Работа №2. Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов

Принцип метода: Вещества, увеличивающие каталитическое действие фермента, называются активаторами. Активаторы обычно не входят в состав самого фермента, но образуют с ним комплексные соединения в процессе катализа и способствуют протеканию реакции. Вещества, тормозящие активность фермента, называются ингибиторами. Среди активаторов и ингибиторов часто встречаются ионы металлов, входящие в состав различных солей. Для амилазы слюны активаторами являются ионы Ca²⁺, Zn²⁺, Nacl, а ингибитором - Cu²⁺.

Порядок выполнения работы: В три пробирки наливают по 1 мл (20 капель) разведенной слюны. В пробирку №1 добавляют 2 капли H₂O _дист., в пробирку №2 – 2 капли 1% раствора Nacl, в пробирку №3 - 2 капли 1% раствора CuSO_4. После этого в каждую пробирку добавляют по 5 капель 1% раствора крахмала. Все пробирки оставляют при комнатной температуре на 5 минут, затем в каждую добавляют по 1 капле 0,1% раствора J₂ в KJ и перемешивают. Для более наглядной картины изменения окраски целесообразно в каждую пробирку добавить по 2 мл H₂O _дист.

На основании сопоставления окраски растворов во всех трех пробирках сделать вывод об активирующем или ингибирующем действии взятых для исследования веществ.

Клинико-диагностическое значение: Некоторые природные или синтетические вещества оказывают избирательное ингибирующее действие на ферменты и используются в качестве лекарственных препаратов. Данное направление является перспективным, к настоящему времени получены новые лекарственные препараты для лечения гипертонической болезни – ингибиторы АПФ (ангиотензинпревращающего фермента), лечения атеросклероза – ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы (статины), снижающие синтез холестерина. В больших дозах ингибиторы могут оказаться ядами.

Работа №3. Специфичность ферментов

Принцип метода: Основным свойством ферментов является специфичность их действия. Она проявляется в том, что фермент действует лишь на определенный субстрат и катализирует определенное превращение. Специфичность обусловлена соответствием между строением субстрата и активного центра фермента. Амилаза слюны ускоряет гидролиз полисахаридов (крахмал, гликоген), но не оказывает никакого действия на дисахариды (сахароза).

Порядок выполнения работы: В 2 пенициллиновых флакона наливают по 5 капель разведенной слюны. В первый флакон добавляют 10 капель 1% раствора крахмала, во второй добавляют 10 капель 1% раствора сахарозы. Обе пробы помещают в термостат (38⁰ С) на 10 минут, после чего с содержимым проделывают реакцию Троммера (см. Работа №1). В случае положительной реакции на глюкозу наблюдается красное окрашивание.

В выводе указать, в чем проявляется специфичность фермента и чем она обусловлена.

Клинико-диагностическое значение: Изучение специфичности ферментов позволяет разрабатывать лекарственные препараты, действующие по принципу ингибирования, активирования или парализации ферментов. Эти препараты могут быть структурными аналогами субстратов (конкурентное ингибирование) или аналогами активного центра (антидотная терапия)