- •Методические указания к лабораторному практикуму по дисциплине «Общая биология и микробиология» для студентов направления 240700.62 «Биотехнология»
- •Введение
- •Правила работы при выполнении микробиологического практикума. Техника безопасности в микробиологической лаборатории.
- •1 Устройство микроскопа. Препараты для микроскопирования.
- •1.1 Микроскоп. Основные правила микроскопирования.
- •1.2 Приготовление препаратов для микроскопирования.
- •2 Питательные среды и их стерилизация. Техника посевов микроорганизмов. Выделение чистых культур.
- •2.1 Питательные среды. Стерилизация питательных сред и посуды
- •2.2 Техника посева и пересева культур микроорганизмов
- •2.3 Выделение чистых культур микроорганизмов.
- •3 Культуральные и морфологические признаки микроорганизмов.
- •5 Бактерии
- •5.1 Культуральные признаки бактерий
- •5.2 Выявление морфологических признаков бактерий путем окрашивания.
- •6 Определение количества клеток микроорганизмов высевом на плотные питательные среды (метод Коха).
- •7 Актиномицеты.
- •7.1 Культуральные и морфологические признаки актиномицетов.
- •7.2 Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
- •8 Грибы.
- •8.1 Культуральные признаки и морфологические признаки грибов
- •9 Определение размеров клеток.
- •10 Дрожжи.
- •10.1 Культуральные и морфологические признаки дрожжей.
- •10.2 Изучение псевдомицелиальной структуры дрожжей.
- •10.3 Определение сбраживающей способности дрожжей.
- •10.4 Количественный учёт микроорганизмов с помощью счётных камер.
- •11 Микробиологические методы исследования воздуха и пищевых продуктов.
- •11.1 Микробиологические методы исследования воздуха производственных помещений.
- •11.2 Микробиологические методы исследования пищевых продуктов.
- •11.2.1 Определение количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (кмафАнМ).
- •11.2.2 Определение бактерий группы кишечной палочки (бгкп).
- •11.2.3 Определение количества дрожжей и плесеней.
2.2 Техника посева и пересева культур микроорганизмов
Посев – внесение инокулята (части исследуемого материала) в стерильную питательную среду, пересев – перенос части выращенной на питательной среде культуры микроорганизма на другую, свежую стерильную среду.
Посев (пересев) микроорганизмов проводят при соблюдении правил стерильности, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами и не загрязнять окружающую среду исследуемыми культурами микроорганизмов.
Пересев микроорганизмов, выращенных на твёрдой среде в пробирках, в другие пробирки с плотной средой. Посевы петлей на скошенную агаризованную среду производят: зигзагообразным штрихом, начиная со дна косяка где есть конденсационная вода, скользя петлёй по поверхности плотной среды от одного края пробирки к другому; прямой чертой, для чего проводят петлёй прямую линию снизу вверх посередине поверхности питательной среды; сплошным посевом, распределяя материал круговыми движениями по всей поверхности среды. При посеве и пересеве необходимо соблюдать следующие приёмы:
В левую руку берут две пробирки – одну со стерильной средой, другую – с культурой и держат в наклонном положении. В правой руке большим и указательным пальцем держат бактериальную петлю и стерилизуют в пламени горелки.
2. Вынимают ватные пробки из обеих пробирок, прижимают их к ладони мизинцем и безымянным пальцами правой руки и обжигают края пробирок. Следят за тем, чтобы пробки не касались посторонних предметов.
3. Петлю вводят в пробирку с пересеваемой микробной культурой. Осторожно, не касаясь стенок, отбирают каплю жидкой культуры. Если производят пересев со скошенной питательной среды, то для охлаждения петли вначале следует прикоснуться к поверхности ПС или внутренней стенки пробирки, где нет культуры, после чего берут небольшое количество микробной массы с плотной среды на кольцо петли.
4. Вводят петлю с материалом в пробирку со стерильной жидкой средой, стараясь не задевать стенок пробирки. При посеве на скошенные питательные среды петлю с клетками микроорганизмов опускают почти до дна, где скапливается небольшое количество конденсационной воды. Слегка касаясь кольцом петли поверхности плотной среды, проводят от дна вверх штрих.
Петлю вынимают, обжигают края пробирок и внутренние концы пробок, после чего пробирки закрывают.
Петлю вновь прокаливают в пламени горелки и ставят в штатив или стакан вверх кольцом петли.
На пробирке делают надпись: название культуры и дату посева.
Пересев культур микроорганизмов в жидкую среду. Пересев в жидкую среду можно производить петлей или пипеткой. Обе пробирки держат в слегка наклонном положении, чтобы не замочить ватные пробки. Петлей или пипеткой отбирают материал из пробирки с выросшей культурой и переносят в пробирку со стерильной средой. При внесении клеток, взятых петлей из плотной среды, материал тщательно растирают по стенке пробирки у верхнего края жидкой стерильной среды, все время, смывая его средой. Засеянные пробирки закрывают, подписывают, датируют и ставят на инкубирование.
Пересев на плотные среды в чашки Петри. Пересев в чашки Петри проводится глубинным и поверхностным способами.
Поверхностный способ посева: плотную стерильную питательную среду расплавляют на кипящей водяной бане и, соблюдая правила стерильности, разливают ровным слоем толщиной 3-5 мм в стерильные чашки Петри. Оставляют до полного застывания среды. На поверхность среды вносят инокулят и стеклянным шпателем равномерно распределяют его по поверхности (посев газоном) или петлей в виде параллельных или зигзагообразных штрихов.
Глубинный способ посева: на дно стерильной чашки Петри вносят петлей или пипеткой определённый объём посевного материала. Обжигают края пробирки или колбы в пламени горелки и заливают расплавленной охлаждённой агаризованной питательной средой, соблюдая правила асептики. Распределяют равномерно посевной материал в питательной среде, для чего круговыми движениями перемещают чашку Петри по поверхности стола. Оставляют до полного застывания.
Посев уколом на плотные среды. Такой посев производят в пробирки с нескошенной агаризованной питательной средой. При посеве пробирки держат вверх дном.
Все посевы, выполненные описанными способами, подписывают, помещают в термостат перевёрнутыми вверх дном (для посевов в чашки Петри) для выращивания микроорганизмов при температуре, благоприятной для их роста.