Лабораторное занятие №5 Тема:Микробиологическая диагностика дизентерии

Цель.Изучить этиологию, эпидемиологию, особенности патогенеза острой и хронической дизентерии. Овладеть основными методами лабораторной диагностики дизентерии и оценить их диагностическое значение. Научиться практически решать задачи по специфической профилактике и терапии дизентерии.

Теоретическая справка

Дизентерия вызывается различными видами бактерий, относящимися к роду Shigella.

Основной механизм передачи – фекально-оральный.

Шигеллы в течение суток могут оставаться в желудке, часть из них распадается, высвобождая эндотоксин, который защищает микроорганизмы от действия гуморальных и клеточных факторов иммунитета хозяина. Оставшиеся шигеллы продвигаются в тонкий кишечник, где могут задерживаться до нескольких суток и размножаться. После этого бактерии продвигаются в толстый кишечник. Пусковым моментом в патогенезе дизентерии являются адгезия и внутриклеточное паразитирование шигелл.

Проникновение шигелл в эпителиоциты генетически опосредовано наличием у шигелл белков наружной мембраны, взаимодействующих с рецепторами эпителиоцитов и побуждающих последние к поглощению возбудителей. Проникшие внутрь клеток шигеллы способны в них размножаться благодаря наличию у них факторов персистенции: АЛА, АИА и др.

В развитии хронической дизентерии важное значение имеют следующие механизмы: а) внутриклеточный паразитизм патогена; б) антигенная мимикрия шигелл; в) секреция факторов персистенции шигеллами; г) развитие дисбиоза; д) формирование ГЗТ и др.

Для лабораторной диагностики дизентерии используются два принципа:

1. обнаружение возбудителя бактериологическим методом;

2) обнаружение специфических изменений в организме серологическим методом в РПГА по нарастанию титра антител.

Выбор исследуемого материала для бактериологического метода определяется особенностью возбудителя, а именно, его внутриклеточным паразитированием: забор материала производят петлей, которая вводиться в прямую кишку на 10-20 см.

Второй принцип диагностики позволяет подтвердить диагноз острой дизентерии по нарастанию титра антител или по обнаружению в сыворотке больного иммуноглобулинов класса IgМ; при хронической дизентерии обнаруживаются иммуноглобулины классаIgG.

Самостоятельное практическое задание

Задание 1

Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики дизентерии. Оценить их диагностическую ценность. Ознакомиться с ИБМП для лабораторной диагностики дизентерии.

Задача. В инфекционной больнице в течение 6 дней лечиться больной с диагнозом: «Острая дизентерия». Жалобы при поступлении на высокую температуру, частый жидкий стул со слизью и кровью, боли в животе. Для подтверждения диагноза проведено бактериологическое исследование парными сыворотками на 3-й и 6-й дни болезни. Учтите результаты бактериологического и серологические исследования.

Методика 1.

Бактериологический метод диагностики: выделение и идентификация чистой культуры.

1-й этап.Посев нативного материала. Или взятого с помощью петли из прямой кишки. Материал засевают на среду Плокирева или Левина или висмут-сульфит агар и помещается в термостат при температуре 37°С и инкубируется в течение 24-48 часов, петлю заливаем средой накопления ( селенитовый или желчный бульоны).

2-й этап.Выделение чистой культуры. Через 24 часа инкубации в термостате с помощью петли отвить типичную для дизентерийных бактерий бесцветную колонию на скошенный МПА или среду Олькеницкого для выделения чистой культуры и поместить в термостат на сутки. Из сред накопления произвести высев на среды Плоскирева, Левина или висмут-сульфит агар.

3-й этап.Идентификация выделенной культуры: а) морфология; б) биохимические свойства; в) антигенная структура;

4-й этап:учесть чувствительность выделенной культуры к антибиотикам и бактериофагу.

Методика 2

Серологический метод диагностики.

Для серологического исследования при постановке РПГА берется: а) сыворотка больного; б) эритроцитарный диагностикум; в) физиологический раствор.

Протокол исследования

Цель…

Бактериологический метод

Исследуемый материал	Среда для посева	Характеристика колоний по цвету	Идентификация цистой культуры
			Морфология	Биохимические свойства			агглютинации		Чувствительность к антибиотикам и бактериофагу
				лактоза	глюкоза	маннит	С сывороткой Флекснера	С сывороткой зонне и ньюкастл

Серологический метод

Срок исследования	Разведение сыворотки больного
	1/100	1/200	1/400	Контроль
3-й день 6-й день

Выводы

Задание 3

Цель.Изучить специфические препараты для диагностики дизентерии.

Методика.

Используя аннотации к диагностическим препаратам по теме «микробиология дизентерии», изучите препараты, применяемые при диагностике этой инфекции.

Протокол исследования

Цель…

Название препарата

Состав

К какой группе диагностических препаратов относится

Практическое использование (метод диагностики)

Аннотация лечебно-профилактических и диагностическим препаратов по теме «Микробиология дизентерии»

Лечебные бактериофаги:

Бактериофаг дизентерийный поливалентный жидкий или в таблетках – стерильный фильтрат фаголизатов возбудителей бактериальной дизентерии: шигелл Флекснера 1,2,3,4,6- типов и шигелл Зонне

Интести-бактериофаг жидки – смесь стерильных фильтратов фаголизатов шигелл Флекснера 1,2,3,4,6-го серовариантов, шигелл Зоне; сальмонелл паратифа А, паратифа В, тифимуриум, инфантис, холерасуис, ораниенбург, энтеритидис; наиболее распространенных серовариантов кишечной палочки, протеус вульгарис и мирабилис, энтерококков, стафилококков, псевдомонас аеругиноза. Применяется для лечения кишечных инфекций.

Диагностические препараты

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Получены из крови животных, иммунизированных определенными видами шигелл. Используются в бактериологическом методе для идентификации чистых культур.

Дизентерийный диагностикум. Состоит из взвеси убитых бактерий Флекснера и Зоне. Используется в серологическом методе.

Дизентерийный эритроцитарный диагностикум состоит из взвеси эритроцитов, нагруженных антигенами Флекснера, Зоне и др. используются для постановки РПГА в серологическом методе.