AVEKM 2011

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

Е.Ю. Крысова МОРФОМЕТРИЧЕСКАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЛАТЕРАЛЬНОГО ДОРСАЛЬНОГО ЯДРА

ТАЛАМУСА МЫШИ ДОМОВОЙ И КРЫСЫ СЕРОЙ

(научный руководитель – д.б.н., проф. Т.М. Лютикова)

Омская государственная медицинская академия Омск, Россия

Введение. Латеральное дорсальное ядро относится к ассоциативным ядрам таламуса, которые являются важным звеном в механизмах интегративной деятельности мозга, обеспечивая ее осуществление на прекортикальном уровне.

Цели исследования. Определить плотность нейронов латерального дорсального ядра таламуса правого и левого полушарий мозга мыши домовой и крысы серой для выявления межполушарных различий.

Материал и методы. Для световой микроскопии материал (головной мозг) фиксировали в жидкости Карнуа, подвергали обычной гистологической проводке и заключали в парафин. Серийные срезы окрашивали тионином по Нисслю с фиксированным pH. На 31 животном изучалась общая плотность нейронов (количество клеток на 1 мм2) латерального дорсального ядра таламуса правого и левого полушарий мозга, которую подсчитывали в 10 полях зрения при увеличении микроскопа × 400 (окуляр × 10, объектив × 40).

Результаты. Плотность нейронов в ПП составила у мыши домовой – 1288,2±24,2, у крысы серой – 755,9±21,3; в ЛП: у мыши домовой – 1261,2±57,8, у крысы серой – 730,1±28,6. В ПП плотность нервных клеток у мыши домовой на 3% (р<0,001) и крысы серой на 4% (р<0,001) больше, чем в ЛП.

Выводы. У обоих животных выявлена правополушарная асимметрия по распределению нейронов на 1 мм2 .

Н.А. Луговцов, А.Н. Платонов МИЕЛОИДНЫЕ МАРКЕРЫ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК В ТИМУСЕ ЧЕЛОВЕКА

(научный руководитель – асс. А.Г. Беловешкин)

Белорусский государственный медицинский университет Минск, Беларусь

Введение. Дендритные клетки (ДК) – гетерогенная система антигенпрезентирующих клеток, являющихся инициаторами и модуляторами иммунного ответа. Исследование дендритных клеток, которые обеспечивают селекцию тимоцитов и антигенпрезентацию, является важным для понимания процессов дифференцировки в тимусе.

Цель. Изучение локализации дендритных CD1a-, S-100-, CD68-положительных клеток в тимусе человека, выявление закономерностей их распределения.

Материалы и методы. В исследовании использовали фрагменты тимусов, удаленных в Минском детском кардиохирургическом центре. Проводилось иммуногистохимическое исследование с антителами к СD1a, S100, CD68.

Результаты. Распределение ДК в тимусе соответствует степени их развития. Маркером незрелых дендритных клеток является S-100, однако это не строгоспецифичный маркер. Незрелые ДК, образовавшиеся из клетокпредшественников, мигрировавших в тимус, скапливаются на кортико-медуллярной границе, а также в мозговом веществе, однако с меньшей плотностью распределения. Более зрелые дендритные клетки, маркером которых служил СD1a, определяются в мозговом веществе, в том числе - в тесной близости с тельцами Гассаля. Это может свидетельствовать о взаимодействии указанных структур. CD1a-положительные клетки имеют отросчатую форму, что характеризует зрелость дендритных клеток, и реально выполняют свои функции.

Выводы. Идентифицированы S-100-, CD1a-положительные клетки в тимусе человека в норме и описана их топография.

Д.А. Мурзина

ФЕРМЕНТАТИВНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ СПЛАЙСИНГА. РИБОЗИМЫ IIC

(научный руководитель – к.б.н. Е.А. Борисова)

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова Санкт-Петербург, Россия

Введение. Сплайсинг—процесс вырезания интронов из молекул РНК и соединения экзонов, сохраняющихся в «зрелой» молекуле, в ходе процессинга РНК.

Рибозим, ферментативная или каталитическая РНК—молекула, обладающая каталитическим действием. Цель. Выявить взаимодействие компонентов сплайсосомы с экзонами и интронами РНК.

141

Молекулярная биология и медицина

Материалы и методы. Инфузории Tetrahymena thermophila, электронный микроскоп ПЭМ-125К, центрифуга SIGMA 3-18, слабые растворы кислот и щелочей. Денатурация белков нагреванием, выделение РНК, наблюдения ферментативных реакций РНК с рибозимом.

Результаты. При выщеплении интронов из РНК образуется структура типа лассо. Интроны аутосплайсируются, но не нуждаются при этом в гуанозине. Вместо него атаку 5'-участка сплайсинга осуществляет одна из множества 2'-гидроксильных групп самого интрона. В результате реакции 5'-конец интрона присоединяется на расстоянии от 3'-конца, образуется разветвление с петлей — лассо, получающееся, из-за возникновения новой 2'—дифосфодиэфирной связи, в результате чего один из адениновых нуклеотидов образует 3 связи с соседними нуклеотидами. При соединении экзонов лассо выщепляется.

Выводы. Открытие того, что при аутосплайсинге интронов группы II образуется лассо, позволяет предположить, что рибозимы участвуют при сплайсинге ядерных пре-мРНК. Более того, интроны группы II, возможно, представляют эволюционный мостик между предшественниками ядерных мРНК и аутосплайсирующимися интронами группы I.

А.А. Петкевич ОСОБЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ ЧЕЛОВЕКА В ПАТОЛОГИИ

(научный руководитель – к м н., доц. Г.А. Актушина)

Омская государственная медицинская академия Омск, Россия

Введение. Одним из залогов эффективного лечения человека является знание его индивидуальных особенностей. Индивидуальные особенности личности определяются многими параметрами, в том числе и физиологическими. Такими параметрами являются и свойства нервной системы.

Цель. Выявить возможность наличия взаимосвязи между степенью силы нервной системы испытуемых и диагнозом «шизофрения»; выявить возможность наличия взаимосвязи между степенью силы нервной системы испытуемых и диагнозом «эпилепсия».

Материалы и методы. Исследование проводилось на базе 8ого женского отделения ОКПБ им. Н. Н. Солодникова, выборка составила 26 человек в возрасте 30-50 лет с диагнозом «шизофрения», и на базе педиатрического отделения городской детской клинической больницы №3, выборка составила 16 человек с диагнозом «эпилепсия». Результаты. В группе «шизофрения» выявлено незначительное преобладание сильной степени силы нервной системы 42,3%, со слабой нервной системой обнаружено 34,6%, со среднеслабой – 23,1%. В группе «эпилепсия» 62% имеют сильную степень силы нервной системы, со слабой и среднеслабой степенью силы нервной системы по 19%.

Выводы. Патологический процесс может развиваться как в условиях высокой степени силы нервной системы, так и слабой, что обусловлено особенностями структурно-функциональных свойств нервных элементов (синапсов, нейронов, глии и т.д.). Крайние значения степени силы нервной системы могут способствовать развитию патологического процесса различными механизмами.

О.В. Петрекова РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ТРОМБОГЕННЫХ ДНК ПОЛИМОРФИЗМОВ У НОВОРОЖДЕННЫХ АЛТАЙСКОГО КРАЯ

(научные руководители – д.м.н., проф. А.П. Момот, д.м.н., проф. О.И. Колесникова)

Алтайский государственный медицинский университет Барнаул, Россия

Введение. В настоящее время в значительной мере определены причины врожденных тромбофилий. Сведений о носительстве тромбогенных полиморфизмов в популяции Алтайского края нет.

Цель. Изучить распространенность тромбогенных ДНК полиморфизмов у новорожденных и их матерей, проживающих на территории Алтайского края и сформировать группы тромбогенного риска.

Материалы и методы. 391 новорожденный и их матери. Метод – генетического тестирования ДНК. Достоверность различий оценивали по критерию χ2 Пирсон.

Результаты. Распространенность полиморфизмов у новорожденных составила 89,5%, у матерей – 89,6%. I группа низкого риска – наличие изолированной мутации F5(Arg506Gln)(G/A) или F2(20210G/A)(G/A) или ее комбинация с 1 из 2 полиморфизмов MTHFR(Ala222Val)(С/Т,Т/Т), SERPINE(-6754G/5G)(5G/4G,4G/4G);

носительство MTHFR(Ala222Val)(Т/Т). II группа высокого риска – наличие 3 и более мутаций и полиморфизмов; носительство ассоциации MTHFR(Ala222Val)(Т/Т), SERPINE1(-6754G/5G)(4G/4G). Из 37 новорожденных 13 (3,32%) составили I группу, II 24 (6,14%). Из 31 матери 16 (4,18%) составили I группу, II 15 (3,92%). Высокий и

142

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

низкий тромбогенный риск у новорожденных и их матерей распространен с одинаковой частотой χ2= 0,92 и χ2= 0,15 (p>0,05).

Выводы. Выявлена высокая встречаемость полиморфизмов у новорожденных и их матерей в Алтайском крае. Определены группы высокого и низкого тромбогенного риска, которые с одинаковой частотой встречаются у новорожденных и их матерей.

Е.В. Сизько ВЛИЯНИЕ ИЗЛУЧЕНИЯ КОМПЬЮТЕРА НА НЕЙРОННЫЕ ПОПУЛЯЦИИ

НЕКОТОРЫХ ОТДЕЛОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

(научные руководители – к.б.н. Н.Б. Жданова, к.б.н., асс. Е.Ю. Крысова)

Омская государственная медицинская академия Омск, Россия

Введение. Компьютер – источник практически всех видов электромагнитного излучения. Его влияние наблюдается и на уровне нейронов.

Цели. Определить структурно-метаболические изменения нейронов двигательного анализатора и латеральной группы ядер таламуса (ЛГЯТ) лабораторных животных при излучении компьютера.

Материалы и методы. 9 белых беспородных крыс-самцов разделили на три группы: группа № 1 – перед системным блоком компьютера в течение 45 мин.; группа № 2 – перед экраном монитора 1,5 часа; группа № 3– перед экраном монитора 4 часа. Контроль – интактные животные. Головной мозг фиксировали в жидкости Карнуа, подвергали гистологической проводке, заключали в парафин. Срезы окрашивали тионином по Нисслю с фиксированным pH. Подсчитывали число нейронов с различной степенью хромофилии их цитоплазмы: нормохромные (нормо-), гипохромные (гипо-), гиперхромные (гипер-), тотально-гиперхромные (тот.гипер-), сморщенные (сморщ.).

Результаты. В слое II+III коры – снижение гипово всех группах в 2,5, 2,4 и 2,2 раза; увеличение гипер- в 2,8, 2 и 1,5; тот.гипер- в 5,6, 7,6 и 10 раз. Количество тот.-гипер. увеличилось во всех группах (2,5; 5,8; 7,2). В ЛГЯТ нарастание гипохромии (в 2,5; 3,9; 2,1 раза) за счет увеличения тот.-гипер. (в 6,8; 7 и 8,3 раза).

Выводы Тот.-гипер. могут перейти к клеткам нормального функционирования или к сморщиванию и гибели нейронов, т.е работа перед компьютером – это «стресс» для клеток головного мозга.

С.И. Соловьев АНАЛИЗ МИКРОМЕТРИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЕРЕДНЕГО МОЗГА

ГОЛУБЯ СИЗОГО COLUMBA LIVIA

(научный руководитель – к.б.н. Т.Б. Володичева)

Омская государственная медицинская академия им. М.И. Калинина Омск, Россия

Введение. К особенностям строения переднего мозга птиц относят хорошее развитие больших полушарий. Большое развитие стриатума, который дифференцирован на отделы: крупные из которых гиперстриатум (HV), неостриатум (NS) и палеостриатум (PS).

Функциональная организация гипер- и неостриатума мозга птиц чрезвычайно сложна. В их структурах имеются зоны представительства всех основных сенсорных систем.

Цель. Целью работы было исследование вентральной части гиперстриатума (HS) и неостриатума (NS) голубя сизого Columba livia (нейронная плотность и площадь полушарий), так как данная область мозга птиц исследована недостаточно. В большей части нейроны исследовались методом Гольджи, описывались связи нейронов с другими отделами ЦНС. Данных о количественной характеристике нейронного состава переднего мозга птиц и размерах его полей очень мало, но они важны для дополнения сведений об анатомических характеристиках переднего мозга голубя сизого.

Результаты. В результате проведенного исследования получено распределение нейронов, среднее значение плотности нейронов в вентральном гиперстриатуме(HV) и неостриатуме(NS) голубя сизого в правом и левом полушариях переднего мозга.

Также проводилось измерение линейных размеров полей мозга. Площадь полушарий и размеры полей вентрального гиперстриатума и неостриатума измерялись из расчета по 4 поля зрения при увеличении микроскопа ×56 ( окуляр ×7 объектив ×8) с помощью окулярной линейки. Все измерения были переведены в мм.

В полушариях получены значения: 1 – высота полушария, 2 – ширина полушария (ширина неостриатума), 3 – высота гиперстриатума, 4 – высота неостриатума, 5 – высота палеостриатума,6 – ширина палеостриатума.

Вывод. Данные исследования показали, что нейронная плотность меньше в вентральном гиперстриатуме, чем в неостриатуме. В правом полушарии концентрация нейронов больше, чем в левом. Полученные данные

143

Молекулярная биология и медицина

обработаны с применением критерия Стьюдента. Достоверных отличий по плотности нейронов в 1 мм2 в правом и левом полушарии нет.

При сравнении линейных показателей площади полей переднего мозга между правым и левым полушарием асимметрии также не наблюдалось.

Полученные нами сведения, дополняющие микро-анатомические характеристики мозга голубя сизого.

А.С. Улитина, Д.Н. Гораб

АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ VDR, COL1A1, CALCR И BGLAP С ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬЮ К СТЕРОИДНОМУ ОСТЕОПОРОЗУ (ОП) У БОЛЬНЫХ ИДИОПАТИЧЕСКИМ ФИБРОЗИРУЮЩИМ АЛЬВЕОЛИТОМ (ИФА)

(научный руководитель – д.м.н., проф.,М.В. Дубина)

Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербургский Академический Университет — научно-образовательный центр нанотехнологий РАН Санкт-Петербург, Россия

Введение. Основным средством лечения ИФА являются глюкокортикостероиды (ГКС). Одно из осложнений терапии ГКС – ОП. В то же время, на состояние костной ткани влияют полиморфизмы многих генов. Таким образом, ОП – мультифакториальное заболевание.

Цель. Оценить эффективность фармакопрофилактики стероидного ОП у больных ИФА с различной генетической предрасположенностью к ОП.

Материалы и методы. 114 больных ИФА, получающих ГКС и антирезорбтивные препараты (бисфосфонаты, кальцитонин). 1. Опросник для больных: суммарная доза ГКС, переломы в анамнезе. 2. DEXA: измерение минеральной плотности костной ткани (МПКТ). 3. Молекулярно-генетическое исследование (PCR-RFLP) 5 SNP в 4 генах: рецептор витамина D VDR-BsmI (rs1544410) и VDR-FokI (rs2228570), альфа1-цепь коллагена 1 типа COL1A1 (rs1800012), рецептор кальцитонина CALCR (rs1801197), остеокальцин BGLAP (rs1800247).

Результаты. Из полиморфизмов только VDR-FokI показал значимое влияние на МПКТ (p=0,009); также отмечена тенденция к влиянию на МПКТ для BGLAP (p=0,081). Факторы внешней среды продемонстрировали более существенное влияние на МПКТ, чем генетические факторы (R2=0,065).

Выводы. 1. Антирезорбтивные препараты эффективны для профилактики и лечения стероидного ОП у больных ИФА, независимо от генотипа. 2. Анализ полиморфизма VDR-FokI позволяет выявить лиц с повышенным риском развития ОП и обеспечить для них усиленную профилактику ОП. 3. Необходимы дальнейшие исследования для выяснения клинического значения полиморфизма гена BGLAP.

О.А. Юнеман ТУЧНЫЕ КЛЕТКИ В СОСУДИСТЫХ СПЛЕТЕНИЯХ БОКОВЫХ ЖЕЛУДОЧКОВ

ГОЛОВНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА

(научный руководитель – д.б.н., проф. С.В. Савельев)

Научно-исследовательский институт Морфологии человека РАМН Россия, Москва

Введение. В литературе есть сведения относительно распределения тучных клеток в различных тканях, о содержании в них различных ферментов. Единичные работы посвящены распределению мастоцитов в сосудистых сплетениях мозга человека и возрастная изменчивость их количества.

Цель. Целью работы явилось иммуногистохимическое изучение возрастной изменчивости распределения тучных клеток в сосудистых сплетениях боковых желудочков головного мозга человека.

Материалы и методы. Изучены сосудистые сплетения 37 человек в возрасте от 38 до 91 года. Парафиновые срезы толщиной 10 мкм были исследованы иммуногистохимическим методом с использованием мышиных моноклональных антител к триптазе тучных клеток. Количество мастоцитов оценивали в ворсинах и в области сосудистого клубка вокруг конкрементов.

Результаты. В сосудистых сплетениях тучные клетки присутствовали в ворсинах в небольшом количестве (2- 12 клеток в поле зрения). Считается, что количество мастоцитов уменьшается с возрастом. Однако, у женщин в возрасте 75, 83 и 91 года их количество составляло более 12 клеток в поле зрения, у мужчин 64, 69 и 71 года – 7-8. В области сосудистого клубка вокруг конкрементов количество тучных клеток не превышало 2-3 в поле зрения. Однако в пяти случаях (у мужчин 40 и 43 лет и у женщин 44, 65 и 75 лет) их количество вокруг конкрементов превышало 20, а в одном случае у женщины 85 лет – 35 клеток в поле зрения. Причем повышение количества клеток в ворсинах и вокруг конкрементов совпадало только в 50% случаев.

144

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

Выводы. Таким образом, количество мастоцитов в сосудистых сплетениях – это параметр, обладающий сильной индивидуальной изменчивостью и требующий детального изучения на большом объеме материала.

Ю.А. Яковлева, А.С. Иванова, Г.А. Цаур

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОРОГОВОГО УРОВНЯ УВЕЛИЧЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ BCR-ABL ПРИ КОТОРОМ ЦЕЛЕСООБРАЗНО ПРОВОДИТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ BCR-ABL У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ С РЕЗИСТЕНТНОСТЬЮ К ТЕРАПИИ ИНГИБИТОРАМИ ТИРОЗИНКИНАЗ

(научный руководитель –к.м.н. Л.Г. Фечина)

Областная детская клиническая больница № 1, Центр организации специализированных видов медицинской помощи «Институт медицинских клеточных технологий» Екатеринбург, Россия

Введение. В настоящее время не существует единого мнения о том, какое увеличение уровня экспрессии BCRABL (BCR-ABL/ABL), при котором требуется проведение определение мутаций в гене BCR-ABL.

Цель. Определить пороговое значение увеличения BCR-ABL/ABL, которое предсказывает наличие мутаций в гене BCR-ABL.

Материалы и методы. Обследовано 47 пациентов с признаками неудачи терапии согласно критериям European LeukemiaNet, получавших терапию ингибиторами тирозинкиназ. Мутации в гене ABL определяли методом секвенирования в двух направлениях продуктов ПЦР. Уровень BCR-ABL/ABL определен методом ПЦР в реальном времени.

Результаты. Были обнаружены 10 различных точечных мутаций в гене BCR-ABL, включая 3 в Р-петле, 2 в IM, 3 в А-петле и 2 мутации вне KD. Пациенты были разделены на две группы: с наличием мутаций в гене BCR-ABL (n=18) и без них (n=29). Группы не отличались по демографическому составу, распределению по стадиям заболевания, группам риска по Sokal, медиане времени между измерениями уровня BCR-ABL/ABL. Анализ ROC кривой показал, что наилучшими диагностическими характеристиками обладает величина увеличения уровня BCR-ABL/ABL в 5,5 раз (AUC=0,68 p=0,022). Чувствительность, предсказательная ценность позитивного результата и диагностическая эффективность теста были относительно низкими (40,6 %, 40,6 %, 56,5 %, соответственно), в то время как специфичность и предсказательная ценность негативного оставались высокими (92,9 % в обоих случаях).

Вывод. При увеличении нормализованного числа копий BCR-ABL более чем в 5,5 раза целесообразно проводить исследование мутаций в гене BCR-ABL. При этом предсказательная ценность негативного теста составила 92,9%. Отношение шансов 8,89 (95% ДИ 1,03-76,58).

145

Медицинская химия и биофизика

147

Медицинская химия и биофизика

H. Aliabadi Farahani, K. Maroufi

INCREASING IN MEDICAL APPLICATION OF ESSENTIAL OIL BY MEDICINAL AND AROMATIC PLANTS (MAP) DEVELOPMENT

(Supervisor – H. Aliabadi Farahani, PhD Student)

Young Researchers Club, Shahr-e-Qods Branch, Islamic Azad University Tehran, Iran

Introduction. Medicinal and aromatic plants are an accessible, affordable and culturally appropriate source of primary health care for more than 80% of world's population. Plant secondary metabolites have been a fertile area of chemical investigation for many years, driving the development of both analytical chemistry and of new synthetic reactions and methodologies. Metabolites which are produced by routes other than the normal metabolic pathways, mostly after the phase of active growth and under conditions of deficiency and the biological significance of many secondary metabolites is not exactly known. Essential oils are generally extracted by distillation. They are used in flavoring food and drink, and treatments to remedies for cancer.

Material and Methods. Plant secondary metabolites are a diverse group of molecules that are involved in the adaptation of plants to their environment but are not part of the primary biochemical pathways of cell growth and reproduction. In general, the terms plant secondary compounds, phytochemicals, antinutritional factors, and plant xenobiotics have been used in the literature to refer to this group of compounds. There are well over 24,000 structures, including many compounds that have antinutritional and toxic effects on mammals. This number does not include the oligomeric polyphenolic compounds (proanthocyanidins and hydrolyzable tannins) that are just now being more accurately described and will increase the number by several thousand. Some major plant secondary metabolites or phytochemicals that occur in plants include protease inhibitors, lectins, alkaloids, nonprotein amino acids, cyanogenic glycosides, saponins, and tannins. These compounds are involved in defense against herbivores and pathogens, regulation of symbiosis, control of seed germination, and chemical inhibition of competing plant species (allelopathy), and therefore are an integral part of the interactions of species in plant and animal communities and the wall polysaccharides. This division between groups of plant secondary metabolites is not exclusive. For instance, hydrolyzable tannins are potentially toxic to ruminants. The major lesions are hemorrhagic gastroenteritis, necrosis of the liver, and kidney damage adaptation of plants to their environment. Much of the research on plant secondary metabolites has concentrated on their toxic and antinutritional effects on livestock. Toxic plant secondary metabolites are present in plants at low concentrations (generally less than 2% of the dry matter) and have negative physiological effects when absorbed, such as neurological problems, reproductive failure, goiter, gangrene, and death. Examples are alkaloids, cyanogenic glycosides, toxic amino acids, saponins, and many others. Nontoxic phytochemicals lower digestibility of nutrients and affect palatability. Higher concentrations (>2% of dry matter) of these compounds are required for eliciting negative effects, and the primary site of activity is in the digestive tract or the sensory organs associated with feeding behavior. These plant secondary metabolites include tannins, protease, and amylase inhibitors. Compounds that have a structural role in the plant (e.g., lignin, biogenic silica, and cutin) lower the extent of microbial digestion of cell with proximal tubular necrosis. The systems for secondary metabolites plants extraction are including Clevenger, HPLC and Soxhelt and GC and CG/MS use for compounds identification.

Results and Conclusion. The finding may give applicable advice to medical researchers for management and concern on essential oil strategy in the use of medicinal and aromatic plants and production of medicals plant by extraction and compounds identification of essential oil.

Е.Ю. Парнышкова ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ДОФАМИНА СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ КЛЕТКАМИ, РАСТУЩИМИ В СУСПЕНЗИИ

(научный руководитель – д.б.н., проф. Д.А. Мошков)

Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН Пущино, Россия

Введение. Недавно нами установлено, что дофамин (ДА) при взаимодействии с живой клеткой проникает в цитозоль, полимеризует глобулярный (Г-) актин и существенно снижает ее жизнеспособность.

Цель. Исследование действия ДА как онкотерапевтического средства на злокачественные клетки, богатые Г- актином.

Материалы и методы. Изучали перевиваемую асцитную карциному Эрлиха (АКЭ) мышей и культуру клеток острой моноцитарной лейкемии человека THP-1. 106 клеток АКЭ инокулировали внутрибрюшинно (в/б) в 0,1 мл физраствора для инфузий (ФР). ДА вводили в/б в объеме 1 мл через 18 часов после инокуляции АКЭ и далее 2 раза в день с интервалом между инъекциями 5 час в течение 6 суток. Контрольным мышам инъецировали в/б ФР. Клетки THP-1 культивировали 3 суток в чашках Петри. Изучали жизнеспособность клеток, гистологию в мазках и толстых срезах и ультраструктуру.

148

Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины – 2011

Результаты. Недельный курс ДА концентрацией 10-2 M и 10-1 M снижал в 10 и 30 раз суммарное количество клеток в АКЭ мышей по сравнению с контролем, а их диаметр по гистологическим данным уменьшался на 27% и на 59%, соответственно. Выживаемость клеток THP-1 под влиянием ДА концентрацией 10-1 М спустя 72 часа составила всего 3%, а их диаметр уменьшался на 20%. При этом в подопытных препаратах злокачественных клеток обоих типов наблюдалась вакуолизация. В ультраструктуре клеток выявлено повреждение микровиллей, появление специфических муаровых узоров в цитозоле, утолщение кортикального слоя и существенное повсеместное формирование сети филаментов разной плотности, идентифицированных как актиновые нити.

Выводы. Предположено, что онкоцитотоксический эффект ДА обусловлен индуцированной полимеризацией Г- актина цитозоля.

Э.М. Семенов, Б.Т. Бальжитов, А.В. Ефимов МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ D- И L-АЛАНИНА

(научные руководители – к.м.н., П.П. Терешков, к.б.н., с.н.с. М.В. Максименя)

Читинская государственная медицинская академия Чита, Россия

Введение. Несмотря на абсолютное доминирование аминокислот (а/к) L ряда, D-а/к не исчезли из биологических систем: они присутствуют в свободной форме или в составе других веществ, участвуют в регуляции разнообразных процессов.

Цель. Оптимизировать условия разделения и способ количественного определения D-, L-аланина методом ВЭЖХ.

Материалы и методы. В основу разделения а/к разных стереохимических рядов был положен метод Marfey P. Базовые растворы стандартов D-, L-аланина (Fluka) готовили на 0,01н HCl. Рабочие растворы а/к получали путем разбавления базовых H2O непосредственно перед использованием. Аппаратура - хроматографический комплекс LC-20 Prominence (Shimadzu).

Результаты. Как наиболее подходящий был выбран следующий протокол: в виалу (Pierce) помещали рабочие растворы а/к, добавляли натрия бикарбонат и дериватизационный реагент (1-флюоро-2,4- динитрофенил-5-L-аланин амид (FDAA) в ацетоне). Виалы нагревали 60 мин при t=40ْС. После охлаждения, добавляли раствор HCl, затем вводили 20 мкл пробы в инжектор хроматографа. Разделение дериватов D-, L- аланина проводили на колонке Диасфер 110-С18 5 мкм 4,0х100 мм, элюент – 50% 50 мМ фосфатный буфер рН 3,0, скорость потока 0,7 мл/мин, давление 46 бар, длина волны детекции 340 нм. Время выхода L- аланина 12 минута, D-аланина- 13,7 минута. Строили калибровочную кривую для D- и L-аланинов, по которой рассчитывали концентрацию а/к в многокомпонентных смесях.

Выводы. Модифицированный метод ВЭЖХ позволяет провести разделение стереоизомеров и определить концентрацию D-, L-аланина в различных биологических объектах.

Ю.В. Шаталин, В.С. Шубина ВЛИЯНИЕ ПРОДУКТОВ РАСЩЕПЛЕНИЯ И ОЛИГОМЕРИЗАЦИИ ФЛАВОНОИДА В

УСЛОВИЯХ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА НА ПРОДУКЦИЮ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА В МОДЕЛЬНОЙ СИСТЕМЕ

Пущинский государственный естественно-научный институт, Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН Пущино, Россия

Введение. Известно, что в условиях окислительного стресса флавноиды могут претерпевать ряд изменений, в том числе расщепляться на фенольные фрагменты или подвергаться окислительной полимеризации с формированием олигомеров.

Цель. Изучение процесса окислительной модификации флавоноида в физиологических условиях и влияние продуктов данного процесса на уровень активных форм кислорода является актуальной задачей и целью данного исследования.

Материалы и методы. Методом люминол-зависимой хемилюминесценции было проанализировано изменение кинетики распада пероксида водорода катализируемого пероксидазой хрена в присутствии мономерной, олигомеризованных форм или продуктов окисления флавоноида.

Результаты. Было установлено, что в физиологических условиях в присутствии пероксидазы хрена наблюдается формирование олигомеризованной формы флавоноида.

149

Медицинская химия и биофизика

Выводы. Был предложен механизм формирования олигомеризованных форм флавоноидов и продуктов распада в условиях окислительного стресса и проанализированы антиоксидантные свойства исследуемых соединений в модельной биохимической системе.

Работа выполнена при финансовой поддержке Минобразования, программа АВЦП «Развитие научного потенциала высшей школы» № 2.1.1/10886 и ФЦП № 16.740.11.0349.

В.С. Шубина, Ю.В. Шаталин ДЕЙСТВИЕ ОЛИГОМЕРИЗОВАННЫХ ФОРМ ФЛАВОНОИДОВ НА ПРОЦЕСС

РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ ПОСЛЕ ХИМИЧЕСКОГО ОЖОГА

Пущинский государственный естественно-научный институт, Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН Пущино, Россия

Введение. Ранее нами было показано, что комплексы флавоноид-металл усиливают процесс регенерации кожи после химического ожога. Действие данных препаратов, по-видимому, связано с формированием в зоне повреждения конъюгированных с продуктами перекисного окисления липидов форм флавоноидов, которые формируются в присутствии металлов переменной валентности.

Цель. Таким образом, целью данной работы было изучение влияния олигомеризованных форм флавоноидов на модифицирование регенерационных процессов в коже при химическом ожоге.

Материалы и методы. Течение раневого процесса оценивали по изменению площади ожога и на основании гистологических исследований поперечных срезов поврежденного участка кожи.

Результаты. Было установлено, что процесс регенерации ткани проходит наиболее эффективно при аппликации препаратов на основе конъюгата таксифолина с ацетальдегидом, приближаясь по эффективности к контрольному противоожоговому препарату “Олазоль”.

Выводы. Было продемонстрировано эффективное действие исследуемых соединений на процесс регенерации кожи после химического ожога и предложен механизм их действия, основанный на процессах утилизации токсичных метаболитов и продуктов перекисного окисления липидов.

Работа выполнена при финансовой поддержке Минобразования, программа АВЦП «Развитие научного потенциала высшей школы» № 2.1.1/10886 и ФЦП № 16.740.11.0349.

150