- •Методические указания к лабораторному практикуму по дисциплине «Общая биология и микробиология» для студентов направления 240700.62 «Биотехнология»
- •Введение
- •Правила работы при выполнении микробиологического практикума. Техника безопасности в микробиологической лаборатории.
- •1 Устройство микроскопа. Препараты для микроскопирования.
- •1.1 Микроскоп. Основные правила микроскопирования.
- •1.2 Приготовление препаратов для микроскопирования.
- •2 Питательные среды и их стерилизация. Техника посевов микроорганизмов. Выделение чистых культур.
- •2.1 Питательные среды. Стерилизация питательных сред и посуды
- •2.2 Техника посева и пересева культур микроорганизмов
- •2.3 Выделение чистых культур микроорганизмов.
- •3 Культуральные и морфологические признаки микроорганизмов.
- •5 Бактерии
- •5.1 Культуральные признаки бактерий
- •5.2 Выявление морфологических признаков бактерий путем окрашивания.
- •6 Определение количества клеток микроорганизмов высевом на плотные питательные среды (метод Коха).
- •7 Актиномицеты.
- •7.1 Культуральные и морфологические признаки актиномицетов.
- •7.2 Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
- •8 Грибы.
- •8.1 Культуральные признаки и морфологические признаки грибов
- •9 Определение размеров клеток.
- •10 Дрожжи.
- •10.1 Культуральные и морфологические признаки дрожжей.
- •10.2 Изучение псевдомицелиальной структуры дрожжей.
- •10.3 Определение сбраживающей способности дрожжей.
- •10.4 Количественный учёт микроорганизмов с помощью счётных камер.
- •11 Микробиологические методы исследования воздуха и пищевых продуктов.
- •11.1 Микробиологические методы исследования воздуха производственных помещений.
- •11.2 Микробиологические методы исследования пищевых продуктов.
- •11.2.1 Определение количества мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (кмафАнМ).
- •11.2.2 Определение бактерий группы кишечной палочки (бгкп).
- •11.2.3 Определение количества дрожжей и плесеней.
1.2 Приготовление препаратов для микроскопирования.
Для рассматривания микроорганизмов в живом состоянии готовят препарат типа «раздавленная капля». На чистое предметное стекло наносится небольшая капля водопроводной воды, дистиллированную воду брать не рекомендуется, так как в ней отсутствует необходимая для микроорганизмов концентрация солей, что может вызвать изменение формы клеток, потерю ими подвижности и т.д. В каплю воды бактериологической петлей, прокаленной в пламени горелки и охлажденной, помещают исследуемый материал. Препарат накрывают покровным стеклом, помещают на предметный столик микроскопа и исследуют в сухой системе. Капля должна тончайшим слоем заполнить все пространство между покровным и предметным стеклом, но не выступать за края покровного стекла. Излишек выступившей жидкости удаляют фильтровальной бумагой. Препарат «раздавленная капля» быстро готовится, и позволяет установить форму клеток микроорганизмов, их размеры, способ спорообразования, а также наличие или отсутствие подвижности. В качестве недостатка препарата следует отметить его недолговечность.
При исследовании бактерий и дрожжей, выращенных на плотной среде, небольшая масса их берется бактериологической петлей, прокаленной в пламени горелки и охлажденной, и тщательно размешивается в капле воды, нанесенной на предметное стекло.
При исследовании грибов из культур берут небольшой «комочек» мицелия с помощью бактериологической петли в виде буквы «Г» (на конце) и помещают в каплю ПАВ (или воды) на предметном стекле. Затем мицелий осторожно расправляют препаровальной иглой, стремясь как можно лучше разъединить нити и накрывают покровным стеклом.
Если исследуемые организмы (бактерии, дрожжи) находятся в жидкой среде, то на предметное стекло наносят каплю микробной суспензии без добавления при этом воды или другой жидкости. Суспензию берут бактериологической петлей.
Фиксированный препарат используют при окрашивании. Бактериологической петлей на поверхности предметного стекла делают мазок, подсушивают на воздухе и фиксируют в пламени горелки. В фиксированном препарате клетки мертвые, они значительно лучше воспринимают краситель по сравнению с живыми формами.
Препарат «висячая капля» используют для наблюдения за подвижностью микроорганизмов, их развитием, размножением, прорастанием спор. Для приготовления препарата небольшую каплю суспензии микроорганизма наносят на покровное стекло, переворачивают его каплей вниз и помещают на специальное предметное стекло с углублением в центре. Края лунки предварительно смазывают вазелином.
Препарат отпечаток используют для знакомства с формой спор и мицелия актиномицетов и грибов. Чистое покровное стекло накладывают на газон микроорганизма, слегка надавливают на него пинцетом и снимают, стараясь не сдвинуть в сторону. Полученный препарат помещают отпечатком вниз в каплю воды на предметное стекло и рассматривают под микроскопом в сухой системе. Этот препарат удобен для изучения естественного расположения клеток в колониях микроорганизмов.
Задание:
1. Ознакомиться с устройством светового микроскопа.
2. Приготовить препарат макрообъекта и промикроскопировать его с сухими объективами. Зарисовать.
3. Приготовить препарат "раздавленная капля" дрожжевой культуры, промикроскопировать с объективами 8х, 40х и зарисовать отдельные клетки.
4. Подготовить ватно-марлевые пробки для пробирок и колб в количестве, указанном преподавателем.