3. Характеристика некробактериоза

Некробактериоз. Инфекционное заболевание, характеризующееся гнойно-некротическим поражением кожи и подлежащих тканей, слизистых оболочек и паренхиматозных органов. К некробактериозу восприимчивы все виды сельскохозяйсвенных животных, а также человек, птицы, в основном — куры. Наиболее чувствителен молодняк. Возбудитель некробактериоза — Fusobacterium necrophorum, род Fusobacterium, семейство Bacteroidaceae.

Болезнь известна давно; описывалась под названиями копытная болезнь, парша губ, энзоотический стоматит ягнят, дифтерия телят, гангренозный мокрец лошадей, копытка северных оленей, некротический стоматит поросят.

Источник возбудителя инфекции — больные и переболевшие животные, а также здоровые животные, особенно жвачные, в рубце к-рых бактерия некроза обитает постоянно. Она выделяется во внешнюю среду с некротизированными тканями во время приёма корма, при жвачке, реже с калом. Возбудитель Н. обитает также в жел.-киш. тракте всеядных (приматы, свиньи), хищных, грызунов, птиц (совы, фазаны, дикие утки) и членистоногих. В почве, каловых массах, моче и патол. материале бактерия некроза сохраняется непродолжительно и находится там в ослабленном состоянии. Осн. фактор, способствующий возникновению Н.,— ослабление резистентности организма в связи с изменением характера и режима кормления, неблагоприятными условиями содержания. Особенно быстро распространяется Н. во влажный период года, при травмах кожного покрова, перемещении животных из одной климатич. зоны в другую, содержании в сырых помещениях, в период массового лёта кровососущих насекомых (у оленей), при родственном разведении животных. Заражение происходит при попадании возбудителя на травмированную кожу или слизистые оболочки животных. Иммунитет изучен слабо.

Р. Кох в 1881 г. выделил возбудителя некробактериоза, а в 1882 г. его подробно описал Леффлер. В нашей стране болезнь изучали Н. Н. Андреев и П. В. Павельский (1931), А. Г. Ревнивых (1932), Н. Камбулин (1937), И. В. Попов (1939), Я. Р. Коваленко (1945) и др.

Морфология. Возбудитель — Fusobacterium necrophorum, входит в род Fusobacterium (веретенообразных). Это полиморфный неподвижный микроорганизм, спор и капсул не образует, грамотринательный. В мазках из свежего материала имеет вид отдельных палочек шириной 0,5... 1,5 и длиной 1,5...3мкм или длинных (от 30 до 400 мкм) нитей. Хорошо красится фуксином Циля, синью Леффлера, а также по методу Муромцева. При окраске обычными анилиновыми красителями окрашивается неравномерно.

В свежих культурах, в мазках из некротических очагов имеет форму длинных переплетающихся нитей, окрашенных зернисто. Часто такие нити имеют колбовидное утолщение, шаровидные вздутия, окрашивающиеся более интенсивно.

В мазках из старых культур и отпечатках из хронических очагов поражения, особенно инкапсулированных, фузобактерии имеют форму коротких палочек длиной 0,7...4 и шириной 0,3...0,5 мкм. крашиваются они зернисто, неравномерно, часто по концам более интенсивно. В таких препаратах встречаются также кокковидные формы.

Биохимические свойства. Фуэобактерии — хемоорганотрофы, одни из них обладают сахаролитической активностью, другие не ферментируют сахара, но зато ферментируют пептоны. Fusobacterium necroforum ферментирует с образованием кислоты и газа арабинозу, глюкозу, галактозу, левулезу, мальтозу, сахарозу, салицин. Слабо ферментирует лактозу. Желатин и свернутую сыворотку не разжижает, не свертывает яичный белок, слабо и непостоянно пептонизирует молоко, образует индол и сероводород. Аммиак не вырабатывает. Не восстанавливает нитраты в нитриты. Различная биохимическая активность фузобактерий может быть использована для их идентификации.

Лабораторная диагностика некробактериоза основана на результатах бактериологического исследования. Осуществляется на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Для некробактериоза характерно наличие гнойно-некротических поражений нижних частей конечностей, кожи лицевой части головы, вымени, слизистых оболочек ротовой полости, половых органов. В лабораторию направляют кусочки пораженных органов и тканей с прилегающей здоровой тканью, целые трупы мелких животных, в том числе птиц. Содержимое из некротизированных очагов можно набирать в пастеровские пипетки, запаивать и пересылать в лабораторию.

Для прижизненного исследования берут некротические поражения на границе омертвевшей и здоровой тканей после предварительной очистки от распавшейся ткани и гноя. Из этих же участков готовят препараты-отпечатки. При поражении ротовой полости берут слюну больного животного. В лабораторию все пробы отправляют с нарочным. Патологический материал консервируют; в случае необходимости в 30%-ом стерильном глицерине.

Мазки, приготовленные из некротизированной ткани, фиксируют спирт-эфиром 10 мин и окрашивают синью Леффлера или по методу Муромцева, Романовского— Гимзе, а также по Граму. В мазках обнаруживают зернисто окрашенные нити или тонкие длинные грамотрицательные палочки.

Для посевов на среды используют кусочки некротизированной ткани, отобранной на границе со здоровой, которые помещают в среду Китта—Тароцци с добавлением 10% свежей крови и 0,5% глюкозы при pH 7,4—7,6. Посевы инкубируют до 3 сут. при 38 'С. Делают посевы также на глюкозо-кровяной агар. Культуры выращивают в анаэробных условиях. Одновременно проводят биологическое исследование. Кролика заражают подкожно с наружной стороны уха в дозе 0,5—1 мл. Через 2...4сут на месте введения развивается некротический очаг; на 6... 10-е сутки кролик обычно погибает. При вскрытии обнаруживают некротические очаги в мышцах головы, брюшной стенки, сердца, в печени.

Белых мышей заражают бульонной культурой в дозе 0,3...0,5 мл подкожно в области корня хвоста. На 7...8-е сутки в месте инъекции развивается припухлость и нагноение. Мыши погибают на 14-е сутки с явлениями некроза мышц, гнойными очагами в печени, легких, сердце.

Некробактериоз у овец необходимо отличать от копытной гнили, контагиозной эктимы, ящура, оспы, стрептококкового полиартрита ягнят, у крупного рогатого скота – от чумы, вирусной диареи, контагиозной плевропневмонии, злокачественной катаральной горячки, стоматитов и дерматитов неинфекционной природы.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методами световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и патогенным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют трупы мелких животных целиком, от крупных животных — пораженные ткани и кусочки паренхиматозных органов с очагами некроза. Для прижизненной диагностики берут соскобы с участков поражения на границе здоровой и некротизированной ткани.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Возбудитель — неотрицательная, полиморфная бактерия, образующая длинные нити, неподвижная, без спор и капсул. Хорошо окрашивается фуксином Циля, синью Леффлера, а также по методу Муромцева и Романовского—Гимзы.

В мазках-отпечатках из пораженного органа возбудитель об-наруживают в виде грамотрицательных, длинных, иногда переплетающихся, неравномерно окрашенных нитей.

Выделение и идентификация культуры возбудителя, Fusobacterium necroforum — облигатный анаэроб и может расти на обычных для анаэробов средах (среда Китта-Тароцци, бульон Мартена, печеночный бульон Хоттингера, мозговая среда, сывороточный и глюкозо-кровяной агар), при 37...38 0С, pH 7,4...7,6. Исследуемый материал высевают на среду Китта—Тароцци, МПА, в МПБ.

На среде Китта-Тароцци возбудитель через 24...48ч вызывает интенсивное помутнение сначала нижнего слоя, а позднее и всей среды. Газообразование очень слабое, отмечают в первые часы роста. Через 5...8 суток наблюдают просветление бульона с выпадением порошковидного осадка. При высеве на плотные среды рост появляется через 72ч в виде мелких росинок диаметром около 1 мм, через 5сут колонии увеличиваются в размере, становятся хорошо заметными невооруженным глазом, окрашены в серовато-белый или зеленоватый цвет, края колоний ровные или немного зазубренные. На глюкозном агаре с эритроцитами кролика некоторые штаммы образуют зону альфа- или бета-гемолиза. В столбике с сывороточным агаром на четвертые-пятые сутки вырастают чечевицеобразные колонии с нитевидными отростками. В связи с тем что получение чистой культуры на питательных средах затруднительно, ее целесообразно выделять методом биопробы.

У выделенных культур изучают ферментативную активность. Возбудитель образует индол, сероводород, разлагает с образованием кислоты и незначительного количества газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, слабо ферментирует лактозу, не разжижает желатину и свернутую сыворотку, не редуцирует нитраты.

Культивирование. Фузобактерии — облигатные анаэробы Выделение чистой культуры возбудителя из организма сопряжено с трудностями главным образом вследствие частой ассоциации его в кожных поражениях с другими микробами, особенно стрептококками и стафилококками. Легче получить чистую культуру из внутренних органов пораженного животного — печени, селезенки, легких. Из некротической ткани кожи материал берут из участков, граничащих со здоровой тканью (прижизненные соскобы).

Для культивирования бактерий некроза используют среду Китта—Тароцци, бульон Мартена, печеночный бульон Хоттингера, сывороточный и глюкоэо-кровяной агары, полужидкий агар, мозговую среду. Добавление к среде Китта—Тароцци 10...20 % свежей бычьей сыворотки, 0,2...0,5 % глюкозы или дрожжевого экстракт приводит к более интенсивному росту микроорганизма. В среде Китта—Тароцци через 24...48 ч происходит помутнение среды и на кусочках печени образуется хлопьевидный осадок; через 5…8 сут. наступает просветление среды и выпадение крошковатого осадка, разбивающегося при встряхивании в равномерную муть. При посеве в сывороточный агар (столбиком) на 3...4-е сутки появляется рост по уколу, формируются небольшие чечевицеобразные колонии, от которых отходят волокнистые отростки.

На поверхности глюкозо-кровяного агара бактерия растет при создании вакуума до 1,3 кПа, на 2...3-е сутки появляются мелкие круглые или продолговатые росинчатые колонии. Иногда колонии окружены слабой зоной гемолиза. Поверхность колоний гладкая, матовая. В аэробных условиях культура продолжает расти, но колонии становятся непрозрачными, шероховатыми.

Микроорганизм хорошо растет на мозговой среде и при добавлении 0,05 % сернокислого железа. Среда чернеет за счет образования сероводорода.

Биопроба. Одновременно с посевами заражают кролика суспензией из исследуемого материала с физиологическим раствором, которую вводят в объеме 0,5... 1 мл под кожу средней трети наружной поверхности уха. Для заражения можно использовать суточную бульонную культуру возбудителя в тех же объемах. Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 10 дней.

При наличии в исследуемом материале г. necrophorum у кролика через 3...4дня на месте инъекции развивается некроз. Из очага некроза делают мазки и окрашивают одним из методов. Пробу считают положительной при обнаружении в мазках зернистоокрашенных грамотрицательных нитей возбудителя некробактериоза.

Устойчивость. Возбудитель некробактериоза — относительно нестойкий микроб, но длительное время сохраняет жизнеспособность в объектах окружающей среды.

При воздействии прямых солнечных лучей погибает через 12 в замороженном состоянии бактерии выживают 30...40 сут. При нагревании до 65 "С они гибнут в течение 15 мин, при 70 С — через Юмин, при кипячении — мгновенно; 5%-е растворы гидроксида натрия или калия убивают их через 10 мин, 2.5%-й раствор креолина — через 20, 5%-й лизол — через 9, 2%-й фенол убивает через 2 мин.

Фузобактерии способны продолжительное время сохраняться и размножаться в слежавшемся навозе, на это указывает частота заболеваний при нахождении животных в обильно унавоженных местах.

Патогенность. В естественных условиях некробактериозом болеют лошади, крупный рогатый скот, буйволы, олени, овцы, козы, свиньи, собаки, кошки, куры, гуси, а также дикие животные — косули, лоси, архары, антилопы, ламы, зебры, бегемоты, бобры, сурки, суслики. К некробактериозу восприимчив и человек. Из лабораторных животных особо чувствительны кролики и белые мыши. В форме тяжелых эпизоотий и энзоотий с высокой смертностью некробактериоз наблюдают у оленей, крупного рогатого скота, овец, свиней.

Естественным резервуаром возбудителя в природе служит желудочно-кишечный тракт здоровых животных. В окружающую среду бактерии выделяются со слюной, жвачкой, мочой, фекалиями больных. Заражение происходит по типу раневой инфекции через поврежденную кожу или слизистые оболочки. Возбудитель передается через почву, подстилку, корма, предметы ухода за животными. Возможен и аутогенный путь заражения.

Заражению и распространению болезни способствуют травмы конечностей, а также содержание животных в грязных и сырых помещениях. Болезнь может возникнуть и как вторичная инфекция при ящуре. У оленей болезнь распространяется летом, что совпадает с лётом кровососущих насекомых, реже осенью; в холодное и дождливое лето пораженность снижается.

Патогенез. На месте проникновения возбудителя может возникнуть патологический процесс при наличии благоприятных условий для размножения возбудителя, а именно глубокое повреждение тканей, при котором не происходит их аэрация. Первоначально в очаге проникновения бактерий образуется небольшая язвочка, затем в воспалительный процесс вовлекаются окружающие ткани, повреждаются стенки сосудов, откладываются обильные массы фибрина, выходит большое количество белка, появляются тромбы; в результате этого наступает омертвление мышц, связок, хрящей, фаланг конечностей. Из первичного некротического очага путем метастаза может мигрировать в легкие, кишечник, печень, селезенку, мозг и другие органы. В зависимости от места локализации патологического процесса развиваются бронхопневмония, плеврит, перитонит, абсцессы, флегмоны и т.д. Даже легкое течение болезни может осложняться развитием смешанной инфекции. Болезнь в таких случаях приобретает злокачественный характер. Благоприятный процесс характеризуется прекращением дальнейшего развития патологического процесса, первичный некротический очаг инкапсулируется, и животное выздоравливает.

Биопрепараты. «Нековак» — ассоциированная вакцина против немюбактериоза конечностей крупного рогатого скота. Двухкомпонентная вакцина «Нековак» с иммуностимулятором ГМДП (глюкозаминилмурамилпептид).