Кафедра ветеринарной медицины Б.В. Уша, Т.С. Елизарова, С.Э. Жавнис, Г.М. Крюковская

ЛАБОРАТОРНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЧИ

Клиническое исследование животного не всегда дает полное представление о характере его заболевания. Во многих случаях необходимо всестороннее клинико-лабораторное изучение выделений больного животного, в частности мочи. Исследованию мочи придают большое значение, так как в ней в ряде случаев быстрее, чем в крови, можно установить патологические сдвиги при заболеваниях развивающихся не только в почках и мочевыволяших путях, но и болезней желудка и поджелудочной железы, печени.

В настоящее время уродиагностика занимает одно из ведущих мест в клинической ветеринарии. Своевременно проведенные исследования мочи способствуют ранней диагностики ряда заболеваний, а также повышают эффективность проводимых лечебно-профилактических мероприятий. Все это особенно важно, когда речь идет о племенных и продуктивных животных, а также животных, поставленных на откорм для мясной промышленности,

Рекомендуется исследовать мочу у каждого больного животного, так как в ней могут быть обнаружены изменения, свойственные патологическому состоянию, даже в том случае, если отсутствуют выраженные клинические симптомы. Однако не всегда требуется проводить полный анализ мочи. Во многих случаях достаточно определить, нет ли в составе мочи тех или иных отклонений от нормы, а в осадке - форменных элементов крови, эпителия, цилиндров. Во всех случаях характер и объем исследований зависит от показаний и типичных симптомов патологического состояния организма. Таким образом, методы уроднагностики должны быть широко рекомендованы как для повседневной клинической работы, так и при диспансеризации животных. В предлагаемом пособии систематизированы методы лабораторного исследования мочи, применяемые в клинико-диагностических лабораториях, дается краткая интерпретация результатов качественных исследований и приводятся количественные критерии оценки получаемых результатов.

МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ХРАНЕНИЯ МОЧИ

Точность лабораторных исследований во многом зависит от того, каким способом, когда взята и доставлена в диагностическую лабораторию моча. Последняя должна быть собрана аккуратно, чисто, без посторонних примесей. Перед получением мочи необходимо провести туалет наружных половых органов у животного.

Дня обычных клинических целей достаточно разовой порции мочи в количестве 100-200 мл. Лучше исследовать утреннюю концентрированную мочу, выделенную больным животным натощак, так как она накапливается ночью, когда животное в меньшей степени подвергается воздействию внешних факторов, влияющих ив качественный и количественный состав ночи. При некоторых заболеваниях требуется сбор мочи за 6, 12 часов, а иногда и целые сутки. Исследование суточного количества мочи позволяет получить полное представление о функциональном состоянии почек, так как отдельные порции мочи в течение дня имеют неодинаковую относительную плотность, кислотность и химический состав. Например, в дневной моче труднее выявить небольшую протеинурию, так как эритроциты и цилиндры быстро растворяются.

Объективная оценка изменений мочи при ее анализе во многом зависит от методов получения. Для исследования мочу у животных получают следующими способами:

• при естественном акте мочеиспускания мочу набирают в чистый широкогорлый сосуд;

• путем массажа мочевого пузыря (у мелких животных наружно, у крупных животных ректально),

• непосредственно из мочевого пузыря путем катетеризации. Противопоказанием для взятия мочи катетером является гнойное воспаление мочеиспускательного канала и пустой мочевой пузырь. У быков, баранов, хряков в связи с сигмообразным изгибом пениса катетеризация затруднена.

• мочу за сутки у крупных животных собирают мочеприемниками, у мелких - в специальных клетках.

Кроме того, у коров и кобыл можно вызвать акт мочеиспускания путем раздражения устья уретры и массированием срамных губ, промежности, у овец и коз - зажимая носовые отверстия на 20-30 с. У быков отделение мочи можно ускорить, если к отверстию препуция приложить и подержать 30-40 с ватный тампон, смоченный теплой водой. У лошадей наступление акта мочеиспускания можно вызвать путем создания слабого шума (пересыпание овса).

Следует помнить, что чем меньше отрезок времени между взятием и исследованием мочи, тем точнее анализ. Лучше всего исследовать мочу не позднее 1,5 часа с момента взятия пробы. Длительное ее стояние ведет к изменению физических (темнеет вследствие окисления фенола) и химических свойств: сдвиг рН мочи в щелочную сторону (по мере бактериального разложения мочевины до аммиака); окисление билирубина и уробилиногена; размножение бактерий, грибов и потребление ими глюкозы; разрушение элементов осадка мочи (лейкоцитов, цилиндров, преципитация кристаллов).

При низкой относительной плотности мочи (меньше 1,010) рекомендуется проводить микроскопию непосредственно после ее сбора, так как при стоянии лейкоциты и гиалиновые цилиндры быстро растворяются. Если невозможно быстрое исследование мочи, то ее можно хранить в закрытой посуде в холодильнике (+4°С), заморозить или подвергнуть консервации. Замораживание усиливает процесс клеточного распада, но сохраняет большинство химических соединений (кроме азота, мочевины, антидиуретического гормона и адреналина). Можно консервировать мочу тимолом (1-2 кристаллика на 200-250 мл мочи), водным раствором хлороформа (1-2 капли, из расчета 5,0-7,5 мл хлороформа на 1 л воды), формальдегидом (1-2 капли 40%-ного раствора на 25 мл мочи), 1%-ной борной кислотой (5-8 капель на 200-250 мл мочи). При консервации антибиотиком его разводят и добавляют в мочу из расчета 50-100 тыс.ед. на 100 мл мочи. Наиболее часто применяют консервацию толуолом (покрывают гонким слоем поверхность мочи). Однако следует помнить, что толуол влияет на количественное определение кетонов (ацетона) вследствие пониженной растворимости ацетона в толуоле. Хлороформ растворяет жиры, элементы крови и цилиндры, затрудняет определение сахара. Тимол затрудняет определение белка (с азотной и сульфасалициловой кислотой, реактивом Экстона). Формальдегид делает невозможным проведение большой части химических исследований, но хорошо сохраняет органический осадок. Консервации не подлежит моча, предназначенная для бактериологического исследования. Мочу доставляют в лабораторию вместе с направлением, где необходимо указать: на что исследовать и какой консервант использовали.

Для удобства в работе сначала определяют физические свойства мочи, затем проводят ее химическое исследование и после этого производят микроскопическое исследование осадка. Полученные результаты заносят в специальный бланк (приложение).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФИЗИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

При исследовании физических свойств мочи определяют суточное ее количество, цвет, прозрачность, консистенцию, запах и относительную плотность. Следует указать на простоту и доступность проведения этих исследований и большую информационную ценность результатов для оценки состояния животных. Показатели физических свойств мочи у клинически здоровых животных приведены в таблице 1. Все эти свойства находятся в прямой зависимости от количества и состава корма, внешней температуры, приема воды, физической нагрузки, функции потовых желез, состояния сердца, кишечника, секреторной активности почек.

Количество мочи, выделяемой за сутки животным, устанавливают путем измерения каждой отдельной порции градуированной мензуркой или цилиндром. Из-за того что трудно собрать у животных полностью всю мочу, в клинических условиях можно пользоваться более простым и менее трудоемким методом. Метод заключается в том, что подсчитывается число мочеиспусканий за сутки и умножается на среднее количество мочи, выделяемое за один акт мочеиспускания.

В различных физиологических и патологических условиях могут наступать различные изменения в отделении мочи. Полиурия - увеличение суточного количества мочи. Она связана с усилением почечного кровотока (при скармливании большого количества сочных кормов, содержании в рационе малого количества белка, солей, даче мочегонных препаратов, гдюкокортикоидов, в период выздоровления после лихорадочных состояний, нервном возбуждении, рассасывании отеков, экссудатов, транссудатов, диабете, поражении паренхимы почек, пиометре). При полиурии лошади могут выделять в течение нескольких дней 30-60 л мочи в сутки. Олигурия - уменьшение суточного количества мочи (при недостатке питьевой воды, сильном потоотделении, поносах, рвоте, образовании отеков, транссудатов и экссудатов, заболевании почек и сердца, непроходимость мочеточников, кровопотерях, отравлении солями тяжелых металлов, сульфаниламидами, аминогликозидами). Поллакиурия (поллакизурия) - частое мочеиспускание, при котором общее количество мочи не увеличивается (циститы, простатиты, вагиниты, уролитиаз). Олигакиурия (олигокизурия) - выделение мочи через продолжительные отрезки времени. Анурия - полное прекращение выделения мочи (при нарушении почечного кровотока вследствие обезвоживания организма, закупорке мочевых путей, перитоните, отравлении солями тяжелых металлов). Ишурия - задержка выделения мочи, когда больное животное не в состоянии опорожнить мочевой пузырь. Энурез - непроизвольное мочеиспускание (хронический цистит, уролитиаз, поражение крестцового отдела позвоночника, мозжечка, аномалии предверия влагалища, врожденная гипоплазия мочевого пузыря и уретры, ожирение кастрированных животных). Никтурия - преобладание ночного диуреза над дневным (у старых больных животных с нарушениями функции почек и сердца). У здоровых животных соотношение дневного и ночного диуреза 3:1. Дизурия - учащенное затрудненное болезненное мочеиспускание (цистит, уретрит, простатит, вагинит, уролитиаз). Странгурия - болезненное мочеиспускание. Тенезм - болезненные позывы.

Цвет мочи зависит от ее относительной плотности, степени насыщенности, наличия пигментов (урохром А и Б, урохромаген, уробилиноген, копрофирин, уроэритрин, гематопорфирин, уророзеин и другие), характера корма. У здоровых животных моча от светло-желтого до светло-коричневого цвета, с различными оттенками (таблица 1). Изменение окраски может быть обусловлено присутствием в моче крови, гемоглобина, желчных пигментов, жира и веществ, введенных в организм с диагностической или терапевтической целью. Лучше всего определять цвет в цилиндре (толщина столба не более 5 см) при дневном свете на белом фоне. По цвету мочу следует различать:

• желтую с оттенками: бледно-желтую, светло-желтую, темно-желтую;

• красную с оттенками: красно-желтую, темно-красную;

• бурую с оттенками: буро-красную, темно-бурую, черно-бурую.

Бледно-желтая (иногда бесцветная) моча с низким удельным весом характерна для полиурии (диабет, нефросклероз, кетоз, гилопротеинемия). Концентрированная моча с высоким удельным весом и более темным оттенком - обычное явление при олигурии (сильное потоотделение, лихорадка). Окрашивание мочи с оттенками шафранно-желтым, коричнево-желтым или буро-зеленым указывает на наличие заболеваний, связанных с желтухами, а также при усилении процессов гниения белков в кишечнике. В последнем случае в моче появляется повышенное количество индоксилсерных кислот, которые могут разлагаться с образованием индиго. Желтое окрашивание мочи становится более заметным при взбалтывании ее в цилиндре, где образуется много пены ярко-желтого цвета. Моча с оттенком желтого цвета наблюдается при лептоспирозе, энцефаломиелите, отравлениях, связанных с поражением печени.

Примеси гноя придают моче серо-белый цвет, что имеет место при воспалительных процессах в каком-либо участке мочеполовой системы или прилегающих органов (цистит, пиелонефрит, вагинит). Молочно- белый цвет мочи является признаком липурии (жировое перерождение и распад почечной ткани) и хилурии (лимфостаз почек). Моча в первом случае содержит огромное количество жировых капелек и жировых цилиндров.

Моча красного цвета с различными оттенками обусловлена примесью крови (при гематурии), растворимыми в ней пигментами: гемоглобином и метгемоглобином (при гемоглобинурии) или кормами (свекла).

Гематурия - симптом многих заболеваний организма с нарушением функции почек, почечной лоханки, мочеточников, мочевого пузыря и мочеиспускательного канала. Визуально примесь крови в моче можно определить, если концентрация эритроцитов в ней составляет более 25000 в 1 мкл. Моча в этом случае красная, в осадке сгустки крови, эритроциты, надосадочная жидкость просветляется. Такое состояние называется макрогематурией. Если примесь крови не вызывает окрашивания мочи, то говорят о микрогематурии. Ее чаще находят при микроскопии осадка мочи. Различают три формы макроскопической гематурии: инициальную (начальную), когда кровь выделяется только с первой порцией мочи (при кровотечении из уретры), а остальная моча окрашена нормально; терминальную, когда кровь появляется лишь в конце акта мочеиспускания (при кровотечении из мочевого пузыря); тотальную, когда вся моча окрашена кровью. Гемоглобинурия возникает: в результате усиленного гемолиза эритроцитов в кровяном русле, вследствие которого развивается гемоглобинемия. При повышении почечного порога в отношении гемоглобина начинается выделение его с мочой. При гемоглобинурии моча прозрачная, осадок состоит из пигментных цилиндров и зерен гематоидина, при центрифугировании и фильтрации окрашивание мочи не изменяется. Пользуясь этими простыми тестами можно точно дифференцировать гематурию от гемоглобинурии, что безусловно имеет большое значение в практике лечащего врача.

Окраска мочи меняется и при введении в организм различных лекарственных средств:

• красный, красно-коричневый цвет - при даче антипирина, амидопирина, фенотиазина, сульфаниламидных препаратов, фенолфталеина, алоэ (у травоядных), сантонина (при щелочной реакции мочи), карболовой кислоты, анилиновых красителей,

• розовый цвет - при введении ацетилсалициловой кислоты, фуросемида;

• темно-бурый или черный - при даче салола, нафтола, фенисалицилата,

• темной до темно-зеленый - при даче фенола, дегтя, крезола;

• зеленовато-желтый, желто-коричневый, коричневый - при даче эозина, рибофлавина, сантонина (при кислой реакции мочи), пикриновой кислоты, хлорохина, ревеня, александрийского листа;

• синий - при даче метиленового синего, трипанблау, индигокармина.

Следует помнить, что моча одного и того же цвета может быть при различных заболеваниях.

Прозрачность мочи определяется в стеклянном цилиндре диаметром 5 см при дневном свете по степени читаемости печатного текста. Придерживаются одного из следующих определений мутности:

• слабая, умеренная, большая;

• прозрачная, непрозрачная, мутная;

• полная, неполная, мутноватая, мутная.

Свежевыпущенная моча здоровых животных чистая, прозрачная и без осадка, за исключением мочи однокопытных (таблица 1). Моча лошади мутная, вследствие нахождения в ней во взвешенном состоянии углекислого кальция, нерастворимых фосфатов, слизи (при дифференциальной диагностике мочу просветляют добавлением соляной кислоты). Поэтому обнаружение у лошадей светлой, прозрачной и без осадков мочи показатель наличия патологического процесса (при полиурии, гастроэнтерите, пневмонии, паралитической гемоглобинурии, сибирской язве). Мутная моча у других видов животных указывает на патологию в мочевыделительной системе и при исследовании осадка обычно содержит соли (мочекислые, фосфорнокислые и углекислые), эпителиальные клетки, слизь, капельки жира, форменные элементы крови. Дифференцировать причину помутнения необходимо химически и зависит от количества и качества корма, функции почек, потовых желез, деятельности кишечника, сердца, органов дыхания (таблица I).

Запах мочи своеобразен для различных видов животных и зависит от концентрации в ней летучих жирных кислот (таблица 1). Чем концентрированнее моча, тем сильнее выражен ее характерный запах. Водянистая моча при полиурии почти совсем лишена запаха. Определяют запах свежей мочи. Если запах неощутим, необходимо сосуд с мочой встряхнуть или часть мочи слегка подогреть.

Различают следующие патологические запахи мочи: гнилостный (гнойно-некротические процессы в мочевом пузыре), аммиачный (аммиачное брожение в мочевом пузыре, длительное хранение пробы на воздухе), ацетона (кетоз, родильный парез, сахарный диабет), фруктовый (кетоз, диабетическая кома, листериоз), сладковатый запах хлороформа (аскаридоз). Запах мочи зависит от принятых внутрь лекарственных веществ, которые из организма выделяются вместе с мочой. Ментол придает моче запах мяты, скипидар и бальзамы - запах фиалок, камфора, фенол, эфирные масла, валериана сохраняют свой специфический запах.

Консистенция мочи определяется путем капельного переливания ее из сосуда в сосуд. Она может быть жидкой, водянистой, слизистой (сиропообразной). Жидкой консистенции моча считается, когда капли мочи круглые, быстро обрываются. Капля, вытягивающаяся или тянущаяся в виде нитей, характеризует слизистую консистенцию.

Таблица 1.

Свойства мочи у клинически здоровых животных

(по Б.В. Уша, И.М. Белякову, 2008,2013)

Показатели	Вид животных
	Лошадь	Крупный рогатый скот	Свинья	Собака 1
Частота мочеиспускания	5-8	5-10	3-4	3-4 1
Суточное количество, л	3-6 (макси­мум 10)	6-12 ^максимум 25)	2-4 (максимум 1 6)	крупные: 1 3,5-2 Средние: 0,4-1 Мелкие: 0,02- ОД
Цвет	Светло- желтый, светло-бурый	Светло- желтый	Светло- желтый, бесцветный	Светло- желтый до янтар­ного
Прозрачность	Мутная	Прозрачная
Консистенция	Слизис­тая	Жидкая (водянистая)			Жидкая
Запах	Резкий, прелого сена, яблок	Слабый специфический (затхлый)	Резкий неприятный	Чеснока, мясного отвара
Относительная плотность	1,025- 1,050	1,025-1,045	1,018-1,025	1,020- 1,050
Реакция	Щелочная, редко амфотерная				Кислая
Неорганизован-ные осадки	Осадок обильный	Осадок скудный			Осадок незначительный
	Щавелевокислый, углекислый сернокислый кальций, гиппуровая кислота				Щавелевокислый кальций, триппельфосфат и мочевая кислота (только у собак)

У всех видов домашних животных, кроме однокопытных, моча жидкая и водянистая. У лошадей моча слизистая, тягучая вследствие примеси муцина и нуклеоальбумина. Густая, слизистая, сиропообразная моча у остальных видов животных - патологическое явление, что укатывает на воспаление органов мочевыделительной системы.

Относительная плотность мочи (ОПМ) зависит от растворенных в ней минеральных веществ. Колебания ОПМ у здоровых животных зависит от количества и качества корма, функции почек, потовых желез, деятельности кишечника, сердца, органов дыхания (таблица 1). Определение ОПМ в клинико-лабораторной практике производится при помощи урометра (ареометра), рефрактометра (Uricon-N), диагностических полосок (фирмы "Майлз", "Берингер Манхайм", "Лахема") в зависимости от объема пробы.

Мочу наливают в цилиндр; опускают урометр, чтобы он свободно в ней плавал. Показания шкалы снимают на уровне нижнего мениска (если образовалась пена, ее снимают с помощью фильтровальной бумаги). После работы урометры обмывают водой, дезинфицируют и высушивают, хранят их в картонных футлярах. Существует два вида урометров - один дня мочи с более низким удельным весом (1,000-1,025); другой - для мочи с более высоким удельным весом (1,025-1,050). В настоящее время имеются универсальные урометры с делениями шкалы от 1,000 до 1,050. Показания урометров рассчитаны на температуру 15-20 С. Если температура мочи выше температуры, указанной на урометре, то на каждые лишние 3^оС к четвертому знаку показания урометра прибавляют единицу, если ниже - вычитают. При протеинурии и глюкозурии ОПМ увеличивается, поэтому вносят поправку: на каждый 0,1 г/л (1 %) сахара показатель ОПМ уменьшают на 0,004, а на каждые 0,3 г/л (3 %) белка - на 0,001.

При небольшом количестве мочи ее разводят дистиллированной водой в 2- 3 раза, определяют ОПМ и последние две цифры умножают на степень разведения. При наличии нескольких капель мочи ОПМ определяют по методу Тола, Санфорда и Уэлльса. В цилиндр наливают смесь из равных частей хлороформа, бензола и опускают каплю исследуемой мочи. Погружение капли на дно свидетельствует, что ОПМ выше относительной плотности смеси реактивов. Если капля остается на поверхности - ниже. Прибавлением хлороформа (если капля идет ко дну) или бензола (если капля на поверхности) регулируют относительную плотность смеси, так чтобы капля остановилась в середине жидкости. В этом случае ОПМ равна относительной плотности смеси, которую определяют с помощью урометра.

ОПМ можно определять методом рефрактометрии, который является довольно точным, но дорогим методом. Его преимущество заключается в том, что для него требуется только 1-2 капли мочи. Для получения точных значений рекомендуется исследовать пробу мочи при комнатной температуре и центрифугировать ее, чтобы удалить из мочи светодифракционный суспнедированный в ней осадок. ОПМ фильтрованной пробы разнится не более на 1-2 единицы в последней цифре четырехзначного числа.

Показатель ОПМ можно использовать для определения функциональной способности почек. По Шлейеру, если при двухчасовом наблюдении ОПМ колеблется в широких пределах, то это свидетельствует о хорошем функциональном состоянии почек. Напротив, постоянно низкая (изостенурия) или высокая ОПМ при всех измерениях в течение 2 часов свидетельствует о серьезной патологии почек.

Для определения в моче количества растворенных твердых веществ умножают две последние цифры показателя ОПМ на коэффициент Лонга (2,66) или Хасцера (2,33), Пример: суточное количество мочи -6 л, относительная плотность - 1,025; 25x2,33=58,25 г твердых тел в 1 л, а в суточном количестве - 58,25x6=349,5 г.

Понижение ОПМ указывает на недостаточную способность почек концентрировать мочу и отмечается при полиурии (ацетонемия, нефриты, нефросклероз, несахарный диабет). Повышение ОПМ характерно для сахарного диабета, нефроза, инфекционных и лихорадочных заболеваний, сопровождающихся олигурией, диареей, рвотой, потением.

ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЧИ

При химическом исследовании мочи чаще всего ограничиваются определением рН, белка, глюкозы, кетоновых тел, кровяных пигментов, индикана, желчных кислот и пигментов. Ценность химического анализа заключается в том, что с его помощью можно обнаруживать соединения, которые поступают в мочу при определенных патологических процессах. Все эти химические исследования следует всегда оценивать только в комплексе с другими исследованиями и во взаимосвязи с клиническими симптомами болезни. Следует иметь в виду, что в настоящее время с целью проведения быстрого химического исследования мочи выпускаются специальные диагностические бумажные тесты, позволяющие моментально выполнить полуколичественный анализ. Несмотря на простоту выполнения анализа возможны определенные погрешности, поэтому в случае положительной или сомнительной реакции необходимо проводить количественное определение данного показателя в моче с помощью реактивов.

Реакция мочи у животных зависит от их вида, корма и функционального состояния организма (таблица 1). Моча травоядных животных щелочная, которая обусловливается растительным кормом. Соли органических кислот или оснований, сгорая в процессе обмена до углекислого газа, являются главным источником образования щелочнореагирующих продуктов. Моча плотоядных кислой реакции, она зависит от скопления кислых соединений в результате окисления серы, фосфора, белков корма. По характеру кислотность мочи делят на потенциальную (титруемую) и истинную (активную). Потенциальная кислотность зависит от общего содержания кислот в моче независимо от степени их диссоциации, то есть способности отдавать в раствор водородные ионы. Истинная кислотность мочи зависит от концентрации водородных ионов и состоит в связи со степенью диссоциации кислот находящихся в моче.

Концентрация водородных ионов обозначается водородным показателем рН. Данный показатель определяют в свежевыпущенной моче, так как при стоянии выделяется углекислота, и рН смещается в щелочную сторону. Исследование реакции мочи проводят с помощью жидких индикаторов по Андрееву (индикатор бромтимоловый синий, диапазон рН=6,0-7,6) и по Магаршаку (индикаторная смесь растворов нейтрального красного и метиленового синего, диапазон рН=6,2-7,8), индикаторной бумагой ("Рифан" (Россия), универсальная "РКС" (Россия), "Нонофан" (Чехия), "Мультистикс" (Австрия), "Комбур-тест" (Германия), "Биофан-З" (Германия); диапазон рН= 1,0-10,0). При необходимости более точного определения рН мочи прибегают к методам: электрометрическому (на рН- метре), титрационному, колориметрическому (с использованием набора индикаторов и компаратора Михаэлиса).

Кислая моча наблюдается при голодании, кетозах, колитах, пневмониях и других заболеваниях, протекающих с лихорадкой. Щелочная реакция свежевыпущенной мочи плотоядных и всеядных указывает на распад тканей мочевых органов вследствие новообразований и на воспаление мочевого пузыря в результате брожения мочи (цистит, пиелит). При ацидозе в моче может увеличиваться количество хлоридов, уменьшаться - натрия и калия, при алкалозе - наоборот. Поэтому информативность определения рН мочи повышается в совокупности с результатами других лабораторных и клинических показателей, а также при сопоставлении рН мочи и крови (таблица 2).

Таблица 2

Соотношение рН мочи и крови при патологии

(по В.Т. Морозовой, И .И. Мироновой и др., 1996)

Реакция мочи	Реакция крови	Патология
Кислая	Кислая	Диабет, лихорадочные состояния, голодание, почечная недостаточность, лейкоз, туберкулез почек
Щелочная	Щелочная	Циститы, пиелиты, гематурия, рвота, понос, рассасывание экссудатов, транссудатов
Щелочная	Кислая	Гиперхлоремический ацидоз, почечный тубулярный ацидоз, хронические инфекции мочевых путей
Кислая	Щелочная	Гипокалемическое состояние

Таким образом, определение рН мочи может иметь значение при дифференциальной диагностике алкалоза от ацидоза разной этиологии. Реакцию мочи всегда следует учитывать при проведении химических, микроскопических и бактериологических исследований мочи.

Определение в моче белка

Определение в моче белка основано на осаждении его физическими и химическими средствами. Обязательным условием анализа является предварительное фильтрование и подкисление щелочной мочи. С целью определения белка в моче пользуются качественными и количественными методами. В экспериментальной работе для дифференциации белков, выделяемых мочой, используют методы фракционирования их с помощью электрофореза, ультрацентрифугирования или хроматографирования.

Из качественных методов используют пробы кипячением с уксусной кислотой, Роша-Вильяма (реактив: 20 %-ная сульфосалициловая кислота), Геллера (реактив: 50 %-ная азотная кислота), Ларионовой (реактив: насыщенный раствор натрия хлорида, азотная или соляная кислота), Бедеккера (реактив: смесь 10 %-ных растворов уксусной кислота и железосинеродистого калия), Танрета (реактив: сулема и йодистый калий). Количественное определение белка в моче проводится после установления его наличия в моче с помощью качественных проб. В клинической практике количественное определение белка в моче проводится калориметрическим методом с сульфосалициловой кислотой, биуретовым методом (реактив: сульфат меди, щелочь), методом Бранберга-Робертса-Стольникова (реактив: 50 %-ная азотная кислота или реактив Ларионовой), Бредфорда (реактив: раствор Кумаси <3-250, ортофосфорная кислота, этиловый спирт), Эсбаха (реактив: пикриновая и лимонная кислота, дистиллированная вода; альбуминометр), Ауфрехта (центрифужный, реактив тот же).

У здорового животного основная масса белков мочи задерживается гломерулярным фильтром, поэтому считается, что в моче белка нет. В физиологических условиях прохождение белков через клубочковый фильтр определяется размером лор базальной мембраны, молекулярной массой белка, формой и электрическим зарядом его молекул, зависимостью между концентрацией белка в плазме и фильтрате. Белки, пропущенные в клубочковый фильтрат, почти полностью реабсорбируются канальцевым эпителием. Приблизительно 70 % белков мочи здорового животного приходится на долю уромукоида - белка, являющегося продуктом почечной ткани. Таким образом, доля гломерулярного белка в моче здоровых животных является ничтожно малой.

Протеинурия - выделение белка с мочой в концентрациях, при которых лабораторные пробы на белок становятся положительными. В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лег переходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например, при лихорадке и выраженной интоксикации Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г - умеренную, 1-3 г - среднюю и более 3 г - выраженную. Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, ренальную (почечная, истинная), постренальную (внепочечная, ложная).

Преренальная протеинурия развивается при высокой плазматической концентрации низкомолекулярного белка, который фильтруется нормальными клубочками в количестве, превышающем физиологическую способность канальцев к реабсорбции (усиленный распад белка тканей гемолиз эритроцитов).

Ренальная протеинурия может быть органической и функциональной. Органическая протеинурия возникает при поражении нефрона. В зависимости от преимущественного механизма возникновения можно выделить определенные типы органической протеинурии.

Клубочковая (гломерулярная) - обусловлена повреждением гломерулярного фильтра, в результате нарушается фильтрация и диффузия в клубочках. Она наблюдается при всех заболеваниях почек, протекающих с поражением клубочков (гломерулонефрит, амилоидоз, нефросклероз, опухоль и киста почек), при этом из крови в мочу в большом количестве фильтруются плазматические белки. Может быть селективной и неселективной в зависимости от тяжести повреждения гломерулярного фильтра.

Канальцевая протеинурия связана с неспособностью канальцев реабсорбировать плазменные низкомолекулярные белки, прошедшие через неизмененный гломерулярный фильтр. Наблюдается при приобретенных и наследственных поражениях проксимальных почечных канальцев (острый канальцевый некроз, интерстициальный нефрит).

Нефрогенная протеинурия характеризуется появлением в моче белков, происходящих из почечной паренхимы. Она не выделяется как отдельный вид, так как часто сочетается с клубочковой или канальцевой протеинурией, а минимально выраженная обнаруживается у здоровых животных (уромукоид Тамм-Хорсфолла и другие почечные гликопротеиды). Однако обнаружение нефрогенной протеинурии иногда имеет патогенетическое значение. Так, при уролитиазе с гиперфункцией паращитовидных желез в моче выявляется аномальный почечный гликопротеид, образующий «ядро» конкрементов; при нефротоксичном действии многих лекарств в моче появляется мембранный гликопротеин - белок щеточной каймы эпителия проксимальных канальцев. Механизм образования цилиндров также связан с нефрогенной протеинурией.

Функциональная протеинурия протекает без каких-либо клинических признаков, свидетельствующих о патологии почек (алиментарная, рабочая, застойная, лихорадочная, токсическая). Появление белка отмечается не во всех порциях мочи, чаще его находят в дневной моче. Протеинурия носит умеренный и чаше переходящий характер, и, как правило, не сопровождается другими патологическими изменениями в осадке мочи.

Постренальная протеинурия связана с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловлена воспалительной экссудацией (пиелонефрит, цистит, простатит, пиометра). В данном случае протеинурия носит умеренный, часто переходящий характер.

Отличить истинную протеинурию от ложной можно с помощью центрифугирования и исследования мочевого осадка. Легкая форма протеинурии и большой осадок свидетельствуют о ложной протеинурии, большое количество белка и небольшой осадок указывают на заболевание почек. Присутствие гиалиновых цилиндров подтверждает ренальное происхождение протеинурии.

Важное прогностическое значение имеет определение селективности протеинурии методом электрофореза, которое помогает уточнить тяжесть повреждения клубочков. В зависимости от целостности базальной мембраны и ее способность пропускать в мочу белок различают селективную и неселективную протеинурию. Селективная протеинурия встречается при минимальном поражении гломерулярного фильтра, представлена белками небольшой молекулярной массой (альбумины, трансферрин, церулоплазмия). Неселективная протеинурия чаще встречается при более тяжелом повреждении фильтра, отличается повышением клиренса средне- и высокомолекулярных плазматических белков (в составе мочи преобладают 1,2-макроглобулин, В2-липопротеин, V-глобулины) и увеличением клиренса отрицательно заряженных белков.

Диагностическое значение имеет обнаружение в моче альбумоз (продукты распада белков), которые не встречаются у здоровых животных. Альбумозурию отмечают при различных заболеваниях, сопровождающихся усиленным распадом ткани (гангрена, плеврит, перитонит, абсцесс, рак), после инъекции животным различных сывороток, туберкулина. Для определения альбумоз пользуются биуретовой реакцией и пробой с сульфосалициловой кислотой.

Для лучшей оценки степени протеинурии определяют соотношение белка мочи (г/л) к креатинину мочи (г/л). Креатинин выводится почками пропорционально весу тела и скорости гломерулярной фильтрации. Если принять содержание креатинина за постоянную величину, то концентрация белков в моче на единицу креатинина мочи может использоваться для количественной оценки протеинурии. Если полученное соотношение не превышает 0,5-0,6, то это свидетельствует о хорошем функциональном состоянии почек. Значение от 1 до 5 указывает на возможную преренальную протеинурию с поражением клубочкового аппарата, поэтому необходимо провести исследование белковых фракций мочи методом электрофореза. Колебания показателя в диапазоне от 5 до 13 свидетельствует о гломерулярной природе поражения, более 13 - указывает на развитие амилоидом почки.

Оценку протеинурии следует проводить с учетом клинических симптомов (отеки) и остальных лабораторных показателей (уровень белка в плазме крови, соотношение альбумина и глобулина, содержание мочевины, креатинина, липидов в сыворотке крови).

Качественные методы определения белка в моче

Непременным условием при проведении исследований на белок является абсолютная прозрачность мочи. Для этого мочу фильтруют. Если мутность не устраняется фильтрованием, то применяют следующие методы удаления мутности в зависимости от причин, ее вызывающих:

Факторы, вызывающие мутность	Методы удаления
Соли	Нагревание. Добавление кислоты или щелочи в зависимости от характера солей.
Клеточные элементы	Фильтрование. Центрифугирование
Бактерии	Бактериальный фильтр
Слизь	Центрифугирование Фильтрование.
Жир	Смешивание с эфиром

Принцип. Способ определения белка в моче основан на коагуляции белка: под действием кипячения или воздействием кислот невидимый в моче белок становится видимым путем опалесценции, мути или белых хлопьев.

Путем кипячения В пробирку наливают4-5 мл исследуемой мочи, затем добавляют равное количество насыщенного раствора хлорида натрия и 4-8 капель 10%-ного раствора уксусной кислоты. В наклонном положении пробирки над спиртовой горелкой верхний слой доводят до кипячения. При положительной реакции в верхнем слое мочи появляется в различной степени (в зависимости о количества белка) муть. Нижний холодный слой остается для контроля.

Проба с сульфосалициловой кислотой Это самая чувствительная из качественных проб. К 5 мл исследуемой мочи добавляют 10 капель 20%- ного раствора сульфосалициловой кислоты. При положительной реакции появляется мутность, тем более выраженная, чем выше содержание белка в моче. Результат обозначают следующим образом: реакция слабоположительная (+), положительная (++), резко положительная (+++).

Определение сахара в моче

Выделение с мочой глюкозы называется глюкозурией. В моче здоровых животных содержатся незначительные следы сахара, они практически не обнаруживаются обычными качественными реакциями на сахар. В моче у животных встречаются виноградный (глюкоза), молочный и фруктовый сахар, а также пентозы, обладающие редуцирующими свойствами, на использовании которых основаны качественные методы определения их в моче. Наибольшее практическое значение в диагностике заболеваний имеет обнаружение глюкозы. Для качественного ее определения используют пробы: Бенедикта (реактив: цитрат натрия, карбонат натрия, сульфат меди, вода), Гайнеса (реактив: сульфат меди, гидроокись натрия, глицерин, вода), Ниляндера (реактив: нитрат висмута, сегнетовая соль, гидроокись натрия), Троммера (гидроокись натрия, сульфат меди), Ворм-Мюллера (реактив: сегнетовая соль, гидроокись калия, сульфат меди). Количественное определение сахара проводят: поляриметрическим методом, колориметрическим методом Альтгаузена (реактив. 10 %-ная гидроокись натрия), цветной реакцией с ортотолуидином, методом Бенедикта, пробой на брожение в сахарометре Эйнгорна и Ласар-Кона. Для идентификации отдельных видов сахаров пользуются хроматографическими методами и энзимными пробами. Существует ряд экспресс-методов обнаружения сахара в моче с применением готовых наборов (таблетки, порошки, индикаторная бумага «Глюкотест»). К этим наборам обычно прилагается описание сущности и правил проведения проб; анализ должен проводиться строго в соответствии с инструкцией.

Моча здоровых животных не содержит глюкозу, так как она, выделяясь с ультрафильтратом мочи, практически полностью реабсорбируется в извитых канальцах первого порядка. Появление глюкозы в моче (глюкозурия) зависит от концентрации ее в крови, процесса фильтрации в клубочках (гломерулярных клиренсов) и реабсорбции ее в канальцах нефрона. Установлено, что увеличение сахара в крови до 16-18 г/л всегда сопровождается выделением его с мочой. У каждого вида животных в крови для сахара существует свой «порог», выше которого при избытке почки начинают пропускать сахар в мочу.

Глюкозурия может быть физиологическая (употребление избыточного количества углеводов, при введении адреналина, волнении, испуге) и патологическая (сахарный диабет, гипо- и гиперсекреция некоторых гормонов (тироксина, АКТГ, глюкокортикостероидов, адреналина), заболевания нервной системы (бешенство, нервная форма чумы собак, длительные судороги, повреждения черепа, воспаления головного и спинного мозга, кровоизлияния в мозг), воздействие токсических веществ (окиси углерода, сулемы, хлороформа, скипидара, хлоралгидрата, адреналина, хромовой кислоты), болезни печени и почек.

Для правильной оценки природы глюкозурии получений результат необходимо сопоставлять с другими результатами анализа мочи я и крови. При высокой относительной плотности мочи, гипергликемии диагностируется сахарный диабет; при средней относительной плотности мочи и нормальном уровне глюкозы в крови - ренальная глюкозурия (дефект канальцев); при низкой относительной плотности мочи, высоком уровне мочевины в крови можно предположить острую почечную недостаточность.

Редукционные методы определения сахара в моче основываются на редукционных свойствах альдегидной группы глюкозы. В качестве окислителя берут какую-либо легко редуцирующуюся соль, дающую при восстановлении окрашенное соединение. К редукционным пробам относятся пробы Фелинга, Тромбера, Ниландера, Гайнеса.

Проба Гайнеса. Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде в гидрат закиси меди (желтого цвета) или в закись меди (красного цвета).

Реактив Гайнеса готовят следующим образом: 1) 13.3 г х ч. кристаллического сульфата меди растворяют в 400 мл воды; 2) 50 г едкого калия растворяют в 400 мл воды. 3) 15 г чистого глицерина разводят в 200 мл воды. Смешивают первый и второй растворы и тотчас приливают третий. Реактив стойкий.

Пробу проводят в следующем порядке: к 3-4 мл готового реактива Гайнеса прибавляют 8-12 капель мочи. Смесь нагревают над пламенем до ее закипание, а затем кипятят в течение 1-2 мин. В присутствии сахара появляются желтая или красная окраска жидкости и осадок, а при отсутствии его синий цвет реактива Гайнеса не изменяется.

Наличие большого количестве белка в моче мешает правильной оценке редукционных проб, поэтому желательно предварительно его удалить, подкислив мочу несколькими каплями уксусной кислоты, нагрев до кипения и отфильтровав.

Определение кетоновых тел

Выделение с мочой большого количества кетоновых тел называется кетонурией. Кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и В-оксимасляная кислота) являются продуктами неполного окисления жиров. При нормальном углеводном обмене В-оксимасляная и ацетоуксусная кислота окисляются почти полностью. При нарушении окисления этих веществ они выделяются с мочой вместе с ацетоном, который образуется из ацетоуксусиой кислоты в результате декарбоксилирования. Кетоновые тела в моче встречаются совместно, поэтому раздельное определение их клинического значения не имеет.

Кетоновые тела, будучи пороговыми для почечного барьера веществами, при их ретенции в крови до 10-15 мг% начинают выделяться с мочой (кетонурия). В небольшом количестве их находят у здоровых животных, но они не обнаруживаются обычными качественными пробами. Кетонурия связана с недостаточной обеспеченностью организма энергией (глюкозой), что бывает при белковом, жировом перекорме, ожирении, недостатке легкоперевариваемых углеводов в рационе, истощении и кахексии (голодные кетозы), нарушениях эндокринной регуляции метаболизма (сахарный диабет), при поражении желез внутренней секреции (гиперкортикоидизм, тиреотоксикоз), диарее, лихорадке, стрессах.

Кетоновые тела в моче встречаются совместно, поэтому раздельного их определения практически не проводят. Для качественного определения кетоновых тел используются нитропруссидные пробы (Лестраде, Ланге, Легаля, Ротзера), основанные на их взаимодействии с натрием нитропруссидом в щелочной среде, а также пробы Либена (реактив: гидроокись калия), Троммера (с салицилальдегидом). Количественные методы определения кетоновых тел в моче основаны на дистилляции кетоновых тел в специальных дистилляционных аппаратах.

Принцип Кетоновые тела в щелочной среде образуют соединения с нитропруссидом натрия, имеющие красную или фиолетовую окраску.

Проба Лестраде Для проведения реакции предварительно готовят реактив: 1 г нитропруссида натрия, 20 г сульфата аммония и 20 г безводного карбоната натрия помещают в ступку и тщательно растирают до получения мелкого однородного порошка; реактив стоек более 1 года; хранят его в тщательно закрытой стеклянной банке.

Ход определения На предметное стекло или на фарфоровую луночку наносят щепотку реактива Лестраде, к которому добавляют 2-3 капли исследуемой мочи. При наличии кетоновых тел наиболее интенсивное вишневое окрашивание наступает в течение 1-3 мин. Окрашивание смеси в красный цвет означает наличие кетоновых тел не менее 10 мг%. При более высоком содержании кетоновых тел окраска становится пурпурно-фиолетовой.

Определение крови и кровяных пигментов в моче

При патологии в моче могут быть обнаружены кровь, кровяные пигменты (гемоглобин и его дериваты, метгемоглобин, сульфгемоглобин, гемосидерин), а также мышечный белок – миоглобин. В моче часто одновременно находят кровь и гемоглобин, поэтому в пробе после оседания форменных элементов надосадочная жидкость остается красной. Если гематурия определяется макроскопически, то специальные исследования на гематурию проводить не обязательно, а при подозрении на микрогематурию проводят химический анализ и микроскопию мочевого цетрифугата. Все химические пробы на гематурию сводятся к обнаружению кровяного пигмента путем гемолиза эритроцитов и освобождения из них гемоглобина, который способен отнимать водород от органических соединений (пирамидон, гваяковая смола, бензидин,

амидопирин, о-толидин, лейкофенолфталеин) и переносить его на перекись водорода с образованием окрашенных или флюоресцирующих соединений.

Качественное определение крови и кровяных пигментов проводится с помощью бензидиновой пробы Адлер-Цитрона, гваяковой пробы Ван-Дена, ортотолидиновой реакции, пирамидоновой пробы Тевенон-Ролланда, фенолфталеиновой пробы Колло, пробы с гидроокисью калия (натрия) Геллера. Миоглобин и гемоглобин - наиболее родственные хромопротеины, поэтому химические реакции на гемоглобин дают положительный результат и на миоглобин. Методы определения миоглобина: радиоиммунный, иммуноферментный, электрофореза с сульфатом аммония. Точную дифференциацию кровяных пигментов в моче можно определить спектроскопией или спектрофотометрией. С целью количественного определения гемоглобина в моче можно воспользоваться методом Сали.

В моче здоровых животных встречаются лишь единичные эритроциты (0-5 эритроцитов в 1 мм), которые могут быть обнаружены микроскопически, химические методы дают отрицательный результат.

Гематурии бывают ренальными (почечными), постренальными (внепочечными) и смешанными. Почечные гематурии отмечаются при застое крови в почках, нефритах, нефрозах, инфаркте почек, тромбозе почечных вен, причем наличие белка в моче свыше 1 г/л и эритроцитов подтверждает ренальное их происхождение. Функциональные почечные гематурии являются следствием увеличения проницаемости почечного фильтра (перегревание, сотрясения, токсикоинфекции, рахит, бронхопневмония, лекарственная гематурия). Постренальные гематурии возникают при воспалении и травмах мочевыводящих путей (пиелит, цистит, мочекаменная болезнь, опухоли). Смешанные гематурии возникают при геморрагических диатезах (гипо- и авитаминоз С, анемия, врожденные дефекты). Ложные гематурии - результат примеси крови из половых органов. Место и причину гематурии можно определять по характеру изменения эритроцитов при микроскопическом исследовании.

Появление в моче свободного гемоглобина (гемоглобинурия) имеет место при гемолизе эритроцитов в кровяном русле - гемоглобинемии. Гемоглобинурия возникает только в тех случаях, когда уровень свободного гемоглобина плазмы превышает резервную гемоглобинсвязывающую емкость гаптоглобина. Интенсивность гемоглобинурии зависит от степени гемоглобинемии, концентрации гаптоглобина в крови и резорбционной способности канальцев почек.

Выделившийся гемоглобин реабсорбируется и окисляется клетками проксимальных отделов почечных канальцев в гемосидерин, ферритин. Нагруженные гемосидерином клетки слущиваются и выявляются в моче. Массивная гемоглобинурия и миоглобинурия, повреждая извитые канальцы, может привести к острой почечной недостаточности.

По происхождению гемоглобинурии подразделяются на симптоматическую, токсическую и параксизмальную. Симптоматическая гемоглобинурия является симптомом таких заболеваний, как ревматическая и энзоотическая гемоглобинурия лошадей, кровопаразитарных болезней (бабезиоз, пироплазмоз, нуталиоз), лентоспироз. Реже гемоглобинурия отмечается при плевропневмонии, гангрене легких, септицемии. Токсическая гемоглобинурия вызывается различными ядами, обладающими гемолитическими свойствами (бертолетовая соль, сулема, фенолы и их производные, мышьяковистый водород, сыворотка крови другого вида животного). Параксизмальная гемоглобинурия характеризуется появлением кровяных пигментов в моче периодически, приступами. В ее основе лежит длительная инфекция (инфекционная анемия и мыт лошадей), а у молочных коров - поение холодной водой. Гемосидеринурия обычно является следствием хронических гемолитических анемий, Эритробластозов, гемохроматозов.

Миоглобинурия наблюдается при тяжелых травмах, электротравмах, отравлении барбитуратами, при кормовых токсикоинфекциях. Миоглобин освобождается в кровь из поврежденной мышечной ткани. Он не окрашивает плазму, не связывается с белками крови и быстро выводится из организма через печень и почки.

Проба Колло. Перед определением в моче пигментов крови заранее готовят реактивы Колло I и Колло II по следующей прописи.

Колло I или спиртовой раствор уксусной кислоты: ледяная уксусная кислота 2 мл + спирт ректификат 96° до 100 мл.

Колло II или щелочной раствор фенолфталеина: фенолфталеин 2 мл + едкий кали 20 г + цинк металлический 10 г + дистиллированная вода 100 мл.

Принцип. Сущность обнаружения кровяных пигментов в моче химическим путем основана на пероксидазном действии гемоглобина

Ход определения Берут в равных объемах (по 2—3 мл) мочу и реактив Колло I, прибавляют 25-30 капель реактива Колло II и 2-3 капли перекиси водорода. Малиновое окрашивание смеси указывает на присутствие в моче гемоглобина. Реакция очень специфична и чувствительна.

Определение желчных пигментов

Из желчных пигментов в моче определяются билирубин и уробилиногеновые тела. Обнаружение желчных пигментов может служить диагностическим тестом при дифференциации паренхиматозной и механической желтухи от гемолитической, при которой возрастает содержание стеркобилиногена и уробилина. Совместное определение билирубина в сыворотке крови и уробилина в моче может дать более верное представление о функциональном состоянии печени животного.

Определение билирубина. В моче здоровых животных желчные пигменты обычными методами лабораторного исследования не устанавливаются. Увеличение выделения билирубина - явление патологическое и называется билирубинурией. Подобное состояние возникает в результате затруднения прохождения желчных пигментов из гепатоцитов в тонкий кишечник. Билирубинурия бывает при двух типах желтухи: паренхиматозной (острые вирусные, токсические, токсико- аллергические гепатиты, цирроз, гиппооксическое состояние) и механической (воспаление, закупорка камнем, опухолью, рубцовой деформацией). При гемолитической желтухе билирубинурия не наблюдается, поскольку с мочой может выделяться только прямой билирубин, непрямой билирубин даже при высоком содержании в крови не может пройти через здоровый почечный фильтр, будучи связан с белками сыворотки крови. Билирубинурия появляется при увеличении содержания прямого билирубина в крови выше 0,01-0,02 г/л («почечный порог билирубина»).

Для качественного определения билирубина используют методы Розина (реактив: йод), Фуше (реактив: трихлоруксусная кислота), Гаррисона-Уатсона-Хавксинсона (модификация пробы Фуше), Готфрида (реактив диазобензосульфоноловая кислота). Они основаны на свойстве билирубина окисляться в биливердин в присутствии окислителей (йод, азотистая, трихлоруксусиая кислоты). В научно-исследовательских целях количественно билирубин определяют методом Йенлрашека-Грофа в модификации Вита (реактив: хлористый кальций, этиловый спирт, диазореактивы, соляная кислота). Существует ряд «сухих» проб на билирубин («икто тест») в виде таблеток, которые могут быть использованы для качественного и полуколичественного определения билирубина в моче

Принцип Большинство качественных проб на билирубин основано на его окислении йодом, азотной кислотой и т.д. в биливердин зеленого цвета.

Проба Гаррисона-Фуше Реактивы 1) 15%-ный раствор хлористого бария: 15 г хлористого бария помещают в цилиндр вместимостью 100 мл, растворяют в 60-70 мл дистиллированной воды и доливают водой до метки; 2) реактив Фуше: 26 г трихлоруксусной кислоты помещают в цилиндр вместимостью 100 мл, растворяют в 60-70 мл дистиллированной воды и доливают водой до метки, вслед за этим приливают 1 г хлорного железа.

Ход определения. В химическую пробирку наливают 10 мл исследуемой мочи (в случае щелочной реакции мочи ее необходимо подкислить несколькими каплями концентрированной уксусной кислоты), прибавляют 5 мл 15%-го раствора хлорида бария. Содержимое пробирки смешивают и фильтруют через бумажный фильтр в другую химическую пробирку. По окончании фильтрации бумажный фильтр снимают с воронки и раскладывают на сухом фильтре, уложенном в чашке Петри. В центр фильтра, где находится осадок хлорида бария, наносят 2-3 капли реактива Фуше, При наличии билирубина появляется пятно, окрашенное в зеленый цвет.

Определение уробилиногеновых (уробилиновых) тел. У здорового животного в свежевыпущенной моче уробилиногеновые тела представлены следами стеркобилиногена, которые не обнаруживаются обычными качественными пробами. Уробилиноген в моче, будучи нестойким соединением, легко окисляется в уробилин, содержание которого в моче достигает 0.5-1,5 мг%. В настоящее время известны 4 уробилиногеновые и 4 уробилиновые фракции. Разграничение их еще не получило широкого практического применения. Групповой характер этих реакций не уменьшает их клинического значения. Уробилиногенурия и уробилинурия имеют одинаковое клиническое значение, то есть речь идет об одних и тех же основных веществах, которые встречаются в двух формах. Увеличение их концентрации в моче может быть при гемолитических состояниях (гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, рассасывание больших кровоизлияний, обширные инфаркты миокарда), болезнях печени (гепатиты, цирроз, отравления), кишечных заболеваниях (непроходимость, энтероколиты) и лихорадочных состояниях, что связано с токсическим поражением печени. Полное отсутствие уробилина указывает на обтурационную желтуху.

Для качественного определения уробилиногеновых тел в моче применяют пробу Нейбауэра (реактив: парадиметиламинобензальдегид), для определения уробилиновых тел - пробы Флоранса (реактив: хлористоводородная кислота), Богомолова (реактив: сульфат меди), Шлезингера (реактив: ацетат цинка), Нейбауэра, Гмелина (реактив азотная или серная кислота). Обычно в лаборатории имеют дело с постоявшей мочой, поэтому практическое значение имеют вторые пробы. Уробилин определяют в первой порции мочи (как наиболее концентрированной).

Принцип реакций Качественные пробы основаны на ускорении окисления уробилиногена путем прибавления окислителя.

Билирубин и гемоглобин препятствуют определению уробилиновых тел, поэтому их предварительно удаляют: к 8 мл мочи добавляют 2 мл 10%-го раствора хлорида кальция и 2 мл 10%-го раствора аммиака. Смесь фильтруют, слабо подкисляют уксусной кислотой и затем производят определение.

Проба Богомолова (проба с сульфатом меди). К 10-15 мл мочи прибавляют 2-3 мл насыщенного раствора сульфата меди. Если появляется помутнение от образовавшейся гидроокиси меди, то прибавляют несколько капель соляной кислоты до просветления раствора. Через 5 мин добавляют 2-3 мл хлороформа и взбалтывают. При наличии уробилиновых тел хлороформ окрашивается в розово-красный цвет.

Определение желчных кислот

Желчные кислоты обладают свойством понижать поверхностное натяжение жидкости. На этом свойстве основана проба Гай-Крафта с серным цветом. Желчные кислоты содержатся в моче при механической или паренхиматозной желтухе. При длительной закупорке желчных протоков количество желчных кислот постепенно уменьшается. При гемолитической желтухе моча желчных кислот не содержит.

Проба Гай-Крафта Кислую мочу нейтрализуют добавлением едкого натра. На поверхность мочи (2—3 мл), налитой в пробирку насыпают немного порошка серного цвета. Если порошок быстро погружается на дно пробирки, то это указывает на наличие в моче более 0.01% желчных кислот. Если порошок не тонет, следовательно, желчные кислоты отсутствуют.

Определение индикана

Индикан является нормальной составной частью мочи домашних животных. В моче здоровых животных индикан обычными качественными реакциями не обнаруживается. Содержание индикана в моче зависит от вида животных и состава кормов. В моче лошадей содержание эфиросерных кислот (индикан, фенолы) может достигать 220 мг/л, крупного рогатого скота - 30 мг/л, кошек, кроликов, собак - 5-20 мг/л. Корма, богатые белками, дают больше индикана в сравнении с кормами, в которых содержание белка незначительно.

Он образуется в результате гнилостных процессов в тонком отделе кишечника и распаде белков тканей организма. Продукты этого расщепления (индол и скатол) ядовиты и окисляются в печени, образуя эфир индоксила и индикан. Значительное увеличение индикана в моче может быть кишечного и тканевого происхождения. В первом случае индикан появляется в моче при заболеваниях, связанных с застоем и разложением кишечного содержимого, особенно при развитии гнилостной микрофлоры в кишечнике (запоры, инвагинация и атония отдельных звеньев кишок, энтерит, перитонит). Во втором случае индиканурия отмечается при аутолитическом распаде тканей (гангрена легкого, распад опухолей, абсцессы, генерализованный туберкулез, гнойный метрит и мастит). Уменьшенное количество индикана обнаруживают в моче животных, больных инфекционным энцефаломиелитом, страдающих диареей различного происхождения.

Определение индикана основано на расщеплении его под влиянием кислот на индоксил и серную кислоту и переходе индоксила под влиянием различных окислителей в синее индиго, которое растворяется в хлороформе. Качественное определение индикана проводят с помощью проб Яффе (реактив: уксуснокислый свинец, соляная кислота, хлороформ, перманганат калия), Обермайера (реактив: уксуснокислый свинец, хлорное железо), цветной осадочной реакцией Кимбаровского (реактив нитрат серебра); количественное определение - реакцией по Розе, по Альтшулеру (реактив Обермайера, трихлоруксусная кислота, тимол, хлороформ)

Принцип Индикан под действием кислоты превращается в индоксил, который окисляется перманганатом калия в синее индиго

Проба Яффе Исследуемую мочу освобождают от белка и фильтруют. В химическую пробирку наливают 5-6 мл профильтрованной мочи и добавляют равный объем концентрированной хлористоводородной кислоты. Приливают 2-3 мл хлороформа. К содержимому пробирки по каплям прибавляют 2 %-ный раствор перманганата калия (избыток перманганата приводит к окислению индиго в изатин желтого цвета).

Пробирку тщательно закрывают пробкой и осторожно смешивают содержимое путем неоднократного (15-20 раз) переворачивая пробирки. Вслед за этим устанавливают пробирку в штатив и через несколько минут учитывают реакцию по окраске слоя хлороформа, находящегося на дне пробирки При наличии индикана хлороформ окрашивается в фиолетовый или синий цвет.

Общий азот мочи и его фракции

Под общим азотом понимают сумму азотсодержащих веществ мочи (азот мочевины, мочевой кислоты, креатина, креатинина, аммонийных солей). Изменения в количественном и качественном составе азота мочи позволяют судить о белковом обмене в организме, функции печени, почек, где образуются азотистые вещества мочи.

У здорового животного 80-90% выделяемого с мочой из организма азота составляет азот мочевины. В норме содержание мочевины в моче меняется в зависимости от состава и количества кормов. Отдельные порции мочи отличаются по содержанию мочевины, поэтому ее определение надо проводить в средней пробе. Количество мочевины в моче обычно повышается при избытке белков в рационе, при всех заболеваниях сопровождающихся усиленным распадом белков тканей (лихорадочные состояния, опухоли, гипертиреоз, диабет), а также даче некоторых лекарственных препаратов (например, гормонов). Патологическое снижение выделения мочевины может быть при тяжелых поражениях печени (печень является основным местом синтеза мочевины в организме), заболеваниях почек (особенно когда нарушается фильтрационная способность ночек), а также применении инсулина.

Креатин и креатинин в моче - нормальные проекты азотистого обмена. Появление избыточного их количества связано с нарушением обмена веществ и ацидозом, отмечается при напряженной мышечной работе. Для оценки интенсивности креатининурии определяют креатининовый коэффициент, то есть выясняют количество креатина и креатинина (в мг) в суточной моче, приходящихся на 1 кг массы тела. Для лошадей он равен 6,8-7,5; собак - 8.4; птиц - 3,4 и увеличивается после тяжелых физических нагрузок. Креатина в моче мало, его увеличение (креатинурия) наблюдают при беременности, у растущих животных, при понижении температуры тела, мясном и углеводном рационе, голодании, поражениях печени, сахарном диабете, эндокринных расстройствах (гипертиреоз). При астении, миозитах, миотониях количество креатина увеличивается, а креатинина - снижается. Исследуют мочу на содержание в ней креатинина часто для выявления функциональной недостаточности почек. Среднее содержание креатинина в моче лошадей составляет 0,0035 %, крупного рогатого скота - 0,009 %, свиней -0,01 % и собак - 0,0087 %.

Мочевая кислота является конечным продуктом обмена пуриновых оснований; ее содержание в моче не превышает 1-3 % всего количества азота мочи и зависит от интенсивности обмена нуклеопротеидов, рациона и активности ксантиноксидазы печени. При усилении распада нуклеопротеидов (лейкопения) содержание ее в моче увеличивается. Повышенное выделение мочевой кислоты наблюдается при лейкемии, полицитемии, гепатитах, подагре, а также даче ацетилсалициловой кислоты и ряда стероидных гормонов.

Аминокислоты, не использованные для синтеза белка и образовавшиеся в результате его расщепления в организме, подвергаются распаду с образованием аммиака, углекислого газа и воды. Часть аммиака выделяется с мочой в виде солей аммония. Основная его часть идет на синтез мочевины в печени, являющейся основным конечным продуктом обмена простых белков. Увеличение аммиака в моче отмечается при циррозе печени, некоторых нарушениях обмена (сахарный диабет, кетоз, рвота, эксикоз, гипокалиемия, гипонатриемия), а уменьшение - при алкалозе, нефритах (при нарушении в почках процессов образования аммиака из глутамина).

В моче здоровых животных содержание аминокислот невелико, так как большая их часть (80 %) перешедших в ультрофильтрат реабсорбнруется в верхней трети проксимальных канальцев. Появление в моче больших количеств аминокислот (аминоацидурия) может быть следствием повышенного содержания их в крови или нарушения реабсорбции в канальцах нефрона.

Для количественного обнаружения общего азота мочи и его фракции применяют следующие методы: для определения общего азота - колориметрический метод с реактивом Несслера, мочевины - метод Бородина (реактив: бромноватистая щелочь), аммиака - диффузным методом по Конвею-Байрну (реактив: щелочь, серная кислота, индикатор Таширо), креатинина - колориметрическим методом Фолина (реактив: щелочь, пикриновая кислота). Из качественных методов применяют: для определения креатинина - пробу Ватля (реактив: нитропруссид натрия, уксусная кислота), пробу Яффе (реактив: гидроокись натрия, пикриновая кислота).

Для дифференциальной диагностики нарушений минерального и водно-электролитного обмена при соответствующих показаниях проводят химическое исследование мочи на содержание кальциевых солей, фосфатов, хлоридов, натрия и калия. Далее приводятся наиболее диагностически значимые показатели.

Определение хлоридов в моче. Хлориды - неорганические составные части нормальной мочи. У здорового животного около 90 % принятых с кормом хлоридов выделяется с мочой. Содержание их в моче колеблется в довольно больших пределах. Эти колебания зависят от содержания хлористого натрия в кормах, воде, состояния нервно-гуморальной регуляции организма, характера и степени эксплуатации животного, нарушения обмена веществ. Выделительная функция почек у здоровых животных настолько велика, что организм в короткое время освобождается от хлористого натрия, поступившего в кровь с кормом.

При голодании и острых лихорадочных заболеваниях количество хлора в моче значительно уменьшается. Падение содержания хлоридов в моче совпадает с нарастанием температуры. С понижением температуры функция почек снова восстанавливается и количество хлоридов в моче резко увеличивается. Уменьшение выделения хлоридов в моче отмечается также при всех заболеваниях, связанных с развитием воспалительных отеков и скоплением в полостях экссудатов (нефриты). Напротив, при всасывании транссудатов и экссудатов после хлороформенного наркоза количество хлоридов в моче резко возрастает. Задержку в организме и уменьшение выделения хлоридов отмечают при острых инфекциях, крупозной пневмонии, иллеусах и рассматривают как неблагоприятный симптом. Полиурию с усиленным выделением хлоридов считают благоприятным признаком.

Количественное определение хлоридов в моче проводят по способу Фольгарда (реактив: серебро азотнокислое, аммоний роданистый, железоаммиачные квасцы, азотная кислота), Мора (реактив: нитрат серебра, хромовокислый калий, уксуснокислый натрий).

Определение кальция в моче. Ионы кальция выводятся через почки в небольшом количестве (около 30 % всего количества), основная же его масса выводится с калом. Практически выделение кальция с мочой всегда повышается, когда его концентрация в сыворотке повышена. Высокое содержание кальция в моче отмечают также при почечной гиперкальциурии, почечнокаменной болезни, наследственных аномалиях почек, избытке оксалатов и кальция в рационе, гиперкальциемических остеопатиях, гипервитаминозе Д, гиперпаратиреоидизме.

Из качественных методов определения кальция используют пробу Сулковича (реактив: щавелевая и уксусная кислоты, аммония оксалат), для количественной оценки - микрометрический метод (реактив: аммиак, уксусная кислота, аммоний щавелевокислый, серная кислота, калия перманганат).

Определение фосфора в моче. Обычно с мочой выводится менее 50% всего количества выделяемых организмом фосфатов. При ацидозе, гиперфункции паращитовидных желез содержание его в моче повышается. Введение в организм витамина Д снижает выделение фосфатов с мочой. Количественное определение фосфора проводят колориметрическим методом (реактив: фосфорнокислый калий, хлороформ, карбоната сульфит, гидрохинон).

Определение активности ферментов мочи. Определение активности ферментов мочи перспективно для диагностики ряда заболеваний, в том числе заболеваний почек. Ферменты мочи могут происходить непосредственно из плазмы крови, попадая туда через гломерулярный фильтр, а также из ткани почек, мочевыводящих путей и половых органов (особенно простаты), клеток крови и микробов.

В настоящее время наиболее часто определяют активность амилазы (диастазы), которая при нормальной работе почек быстро выделяется с мочой. Для исследования используют свежую мочу (не позднее 45 минут после мочеиспускания), так как фермент быстро разрушается. Определяют акивность L-амилазы в моче амидокластическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея). В нормальной моче активность фермента составляет 16-65 единиц. Увеличение активности амилазы до 100 и более единиц отмечают при остром панкреатите, некрозе поджелудочной железы, поражении желчных путей, а также при перитоните, язвенной болезни. Повышение амилазы в моче происходит параллельно увеличению ее в крови. Исключение составляют нефрозы, при них активность амилазы сыворотки крови повышается, а мочи – снижается. Снижение активности амилазы крови и мочи наблюдается при гепатите, дистрофии печени, сахарном диабете, гипотериозе, токсической диспепсии.

Определение активности других ферментов мочи пока не нашло широкого применения (аланинаминопептидаза, щелочная фосфатаза, V- глутамилтранспептидаза. кислая фосфатаза, L- и В-глюкоронидаза, арилсульфатаза, лизоцим, изоферменты лактатдегидрогеназы). Большая часть тестов не отображает истинную картину поражения почек, так как активность всех используемых ферментов в моче на порядок ниже, чем в сыворотке крови, и изменение экскреции ферментов может быть следствием изменений концентрации их в плазме и не всегда является показателем поражения почек. Наибольший интерес при разработке теста для выявления поражения почек представляет фермент L-глюкозидаза, имеющий исключительно почечное происхождение. Кроме того, данный фермент стабилен, методика определения вполне доступна (инкубационная смесь: моча, калий-фосфатный буфер, мальтоза; глюкозу определяют глюкозидазным методом).

Нитратный показатель - это тест на инфицирование мочевого тракта. Кишечная палочка, сальмонелла, протей, некоторые энтерококки, стафилококки и другие патогенные бактерии восстанавливают присутствующие в моче нитраты в нитриты. Два этой цели используют диагностические полоски "Нитри-фан" ("Ляхема"), "Мультистикс" ("Байер"), "Комбур" ("Берингер Манхайм"). При полиурии данный показатель мало информативен, так как не происходит большого накопления бактерий и нитратов.

Определение гноя в моче. Принцип Проба основана на свойстве лейкоцитов при взаимодействии со щелочами образовывать студенистую массу. Осадок мочи в пробирке смешивают с небольшим количеством 20%-го раствора едкого калия. В моче, содержащей гной, появляется прозрачная студенистая масса. Слизь, которую можно спутать с гноем, под действием едкого калия дает хлопья.

Определение скрытой лейкоцитурии проводят экспресс-методом Гадехолта (реактив: краситель диаминофлуорен и флюксии В, этанол, ацетат натрия, уксусная кислота, перекись водорода). Этот метод имеет большое значение при профилактических исследованиях большого поголовья животных.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОСАДКА МОЧИ

Элементы мочевого осадка разделяются на неорганизованные (различные соли) и организованные (эритроциты, лейкоциты, эпителий, цилиндры, бактерии, грибы, слизь).

Микроскопическое исследование мочи проводят с помощью двух основных методов - обычного ориентировочного и количественного методов. Ориентировочный метод довольно часто применяется в клинической практике. Его недостатком является то, что он дает лишь приблизительное представление о содержании отдельных компонентов осадка мочи. Количественные методы позволяют определять количество элементов осадка мочи путем подсчета их в счетных камерах (Горяева, Фукса-Розенталя). Наиболее распространенными являются методы Каковского-Аддиса, Амбурже, Нечипоренко. Однако количественные методы трудоемки и редко используются в клинической практике.

Наряду с ними существуют некоторые специальные методы исследования (морфологическое изучение окрашенных осадков мочи, метод выявления активных лейкоцитов, определение бактериурии). Для дифференциации отдельных элементов, входящих в состав осадка мочи, нативные препараты окрашивают растворами красок: 1%-ными растворами фуксина, генцианвиолета, метиленовой сини, Судана III или IV, азур-эозина, пиронина (RAL ND) - щелочной голубой), Люголя, Лейшмана, Штейрнгеймера-Мальбима, Райта, Testsimpiets; окраской по Граму и Романовскому-Гимзе. Окрашенные препарат исследуют при иммерсионной системе под микроскопом при полном освещении.

Осадок получают с помощью центрифугирования или отстаивания мочи (в конических мензурках со стеклянным краном в нижней части). Моча крупного рогатого скота дает осадок спустя 2-3 часа, моча лошадей через 12-24 часа. В центрифужную пробирку после размешивания наливают 10-15 мл мочи, центрифугируют 5-7 минут при 1500-2000 оборотах в минуту. Надосадочную мочу сливают, опрокидывая пробирку, осадок перемешивают, каплю помешают на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Из каждой пробы мочи должно быть приготовлено по 2-3 препарата. Окрашивание препарата зачастую не требуется. Если осадок состоит из нескольких слоев, то препараты готовят из каждого слоя в отдельности. В приготовленном препарате недопустимы пузырьки воздуха, а жидкость не должна выходить за пределы покровного стекла.

Изучение препарата начинают с малого увеличения (X 100) для общего обзора. При этом легче обнаруживаются цилиндры, скопления эритроцитов и лейкоцитов, крупные кристаллы. Затем для детального изучения препарата с количественной оценкой структур осадка мочи переходят на большое увеличение (X 400). При этом более отчетливо выявляется структура элементов, измененные и фрагментированные эритроциты, лецитиновые зерна. Конденсор при этом опускают и слегка суживают диафрагму. Рассматривают приблизительно по 10-20 полей.

Среднее цифровое выражение найденного количества элементов (например, эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) дают приблизительно, указывая, сколько их в поле зрения. При малом количестве элементов осадка укатывают их число в препарате. Для других элементов (например, эпителиальные клепки, кристаллы) принято давать оценку: «большое», «небольшое», «незначительное» количество.

После центрифугирования оценивают видимый осадок по цвету, компактности. Иногда по внешнему виду осадка можно судить о его характере. Плотные осадки - это осадки солей, причем белый осадок - фосфаты, а розово-красный - ураты, в виде желтого песка - мочевой кислоты. Рыхлые осадки - это осадки форменных элементов: белый - это лейкоциты, а бурый - эритроциты, сливкообразный с зеленым оттенком - гноя, студнеобразный - слизи. Для быстрой ориентации в характере осадка при микроскопическом его изучении С.Л. Эрлих предложил следующую классификацию мочевых осадков:

• Солевой тип. Осадок состоит преимущественно из солей, единичных лейкоцитов и клеток полиморфного эпителия мочевого пузыря и многослойного плоского эпителия влагалища. Белка нет.

• Десквамативный тип мочевого осадка характеризуется значительным количеством плоского эпителия наружных половых органов, мочевого пузыря без элементов воспаления (эритроцитов, лейкоцитов) и при отсутствии белка. При раке мочевого пузыря встречаются эпителиальные клетки различной формы, размеров, с наличием вакуолей, больших ядер и ядрышек; эритроциты и лейкоциты отсутствуют.

• Катаральный тип. Здесь преобладают элементы катарального воспаления - значительное количество спущенного эпителия, лейкоциты, слизь. Лейкоциты лежат чаще всего скоплениями, перемешиваясь с эпителием вагины, уретры, простаты, матки, в слизистых нитях. Белок чаше бывает в виде следов, а иногда вообще отсутствует.

• Гнойный тип характерен для нагноительного процесса в мочеполовом тракте. Часто имеет макроскопически видимый гнойный осадок. Микроскопически лейкоциты покрывают все поля зрения. Количество белка больше, чем при катаральном осадке, но оно не коррелирует с числом лейкоцитов, а зависит от количества экссудата, примешанного к моче. Большое количество белка бывает при гнойном воспалении почек и лоханок. Воспалительные явления в других отделах мочеполового тракта протекают с меньшим количеством белка. Эпителия обычно бывает мало или он отсутствует в связи с гибелью покровного эпителия при гнойных процессах.

• Геморрагический тип характеризуется наличием большого количества эритроцитов. Макроскопически осадок бурый, однородный, часто с кровяными сгустками разных размеров. При микроскопическом исследовании осадка обнаруживаются эритроциты и буро окрашенные волокна фибрина. Подобный тип осадка характерен для геморрагического нефрита, камней мочевого тракта, туберкулеза, новообразований.

• Почечный тип. Для него характерно наличие белка в моче, цилиндров и почечного эпителия. Количество белка варьирует от следов с единичными цилиндрами и почечным эпителием в осадке до нескольких процентов с большим количеством разных цилиндров и почечного эпителия.

• Некротический тип. При данном типе осадка имеется наличие некротических элементов: эластические волокна, свидетельствующие о некрозе ткани (абсцесс, туберкулез, новообразования); казеозный распад, иногда с гигантскими многоядерными клетками (элементы распада туберкулезного бугорка); кристаллы гематоидина, образующиеся в некротических очагах с кровоизлияниями. Иногда мелкие некротические очаги содержат волокнистую или фибриноидную основу, бывают пронизаны микробами.

I.Организованный (органический) осадок

Эпителиальные клетки в моче имеют различное происхождение, то есть десквамация их происходит с органов, покрытых различными видами эпителия (многослойного плоского, переходного и цилиндрического). Отдельные клетки плоского эпителия мочевого пузыря и эпителия влагалища бывают в моче здоровых животных. При патологических состояниях создаются условия для более обильной десквамации эпителия, в связи с чем его количество в моче увеличивается. При этом могут изменяться физико-химические свойства мочи, в результате чего эпителий подвергается дегенеративным изменениям и теряет свой нормальный вид - разбухает, приобретает зернистость, в нем появляются капельки жира.

В связи с большим полиморфизмом эпителиальных клеток бывает трудно точно определить место их слущивания. Ориентировочно разграничивают эпителий мочевых канальцев и эпителий мочевыводящего тракта. Однако эпителий мочевых канальцев очень похож на эпителий глубоких слоев мочевого пузыря, и с уверенностью можно говорить о клетках почечного эпителия только в том случае, если одновременно с ними имеются белок и цилиндры, встречающиеся при остром и хроническом поражении почек.

Почечный эпителий (эпителий мочевых канальцев) по величине чуть больше лейкоцитов (в 1,5-2 раза), неправильной округлой и многоугольной формы; окрашен мочевыми пигментами в светло-желтый, желтый или коричнево-желтый цвет. Ядро по отношению к размеру всей клетки крупное, круглое; клетки относятся к кубическому (цилиндрическому) эпителию (рис.1). Клетки почечного эпителия легко подвергаются белковой (зернистой) или жировой (липоидной) дистрофии. Тогда их протоплазма становится зернистой или содержит капельки жира, сильно преломляющие свет. В результате этих изменений ядра могут не выявляться. В нативных препаратах клетки располагаются группами, цепочками. Клетки почечного эпителия в моче здоровых животных не обнаруживаются, а появляются только при тяжелых поражениях почек (амилоидно-липоидный нефроз, некронефроз).

Эпителий почечных лоханок и мочеточника (трехслойный, плоский, переходный). Клетки полиморфные по величине (в 3-6 раз больше лейкоцитов) и форме (округлые, цилиндрические, "хвостатые"), окрашены мочевыми пигментами в более или менее интенсивный желтый цвет (рис. 2, 3). Поверхностные клетки больше по размерам, продолговатой, клинообразной формы, с круглым ядром. Клетки среднего слоя несколько меньшего размера. При тяжелых поражениях в моче обнаруживаются мелкие, овальные, иногда хвостатые цилиндрические и призматические клетки глубоких слоев. В связи с тем, что эпителий лоханок и мочеточника морфологически похож на эпителий мочевого пузыря, необходимо при микроскопии учитывать реакцию мочи и количество белка. При пиелите и пиелонефрите протеинурия больше, чем при цистите, реакция мочи - более кислая.

Эпителий мочевого пузыря (многослойный, плоский, полиморфный). Клетки в 3-5 раз больше лейкоцитов, бесцветные, с маленькими, пикнотическими ядрами (1-2), располагаются в препаратах пластами или отдельными экземплярами. Единичные клетки обнаруживаются в моче здорового животного, а в большом количестве - при цистите. При более тяжелых поражениях в моче появляются веретенообразные, хвостатые и даже небольшие овальные или грушевидные клетки с небольшим компактным ядром из глубоких слоев слизистой оболочки мочевого пузыря.

Эпителий влагалища и слизистой оболочки наружных половых органов также относится к типу многослойного плоского эпителия. Это большие клетки (в 3-5 раз больше лейкоцитов), многоугольной формы, резко контурированные, с центрально расположенным ядром. Лежат они чаше в виде скоплений (рис. 4). Единичные эпителиальные клетки встречаются у здоровых животных. При вагинитах, заболеваниях родовых путей, бурно протекающей течке с истечениями в большом количестве выделяются клетки Аллена (ороговевшие, чешуйчатые, без ядра), отслоившиеся от слизистой оболочки влагалища.

Рис. 1 Эпителиальные клетки почек лошади	Рис. 2 Эпителиальные клетки почечной лоханки лошади
Рис. 3 Эпителиа-льные клетки мочетоника	Рис. 4 Эпителий влагалища

Железистый эпителий (эпителий простаты) узкий, цилиндрический, с большим круглым или овальным ядром. Клетки иногда имеют отростки, часто соединены в группы. Многие клетки имеют у основания полоску кровяного пигмента. Эпителий часто подвергается жировой дистрофии, при этом он становится круглым, с каплевидными жировыми включениями. Обычно вместе с эпителиальными клешами простаты встречаются лецитиновые зерна, слоистые тельца (окрашиваются раствором Люголя в сине-фиолетовый цвет), сперматозоиды, при простатитах - значительное количество лейкоцитов.

Атипичные эпителиальные клетки свидетельствуют о вероятности раковой опухоли. Основным свойством злокачественных клеток является клеточный и тканевой атипизм их строения, который характеризуется изменением и разнообразием величины и формы клеточных элементов (увеличение ядра, несколько ядер расположенных эксцентрично с множеством ядрышек, вакуолизация цитоплазмы). В большинстве случаев клетки расположены группами, тяжами (рис. 5, 6).

Лейкоциты - бесцветные мелкозернистые клетки круглой формы, 10 нм, ядра их часто не видны; представлены обычно нейтрофилами. Дифференциацию лейкоцитов проводят в окрашенных препаратах мочи ("мочевая лейкоцитарная формула"). При аллергических заболеваниях в моче обнаруживают эозинофилы, отличающиеся равномерной, преломляющей свет зернистостью. В зависимости от реакции мочи лейкоциты имеют различный вид. В кислой моче они зернистые, круглые, ядро их состоит из нескольких долей. В моче с низкой относительной плотностью, щелочной реакцией нейтрофилы увеличиваются в размерах, ядер часто не видно, а грануляция цитоплазмы ясно выделяется. В резко щелочной моче они разрушаются. Когда лейкоциты находятся в состоянии распада, то по морфологическим признакам похожи на клетки почечного эпителия. Дифференциация проводится люголевским раствором, в результате лейкоциты окрашиваются в бурый цвет за счет имеющегося в них гликогена, а эпителиальные клетки - в светло-желтый. От эритроцитов они отличаются отсутствием двойного контура и выраженной зернистостью.

Рис. 5 Атипичные эпителиальные клетки Рис. 6 Гигантские опухолевые клетки с большим ядром и жировым перерождением

В нормальной моче в поле зрения встречаются единичные лейкоциты (0-2). Выделение лейкоцитов с мочой выше нормы - явление патологическое и называется (от 5-6 до 20 лейкоцитов в поле зрения) или пиурией (60-100 лейкоцитов в поле зрения), тогда моча становится гнойной. Важно бывает определить место происхождения пиурии. При циститах отмечают большой, тягучий вязкий гнойный осадок, моча щелочной реакции, содержит триппельфосфаты, микробы и резко перерожденные лейкоциты. Гной почечного происхождения дает рыхлый осадок, реакция мочи кислая. Наряду с большим количеством лейкоцитов имеются овальные и хвостатые клетки лоханочного эпителия. При поражении почек лейкоцитов обычно меньше.

Для выявления степени пиурии и выявления скрытой лейкоцитурии производится количественный подсчет лейкоцитов в счетных камерах. Эритроциты несколько меньше лейкоцитов, имеют дискообразную форму с центральным углублением и двойным контуром, гомогенно окрашены в характерный желто-зеленый цвет. Ядра и зернистость в цитоплазме отсутствуют. Характер изменения эритроцитов зависит от реакции и концентрации мочи, давности кровотечения и времени их пребывания в моче. В слабокислой и нейтральной моче (рН=6,5-7,5) эритроциты довольно долго сохраняются в неизмененном виде. Быстрая потеря гемоглобина происходит при высокой, низкой относительной плотности мочи или резко кислой ее реакции.

Эритроциты становятся мелкими с зазубренными краями. В щелочной моче они разбухают, теряют центральное углубление и становятся резко очерченными.

В моче здоровых животных можно обнаружить единичные эритроциты (от 0 до 2, но не в каждом поле зрения). Нахождение их в каждом поле зрения (более 5 эритроцитов с увеличением микроскопа х 400) - явление патологическое. Появление большого количества эритроцитов в осадке мочи называют гематурией, что указывает на кровотечение в мочевых путях. Для определения места кровотечения необходимо учитывать наличие и характер эпителиальных клеток, количества белка в моче, количество эритроцитов.

При микроскопии осадка мочи эритроциты следует дифференцировать от лейкоцитов, грибов (дрожжевые клетки овальной формы, голубоватого цвета, резко преломляют свет), кристаллов оксалата кальция (овоидной формы). К осадку мочи добавляют 3%-ную уксусную кислоту, эритроциты гемолизируются, а ядра лейкоцитов выступают ярче, оксалаты и дрожжевые клетки не изменяются. При окрашивании препарата азур-эозином эритроциты приобретают розовато-сиреневый цвет, дрожжевые клетки - черный. Оксалаты растворяются полностью при добавлении к осадку капли концентрированной соляной кислоты.

Цилиндры - это продолговатые образования, прямые или изогнутые, с тупыми, закругленными или обломанными концами. Величина их варьирует. Присутствие их менее пяти в поле зрения с малым увеличением (х 100) рассматривается как физиологическая норма. Чаще всего цилиндры обнаруживают при заболевании почечной паренхимы. Однако нет прямой зависимости между выраженностью цилиндрурии и тяжестью почечного процесса. Различают истинные и ложные цилиндры. К истинным цилиндрам относят чисто белковые (гиалиновые, восковидные) и клеточные (эпителиальные, лейкоцитарные, эритроцитарные).

Белковую основу цилиндров составляет уропротеин Тамм-Хорсфолла (Т-Х); его содержание в цилиндрах в 50 раз превышает содержание альбумина. Белок Т-Х продуцируется эпителием дистальных почечных канальцев, покрывает их наружную мембрану и, как считают, участвует в реабсорбции воды и солей. Большое количество альбумина, гемоглобина, миоглобина, избыток ионов кальция в первичной моче, уменьшение почечного кровотока способствует агрегации белка Т-Х что приводит к образованию цилиндров. Нет соответствия между количеством белка в моче и количеством цилиндров в осадке. Это объясняется тем, что белок, составляющий основу цилиндров, не во всякой моче свертывается. При резко кислой реакции в моче почти не остается растворимого белка, но имеется много цилиндров. В щелочной моче цилиндры образуются редко и быстро в ней растворяются. Белок, попавший в канальцы, свертывается, принимая форму канальцев почек, после чего выделяется в моче (истинный белковый цилиндр). Пока белковые слепки находятся в канальцах почек или в мочевых путях, к ним могут прилипнуть дополнительно различные элементы; почему и получается несколько видов цилиндров. Эти изменения вторичного порядка, и поэтому все виды цилиндров имеют одно н то же клиническое значение, являясь верным признаком органического заболевания почек (нефриты, нефрозы, нефросклерозы).

Гиалиновые цилиндры имеют нежную гомогенную структуру, почти прозрачные, клейкие, вследствие чего к их поверхности нередко прилипают клетки почечного эпителия, лейкоцитов, эритроцитов или соли. Они довольно нестойкие образования: быстро разрушаются в резко щелочной и кислой моче (при гниении и аммиачном брожении), резком встряхивании и переливании мочи. Для облегчения их нахождения следует затемнять поле зрения, опуская конденсор и сужая диафрагму микроскопа, или подкрасить препарат (метиленовый синий, йод, фуксин, пикриновая кислота). Эти цилиндры выявляются уже при умеренной протеинурии (органической или функциональной). Единичные гиалиновые цилиндры можно обнаружить у здоровых животных, при физической нагрузке, дегидратации, в концентрированной кислой моче. Появление одновременно в осадке мочи единичных гиалиновых и эпителиальных цилиндров указывает на наличие нефрита или нефроза у больного животного.

Восковые цилиндры имеют хорошо очерченный контур, прямые, реже извитые, с бухтообразными вдавлениями по бокам. Они образуются в канальцах с широким просветом, из уплотненных гиалиновых и зернистых цилиндров при задержке их в канальцах. При этом у животного отмечают значительную протеинурию. Осажденный белок в цилиндрах расположен более плотно, поэтому они имеют серовато-желтый цвет, похожий на цвет воска, с матовым блеском. Встречаются они при тяжелых заболеваниях почек с преимущественным поражением и перерождением эпителия канальцев, чаще при хронических процессах. Появление их расценивается как плохой прогностический признак.

Эпителиальные цилиндры. Эпителий при воспалительных и дегенеративных процессах в почечных канальцах слущивается, клетки концентрически наслаиваются друг на друга, образовывая столбики (цилиндры), иногда состоящие из нескольких слоев. Кроме того, очень часто клетки почечного эпителия оседают на поверхности гиалиновых цилиндров (рис. 7). При острых воспалительных процессах в почках эпителиальных цилиндров в моче, как правило, больше, чем при хронических заболеваниях.

Лейкоцитарные цилиндры представляют собой либо наслоение лейкоцитов на гиалиновые цилиндры, либо удлиненные конгломераты из лейкоцитов, склеенные фибрином, слизью или белком (рис. 8). Они появляются в моче при гнойных нефритах, пиелитах.

Рис. 7 Эпителиальные цилиндры. Рис. 8 Цилиндры из лейкоцитов, гиалиновые цилиндры с наслоением лейкоцитов, свободно лежащие лейкоциты, зернистые цилиндры эпителия мочевого пузыря.

Эритроцитарные цилиндры могут состоять из эритроцитов, цилиндрических сгустков крови, образовавшихся в мочевых канальцах и, наконец, эритроцитов, наслоившихся на гиалиновые цилиндры. При этом эритроциты могут быть хорошо сохранившимися и измененными. Появление эритроцитных цилиндров подтверждает почечное происхождение гематурии (гломерулонефрит, пиелонефрит).

Зернистые цилиндры - это короткие, толстые, изогнутые или прямые образования с наличием у многих из них поперечных перехватов, по которым они легко распадаются, образуя обломки. Эти цилиндры образуются при дегенеративном распаде клеточных цилиндров. По своей структуре они бывают крупно и мелкозернистыми. Зернистость может быть альбуминозной, жировой и липоидной природы (рис. 9). Первая выглядит тусклой, а две последних, особенно жировая, блестящие. Жировой характер включений можно определить, используя осьмиевую кислоту или окраску Суданом. Зернистость липоидного происхождения всегда является результатом перерождения. Появление таких цилиндров характерно для заболеваний, развивающихся медленно, но прогрессивно (нефроз, хронический интерстициальный нефрит). Обнаружение обеих форм двоякопреломляющей зернистости (жировая и липоидная) является плохим прогностическим признаком. Зернистые цилиндры встречаются при всех острых и хронических заболеваниях паренхимы почек, но не отражают формы данной болезни.

Ложные цилиндры - это массивные образования с глубокими перехватами по длине, состоящие из кристаллов или микроорганизмов, спаянных слизью или фибрином. Иногда их основу составляют эпителиальные или зернистые цилиндры, усыпанные по поверхности кристаллами выпадающих солей. У лошадей и крупного рогатого скота иногда можно встретить и в норме цилиндры из углекислого кальция, а у собак - из мочевой кислоты. Цилиндры из бактерий, зернистые, состоят из одинаковых, подвижных палочек и кокков, хорошо красятся анилиновыми красками. Присутствие большого количества этих цилиндров указывает на гнойное воспаление мочеиспускательного канала или общую инфекцию.

Слизь выделяется в виде небольшого облачка у всех животных, но особенно много слизи - с мочой лошадей. При катаральном состоянии мочевых путей количество слизи резко увеличивается (уретриты, простатиты, циститы). При значительном содержании слизь может принимать вид цилиндроидов, несколько похожих на гиалиновые цилиндры.

Цилиндроиды - это гомогенные, бесцветные, длинные ленты с продольной исчерченностыо, раздвоенными и расщепленными краями. Иногда они выходят за пределы ноля зрения микроскопа (рис. 10). Многие авторы считают цилиндроиды переходной формой к истинным цилиндрам. Они могут встречаться в моче здоровых животных (лошадей, крупного рогатого скота), в концентрированной моче у животных при катаральных заболеваниях нижних отделов мочевых путей. После прибавления уксусной кислоты очертания их становятся более выраженными, чем они н отличаются от гиалиновых цилиндров.

Рис. 9 Гиалиновые цилиндры с отложением на них жировых капелек и жиро- перерожденных клеток

Рис. 10 Цилиндроиды

Примеси секретов половых путей. При сперморее в моче можно обнаружить значительное количество сперматозоидов. У собак одиночные сперматозоиды могут встречаться в норме. В моче они довольно долго сохраняют свою форму, что и позволяет отличать их от других образований осадка (рис. 11).

Микроорганизмы в свежевзятой моче здоровых животных отсутствуют или находятся в небольшом количестве (при попадании из внешней среды и во время взятия) в количестве не более 50 000 в 1 мл (микрофлора переднего сегмента уретры). Бактериурмей считается обнаружение микроорганизмов в количестве более чем 100 000 в 1 мл (воспалительные заболевания почек и мочевыводящих путей). У сук количество бактерий от 10 000 до 100 000 в 1 мл может быть нормой. При исследовании мочи ориентировочным методом бактериурия отмечается описательно (кокковая, палочковая флора): много, умеренно, мало.

Перед взятием мочи наружные части половых органов тщательно очищаются, катетер и посуда стерилизуются. Рекомендуется мочу для микроскопических исследований собрать отдельными порциями в несколько сосудов. Дифференциация обнаруживаемых бактерий в моче производится обычными методами, применяемыми в бактериологии (окраска, посевы, заражение опытных животных). В моче чаще всего могут быть обнаружены следующие микроорганизмы: Staphylococcus intermidius, Proteus spp., Escherichia coli, Corynebacterium renale, Leptospira, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Btucella и паразиты: Trichomonas foetus, Dioctophyma renale, Capillaria plica.

Рис. 11 Сперматозоиды Рис. 12 Сарцины

Грибы (рис. 12-14). Наибольший интерес представляет обнаружение в моче грибов типа Candida - возбудителей кандидамикоза. Молодые клетки грибов этого типа имеют округлую или яйцевидную форму, диаметр их 2 -5 мкм, зрелые грибы вытянутой формы, длиной 16-20 мкм, располагаются в виде нитей (псевдомицелий). Эти грибы размножаются почкованием, почки располагаются чаще гроздьями в местах сочленения псевдомицелия.

Рис. 13. Дрожжевые грибы Рис. 14. Плесневые грибы

Дрожжевые грибы представляют собой гладкие, блестящие, сильно преломляющие свет овальные или круглые образования, располагающиеся раздельно, группами, цепочками (рис. 13). По величине и форме они похожи на эритроциты, а иногда напоминают лейкоциты. При размножении (путем почкования) на большой клетке лежат две или несколько маленьких клеток в виде почек. При обильном содержании дрожжевых грибов в моче можно подозревать глюкозурию.