8.1 Культуральные признаки и морфологические признаки грибов

Культуральные признаки.

Культуральные признаки грибов изучают по характеру роста на плотных ПС типа Сабуро. На плотные среды в чашки Петри мицелий грибов или споры (конидии) высеваю уколом в три точки по треугольнику.

На плотных средах мицелиальные грибы образуют округлые или широко распространенные по поверхности, не врастающие в субстрат, пушистые, нитевидные, паутинообразные, ватоподобные или мучнистоподобные колонии. Вегетативный мицелий большинства видов не окрашен. Пигментирован только плодоносящий мицелий. Поэтому молодые колонии белые или сероватые. По мере развития органов плодоношения колонии приобретают окраску - желтую, розовую, бежевую, красную, зеленую, черную и т.п.

Морфологические признаки.

Приготовление препаратов грибов для микроскопирования производят двумя простерилизованными в пламени горелки и затем охлажденными препаровальными иглами. Отбирают небольшой кусочек мицелия вместе с плодоносящими гифами и прилегающим к нему тонким слоем ПС. Переносят его на хорошо обезжиренное предметное стекло в каплю жидкости. Не нарушая структуры мицелия, расправляют гифы иглами, после чего накрывают покровным стеклом. Препарат рассматривают с сухими объективами 8^х, затем 40^х. Также возможно изучение на препарате раздавленная капля, а так как мицелий грибов гидрофобный и плохо смачивается водой, используют раствор ПАВ - твин-80 в воде.

Задание:

1. Описать культуральные признаки грибов (по росту на плотной ПС в чашке Петри, на скошенной ПС в пробирке), посеянных на предыдущем занятии. Результаты оформить в виде таблицы (табл. 1).

2. Изучить морфологические признаки грибов, приготовив препарат «раздавленная капля».

9 Определение размеров клеток.

Размеры микробных клеток варьируют в широких пределах: от сотых долей микрометров (1 мкм = 1·10^-3 мм) у некоторых бактерий до нескольких десятков и сотен микрометров у микроскопических простейших и водорослей.

Определение размеров клеток осуществляют с помощью винтового окуляр-микрометра, в котором имеется перекрестие и биштрих, перемещающийся вдоль шкалы с помощью градуированного барабана (рис. 7, 8).

Рис. 7 Шкала винтового окуляр-микрометра Рис. 8 Винтовой окуляр-микрометр

Для проведения измерений препарат помещают на предметный столик. Изображение объекта совмещают со шкалой окуляр-микрометра. Определяют размеры объекта, отсчитывая результаты измерений на барабане. Чтобы результаты были достоверными, измеряют обычно не менее 10-20 клеток. У кокков измеряют диаметр, у других форм – длину и поперечник.

Для измерения размеров объекта необходимо предварительно опреде­лить поправку на оптическую систему микроскопа – β. Определение ведется с помощью объект-микрометра, представляющего собой металлическую пластинку с отверстием в центре, в которое вставлено стекло. На стекло нанесена линейка длиной 1 мм, одно деление которой соответствует 0,01 мм или 10 мкм (микрон) (рис. 10).

Рис. 9 Объективный микрометр

Рис. 10 Определение цены деления

Для определения цены деления окулярной линейки на столик микроскопа вместо препарата помещают объект-микрометр (рис. 9) и определяют скольким делениям объект-микрометра соответствует определенное количество делений окуляр-микрометра. После этого определяют β по следующей формуле:

β = (t_к - t_н)/(n · 0,01)

где β –поправка на оптическую систему микроскопа, t_к и t_н – конечное и начальное значения измеряемой величины, n – количество делений объект-микрометра (10, 15, 20 и т. д.), 0,01 – цена деления объект-микрометр.

Для сухих объективов 8^х и 40^х значение β находится в пределах 9,45-9,60 и 46,5-47,0 соответственно.

Зная β, измеренные параметры изучаемого объекта (t_к и t_н), истинные размеры объекта определяют по формуле:

N = ((t_к - t_н)/β) · 1000,

где N –истинные размеры клетки, мкм, t_к и t_н – конечное и начальное значения измеряемой величины, β – поправка на оптическую систему микроскопа, 1000 – коэффициент перевода мм в мкм.

Задание:

1. Ознакомиться с устройством и работой окуляр-микрометра и объект-микрометра.

2. Для данного микроскопа, используя эти приборы, определить поправку на оптическую систему – β для сухих объективов 8^х и 40^х.

3. Определить характерные размеры изучаемой грибной культуры (диаметр гиф, спор и т.п.).