М.А. Королюк на 5, 10, 20, 30, 40 дни опыта. Достоверность различия параметров вычисляли по критерию Стьюдента.

Результаты. Уровень КА в печени достоверно снижался на 10,30,40 дни опыта. На 5, 20день - достоверное повышение уровня КА. Статистически значимые различия в показателях КА у СР животных в опытной и контрольной группах наблюдались на 10 и 30 дни, у СУ – на 20 день.

Выводы. Наблюдалась обратная зависимость между уровнем глюкозы в крови и КА в печени СР и СУ крыс с аллоксановым диабетом на фоне введения ЛК. Полученные данные свидетельствуют, о том, что ЛК способствует восстанавлению антиоксидантной системы печени.

26

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

В.Т. Корошвили, Е.Н. Кононец, И.М. Соболева, В.Ю. Чердаков АНТИОКСИДАНТНЫЕ, РЕПАРАТИВНЫЕ И ИММУНОТРОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ АМИНОКИСЛОТ, СОСТАВЛЯЮЩИХ РЕГУЛЯТОРНЫЙ ПЕПТИД GLY-HIS-LYS В УСЛОВИЯХ КОЖНЫХ РАН

(научный руководитель – д.б.н., проф. М.Ю. Смахтин)

Курский государственный медицинский университет Курск, Россия

Введение. В проведенных нами ранее исследованиях, были показаны выраженные репаративные эффекты GHL в условиях кожных ран. В то же время до конца не ясно, связана ли его репаративная активность с аминокислотами, образующимися при его возможном протеолизе и какая из аминокислот проявляет при этом максимальную активность.

Цель работы. Целью нашего исследования было выявление антиоксидантных, репаративных и иммунотропных эффектов аминокислот, входящих в состав регуляторного пептида GLY-HIS-LYS (GHL).

Материалы и методы. Опыты проводились на крысах Вистар массой 180-220 гр, которым под эфирным наркозом наносили кожные раны стандартного размера (1 см2). Пептид GHL и составляющие его аминокислоты вводили внутрибрюшинно в течение 10 суток с интервалом 24 часа. Пептид применяли в разовой дозе 0,5 мкг/кг массы, аминокислоты – в дозах, соответствующих их эквимолярному содержанию в пептиде. Показатели малонового диальдегида МДА (перекисного окисления липидов) и антиоксидантной защиты (каталазы) определяли с помощью Спектрофотометра DU – 65 «Бэкман» (Великобритания). Скорость регенерации оценивали гистологически и с помощью коэффициента ранозаживления. Активность нейтрофилов крови определяли по фагоцитарному индексу и фагоцитарному числу.

Результаты. В условиях кожной раны, установлено, что введение пептида GHL, его комбинаций GLY+HIS+LYS и лизина, сопровождалось снижением МДА и повышение каталазы. В этих же группах животных наблюдалась активизация заживления кожных ран. Аминокислоты глицин и лизин оказывали стимулирующее действие на активность нейтрофилов.

Выводы. Таким образом, в условиях кожных ран проявление репаративных, антиоксидантных и иммунотропных эффектов GLY+HIS+LYS может быть опосредовано эффектами составляющих его аминокислот преимущественно лизином.

А.Л. Самохина, Н.В. Неретина

ВОЗРАСТНАЯ ДИНАМИКА АКТИВНОСТИ КАТЕПСИНА L

(научные руководители – к.м.н., доц. М.А. Фомина, к.м.н., асс. Н.Б. Репина)

Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Рязань, Россия

Введение. Течение различных патологических процессов в той или иной степени зависят от возрастных особенностей организма. Разные периоды онтогенеза могут характеризоваться различной активностью лизосомального протеолиза.

Цель. Изучение активности катепсина Lв сывороткекрови женщинразличных возрастных групп.

Материалы и методы. Активность фермента определяли в сыворотке крови 30 практически здоровых женщин, разделенных на три возрастные группы: первую группу составили женщины со средним возрастом 23,2±1,07 лет; вторую - 47,9±4,08 лет, третью - 74,4±3,5 лет. Кровь брали натощак из локтевой вены (без добавления антикоагулянтов), центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут. Активность фермента определяли спектрофлуориметрически и выражали в мкмоль/ч•л. Статистическая значимость отличий полученных результатов в исследуемых группах оценивалась с использованием t-критерия Стъюдента.

Результаты. У женщин в 1-ой возрастной группе активность была наименьшей (3,9±1,2); в 2-ой - максимальной (11,5±3,1), в третьей возрастной группе мы установили более высокую (9,1±2,4), чем в первой, но более низкую, чем во второй группе протеиназную активность сыворотки. Это можно объяснить, вероятнее всего, снижением скорости метаболических процессов, свойственных данному возрасту. Все отличия оказались статистически значимыми (р≤0,05).

Выводы. Активность катепсина L в сыворотке крови зависит от возраста; максимальные значения отмечаются в средней возрастной группе.

27

Биологическая химия

Е.П. Нужный, Е.А. Воробьев НАНОМАТЕРИАЛЫ В МЕДИЦИНЕ: ВЛИЯНИЕ ФУЛЛЕРЕНОЛА НА КОМПЛЕМЕНТ ЧЕЛОВЕКА

(научный руководитель – к.м.н., асс. Т.А. Богомаз)

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова Санкт-Петербург, Россия

Введение. Фуллерены представляют собой замкнутые наночастицы, образованные атомами углерода и проявляющие высокую биологическую активность. В наших опытах использовалось растворимое производное фуллерена – фуллеренол.

Цель работы: исследование влияния фуллеренола на активность системы комплемента человека. Материалы и методы. Эксперименты проводили in vitro, используя раствор фуллеренола в физиологическом

растворе. Источником комплемента являлась сыворотка крови доноров. В качестве мишеней для действия комплемента использовали эритроциты кролика, инициирующие активацию комплемента человека и по классическому пути (КПК), и по альтернативному (АПК). Спектрофотометрическим методом определяли показатели активности комплемента по убыли оптической плотности при 800 нм. Оценку влияния фуллеренола на комплемент человека производили по времени от внесения эритроцитов до первых признаков гемолиза (Лаг- период, с), а также по максимальной скорости гемолиза (Vmax).

Результаты исследования. Фуллеренол вызывает угнетение системы комплемента, степень которого зависит от его концентрации, при этом КПК угнетается сильнее, чем АПК. Под действием наиболее высоких концентраций препарата (76 мкМ и 109 мкМ) величина Лаг-периода удлиняется в КПК в среднем в 11 и 23 раза, тогда как в АПК

– лишь в 3,0 и 3,6 раза. Фуллеренол замедляет лизис эритроцитов сильнее при КПК, чем при АПК. При этом отмечен эффект реципрокности: многократному увеличению Лаг-периода при высоких концентрациях фуллеренола сопутствует прогрессирующее замедление скорости иммунного лизиса клеток.

Вывод. Фуллеренол способен предупреждать иммунный лизис клеток, и в основе этого эффекта немалую роль играет взаимодействие фуллеренола с внеклеточными белками системы комплемента.

Т.Г. Тимофеева АКТИВНОСТЬ МОНОАМИНООКСИДАЗЫ И СОСТОЯНИЕ СВОБОДНО-

РАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В ПЕЧЕНИ ПРИ 30 -СУТОЧНОЙ ГИПОКИНЕЗИИ

(научный руководитель – д.б.н., проф. В.Э. Цейликман)

Челябинская государственная медицинская академия Челябинск, Россия

Введение. Копродуктом моноаминооксидазной реакции является перекись водорода, которая сама по себе способна вызывать индукцию свободно-радикального окисления

Цель. Сопоставить между собой изменения активности моноаминооксидазы Б (МАО-Б) и содержания продуктов перекисного окисления липидов и окисления(ПОЛ) и окисления белков в печени .

Материалы и методы. Исследование выполнено на 52 беспородных крыс обоего пола. В печени активность МАО Б, содержание продуктов ПОЛ и карбонилированных белков определяли спектрофотометрически.

Результаты. Установлено, что в динамике 30 суточной гипокинезии наблюдается одновременное усиление активности МАО-Б и усиление окисления белков.

Вывод: Синхронизированное с активацией МАО-Б окисление белков является доминирующим типом свободно-радикального окисления в печени при 30 суточной гипокинезии.

М.В. Тютюнник ВЛИЯНИЕ ЛАКТАТА НАТРИЯ НА МЕТАБОЛИЗМ ПИРИМИДИНОВЫХ НУКЛЕОТИДОВ

(научный руководитель – доц. Э.В. Хомутов)

Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького Донецк, Украина

Введение. Лактатацидоз и усиленный катаболизм нуклеотидов являются неотъемлемыми чертами злокачественного роста, однако их взаимосвязь остается неизученной.

Цель. Изучение влияния лактата натрия (в физиологических и повышенных концентрациях) на активность дигидропиримидиндегидрогеназы (ДПД) - ключевого фермента распада пиримидиновых нуклеотидов.

28

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

Материалы и методы. Активность ДПДизучали в гомогенатеселезенки крыс и гомогенате опухоли желудка человека. Активность фермента определяли спектрофотометрическим методом(SPICORD-200), используя два субстрата – тимин и 5-фторурацил (цитостатик-антиметаболит, который является синтетическим аналогом тимина).

Результаты. В пробе с тимином обнаружено, что в пределахфизиологических концентраций в пробе (0-4 мМ) лактат натрия увеличивает активность ДПДГ в 1,8 раза (р<0,05) тем самым, ускоряет распад пиримидинов. А в пробе с 5-фторурацилом физиологические концентрации лактата (0 – 4 мМ) не оказывали достоверного влияния на активность изучаемого фермента. Однако при высоких концентрациях6 – 12 мМ(которые характерны для опухолевых тканей) лактат ингибирует ДПД в отношении, как тимина в 2,3 раза, так и 5-фторурацила в 2,0 раза. В опухолевых клетках рака молочной железы человека наблюдалось увеличение активности ДПД пропорционально концентрации лактата.

Выводы. Обнаруженное влияние лактата натрия на акивность ДПД позволяет нам предположить, что лактат модулирует скорость катаболизма пиримидинов и их синтетических аналогов, цитостатическое действие которых зависит от активности данного фермента. Вздоровых клетках при ингибировании активности ДПД катаболизм фторпиримидинов будет снижен, что может сопровождаться их накопленим и выраженным токсическим действием.В опухолевых клетках напротив лактат увеличивает активность ДПД, что приводит к ускоренному метаболизму пиримидиновых нуклеотидов.

И.М. Хабаль, Н.М. Басюк, В.Е. Капелюх, Н.И. Огроднича ВЛИЯНИЕ ИНДОМЕТАЦИНА И ДАРБУФЕЛОНА НА АНТИОКСИДАНТНУЮ

СИСТЕМУ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ИНДУЦИРОВАННОМ ЯЗВЕННОМ КОЛИТЕ

(научный руководитель – асс. Ю.М. Федевич)

Львовский национальный медицинский университет им. Д. Галицкого Львов, Украина

Введение. Ведущую роль в патогенезе язвенного колита (ЯК) играет воспаление слизистой оболочки толстого кишечника. Воспалительные реакции сопровождаются возрастанием концентрации активных форм кислорода (АФК), что приводит к оксидативному стрессу, в результате чего начинаются процессы ПОЛ та ОМБ, что только усугубляет течение болезни. Учитывая значительную распространённость ЯК, это требует поиска противовоспалительных препаратов, которые, не активизируют свободнорадикальную деструкцию клеток.

Цель. Определить влияние на антиоксидантную систему печени крыс неспецифического блокатора циклооксигеназы – Индометацина и блокатора липоксигеназы-5 — Дарбуфелона, а также оценить полученные результаты.

Материалы и методы. Исследование проводилось на 4-х группах крыс - белых самцов весом 150-200 грамм, содержавшихся на стандартном рационе вивария: I – интактные крысы, II – крысы, больные колитом, индуцированным с помощью уксусной кислоты, III – больные крысы, которые в качестве лечения две недели получали перорально 10 мг/кг массы тела Индометацина, IV – больные крысы, которые в качестве лечения две недели получали перорально 10 мг/кг массы тела Дарбуфелона. В качестве показателей состояния антиоксидантной системы нами были изучены уровни активности следующих ферментов: супероксиддисмутазы (СОД) по методу Чевари (1991) и каталазы (КАТ) по методу Королюка М. А., а также концентрации малонового диальдегида (МДА) по методу Тимирбулатова Р.А., и молекул средней массы (МСМ) по методу Камышникова В. С. Полученные результаты были обработаны по статистическому t-критерию Стьюдента.

Результаты. Полученные результаты представлены относительно результатов контрольной группы, показатели которой приняты за 100%.

Изменения показателей: СОД: 2 группа — 63%, 3 группа — 91%, 4 группа — 97%; КАТ: 2 группа — 81%, 3 группа — 64%, 4 группа — 71%; МДА: 2 группа — 178%, 3 группа — 144%, 4 группа — 118%; МСМ: 2 группа —

225%, 3 группа — 197%, 4 группа — 139%.

Выводы. Полученные нами данные свидетельствуют о значительном ухудшении состояния антиоксидантной системы печени крыс при индуцированном колите. Под действием Индометацина и Дарбуфелона наблюдается некоторое улучшение показателей, причём в отношении СОД, МСМ и МДА Дарбуфелон проявляет большую активность. Соответственно, можно предположить, что использование Дарбуфелона будет более эффективным и безопасным, нежели Индометацина.

29

Биологическая химия

С.А. Шип, А.А. Устинов, Г.Н. Баранова СОСТОЯНИЕ ПРООКСИДАНТНЫХ, АНТИОКСИДАНТНЫХ И

НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ У БОЛЬНЫХ РОЖЕЙ

(научный руководитель – д.м.н., проф. Л.И. Ратникова)

Челябинская государственная медицинская академия Челябинск, Россия

Введение. Проблема рожи как варианта стрептококковой инфекции остается актуальной в связи со стабильно высоким уровенем заболеваемости, учащением перехода острых форм в хронические, изменением клинического течения в сторону утяжеления.

Цель. Изучение прооксидантных, антиоксидантных и нитроксидергических процессов при роже. Материалы и методы. Была изучена сыворотка крови 255 больных рожей – в динамике – двукратно с

интервалом 5 суток. В качестве контрольной группы исследовалась сыворотка 30 практически здоровых доноров крови. Определялась концентрация продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), активность антиоксидантного фермента – супероксиддисмутазы и содержание конечных метаболитов оксида азота. Данные обрабатывались с помощью пакета прикладных программ “Statistica 6.0 for Windows” с использованием непараметрической статистики Манна-Уитни, Вилкоксона, вычисления коэффициента корреляции Спирмена.

Результаты. При роже установлено усиление перекисного окисления липидов, ослабление антиоксидантной защиты и разнонаправленное изменение выраженности нитроксидергических процессов в зависимости от клинических проявлений.

Выводы. Установлены неизвестные ранее стороны патогенеза заболевания, что может стать основой для создания принципиально нового способа патогенетической терапии рожи.

А.А. Ямашева, Г.А. Садикова, Н.А. Протасова, И.А. Назарова СОДЕРЖАНИЕ ТБК-АКТИВНЫХ ПРОДУКТОВ В СТЕНКЕ ЖЕЛУДКА И

КИШЕЧНИКА У КРЫС С АЛЛОКСАНОВЫМ ДИАБЕТОМ НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ

(научный руководитель – асп. Е.А. Скворцова)

Ижевская государственная медицинская академия Ижевск, Россия

Введение. Окислительный стресс является основным звеном патогенеза сахарного диабета.

Цель. Исследование изменений уровня ТБК-активных продуктов (ТБКАП) в стенке желудка и кишечника при аллоксановом диабете у крыс с различной устойчивостью к стрессу на фоне введения липоевой кислоты.

Материалы и методы. Крысы-самцы с массой 180-200 г. тестировались в «открытом поле» и были разделены на группы: стресс-реактивные (СР) и стресс-устойчивые (СУ). Аллоксановый диабет вызывали однократным подкожным введением аллоксана тетрагидрата в дозе 155 мг/кг массы. С 4 по 40 день эксперимента вводили липоевую кислоту (ЛК) в дозе 50 мг/кг. Контролем служили крысы, которым вводился только аллоксан. Достоверность различия параметров вычисляли по критерию Стьюдента.

Материалы и методы. У крыс с аллоксановым диабетом в сравнении с опытной группой наблюдалось увеличение уровня ТБКАП в желудке на 10, 30 дни опыта; в кишечнике - на 5, 10, 40 дни эксперимента. Достоверные различия в показателях ТБКАП у СР и СУ крыс наблюдались в желудке на 5, 10, 30 дни опыта, в кишечнике - на 20, 30 и 40 дни эксперимента. Уровень ТБКАП тесно коррелировал с уровнем глюкозы во все сроки эксперимента.

Выводы. Таким образом, уровень ТБКАП в желудке и кишечнике уменьшался при введении ЛК в сравнении с контролем на 10, 20, 30, 40 дни эксперимента, что говорит о положительном воздействии ЛК на показатели ПОЛ.

К.С. Леньшина, Е.А. Воробьев, Ю.А. Миронова, И.А. Курпас РОЛЬ НЕКОТОРОЫХ МЕХАНИЗМОВ ЭРИПТОЗА В ПРОЦЕССЕ РАДАХЛОРИНИНИЦИИРОВАННОГО ФОТОГЕМОЛИЗА

(научный руководитель – к.б.н., доц. И.Л. Соловцова)

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Санкт-Петербург, Россия

Введение. Эриптоз – это процесс аналогичный апоптозу ядерных клеток. Общность эриптоза и апоптоза заключается (1) в кальциевой зависимости обоих процессов, (2) вовлеченности в их реализацию кальциевых каналов и (3) характерными изменениями состава липидной части мембраны. При фотоиндуцированном гемолизе

30