Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Gista_svodnyy_dokument.docx
Скачиваний:
171
Добавлен:
02.05.2015
Размер:
320.64 Кб
Скачать

1.Методика взятия, фиксирования и уплотнения материала.

Процесс приготовления гистологического препарата состоит из следующих этапов:

  1. взятие и фиксирование материала,

  2. его уплотнение,

  3. приготовление срезов на микротоме,

  4. окрашивание,

  5. заключение срезов в бальзам или синтетические смолы.

Взятие и фиксирование: максимальные размеры кусочков – 1*1*0,5см. фиксирующей жидкости не менее 1:9. Взятый образец ткани помещают в фиксатор: простой - спирт, формалин, раствор уксусной кислоты, бихромата калия, осмиевой кислоты или сложный – смеси простых фиксирующих жидкостей. Действие фиксаторов заключается в том, что удерживают клеточную структуру препарата в том состоянии, в котором их застигла смерть.

Уплотнение материала: цель данного этапа – уплотнить препарат настолько, чтобы из него можно было сделать срез. Применяют уплотняющие срезы – парафин(1-4 часа), целлоидин(1-3 недели), желатин, органические смолы или замораживание. Сначала препарат избавляют от воды с помощью спирта, затем избавляют от спирта с помощью бензола, ксилола или хлороформа. Из уплотнённого образца вырезают блоки и готовят тонкие срезы.

2. Техника изготовления гистосрезов, их окраска и заключение.

Приготовление срезов: самые тонкие (5-7мкм) срезы можно приготовить из материала в парафине. Из образцов в целлоидине срезы получаются толщиной 10-30 мкм. Срезы получают на санных или ротационных микротомах. Срезы для эксперт-диагностики – на замораживающем микротоме.

Окрашивание срезов: срезы окрашивают, чтобы увеличить контрастность различных гистологических структур в препаратах, предназначенных для светового микроскопа.

Методы окраски: красители бывают кислые (окрашивают оксифильные срезы), основными ( окрашивают базофильные срезы) и специальными (вытесняют конкретные структуры, обладающие сродством с ними) . Нейтрофильные срезы окрашивают как кислые, так и основные красители. Распространён комбинированный метод окраски гематоксилин+эозин. Окрашенные препараты обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле, затем заключают между предметным и покровным стеклом в канадский бальзам или синтетические смолы.

3. Значение новых методов ( цитохимия, гисторадиография, люменисцентная или электронная микроскопия,) исследования для познания глубинных процессов жизни на клеточном и субклеточном уровнях.

Цитохимические исследования проводят в препаратах (мазках или отпечатках) костного мозга, крови, различных органов и новообразований, пунктатов; они основаны на использовании специфических химических цветных реакций для определения в клетках различных веществ (под действием специально подобранных реактивов происходит окрашивание тех или иных веществ в цитоплазме, а по степени и характеру окраски судят о количестве или активности исследуемых веществ). Цитохимические исследования относительно несложны, но уступают в точности количественному анализу, проводимому с помощью биохимических методов.

Гистоавторадиография – или АВТОРАДИОГРАФИЯ (ауторадиография) — способ регистрации альфа- и бета-излучений, основанный на фотохимическом действии ионизирующих излучений. Для обнаружения радиоактивных изотопов фотографическая эмульсия приводится в соприкосновение с исследуемым материалом, в результате чего альфа- и бета-частицы вызывают почернение фотоэмульсии в виде линий (треков) по ходу пробега частицы. Альфа-частицы дают прямые широкие треки, бета-частицы — узкие неравномерные зигзагообразные полоски.

Люминесцентная микроскопия, метод наблюдения под микроскопом люминесцентного свечения микрообъектов при освещении их сине-фиолетовым светом или ультрафиолетовыми лучами. Примером такого свечения являются известные всем лампы дневного света, в которых в результате облучения ультрафиолетовыми лучами светится специальный состав - люминофор, покрывающий изнутри колбу лампы.

Электронная микроскопия — это метод исследования структур, находящихся вне пределов видимости светового микроскопа и имеющих размеры менее одного микрона (от 1 мк до 1—5 Å).

Действие электронного микроскопа (рис.) основано на использовании направленного потока электронов, который выполняет роль светового луча в световом микроскопе, а роль линз играют магниты (магнитные линзы).

Вследствие того, что различные участки исследуемого объекта по-разному задерживают электроны, на экране электронного микроскопа получается черно-белое изображение изучаемого объекта, увеличенное в десятки и сотни тысяч раз. В биологии и медицине в основном используются электронные микроскопы просвечивающего типа.

4. строение клетки, как саморегулируемой системы организма.

Клетка – наименьшая структурно-функциональная единица живой материи, состоящая из ядра, цитоплазмы с погружёнными в неё органеллами , раздражимой цитоплазматической мембраны и представляющая собой целостную, саморегулируемую, самовоспроизводящуюся систему. М.б. отдельным организмом, или входить в состав тканей и органов (специализированная клетка). В неё входят поверхностный, метаболический аппарат.

5. Поверхностный аппарат клетки

Имеет сложное строение, в основе лежит плазматическая мембрана, с которой снаружи связан гликокаликс, изнутри опорно-сократительный аппарат гиалоплазмы.

Плазмолемма – внешняя клеточная мембрана – смая толстая из цитомембран. Состоит из билипидного слоя, встроенных в него белковых молекул ( периферических, полуинтегральных, интегральных) и гликокаликса. Гликокаликс – слой полисахаридов, в котором находятся разветвлённые молекулы олигосахаридов, гликолипидов, гликопротеидов. Они выступают в роли антенн-рецепторов. Важный компонент мембраны – холестерол. Он определяет консистенцию мембраны.

Все мембраны выполняют F: разграничительную, рецепторную, транспортную.

Вещества, поступающие в клетку, могут выводиться из неё с помощью осмоса, диффузии, активного транспорта, а также могут транспортироваться через мембрану в клетку и обратно с помощью фагоцитоза, эндоцитоза, пиноцитоза, экзоцитоза. Также плазмолемма участвует в формировании межклеточных контактов – изолирующих ( или плотные, самые тесные соединения, блокирующие распространение веществ в межклеточном пространстве), механических ( устроены просто, по типу пальцевидных отростков, между мембранами формируется пластинка гликокаликса) , химических ( щелевые, или нексусы – осуществляют ионную и электрическую связь между клетками), электрических (представляют собой соединения в виде пятислойных структур, без синаптической щели.).

Соседние файлы в предмете Гистология