Глава 3. Биологически активные соединения травы кипрея узколистного.

Цель: Идентифицировать биологически активные соединения травы кипрея узколистного.

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ:

3.1. Методика хроматографического определения аскорбиновой кис­лоты в траве кипрея узколистого .В ступке измельчают 0,5 г травы кипрея, заливают 5 мл воды, перемешивают, остав­ляют на 15 мин и фильтруют. Полученное извлечение наносят ка­пилляром на пластинку (один капилляр), рядом как свидетель на­носят чистую аскорбиновую кислоту; пластинку помещают в хрома-тографическуго камеру с системой растворителей этилацетат — ледяная уксусная кислота (80 : 20). Хроматографирование ведут ~ 20 мин (пробег растворителя ^13 см), после чего хроматограмму высушивают на воздухе.

Хроматограмму обрабатывают 0,04 % (или 0,001 н.) раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия в воде. Аскорбиновая кис­лота обнаруживается в виде белого пятна на розовом фоне.

Вывод:аскорбиновая кислота обнаружена.

3.2.Методика хроматографического определения каротиноидов в траве кипрея. 1 г измельченных плодов кипрея заливают 5 мл хлороформа в колбе вместимостью 25 мл, экстрагируют 1,5 ч, после чего фильтруют л полученное извлече­ние наносят капилляром на пластинку, рядом наносят свидетель — р-каротип. Пластинку помещают в камеру с системой растворите­лей цпклогексан — эфир (80 : 20). Хроматографирование ведут ^ 20 мин (пробег растворителя 13 см). После этого хромато­грамму высушивают на воздухе.

Затем хроматограмму обрабатывают 10%-ным раствором фосфор-номолибденовой кислоты в этиловом спирте. После прогревания пластинки при температуре 60—80 "С каротиноиды проявляются в виде пятен синего цвета на желто-зеленом фоне.

Вывод: каротиноиды обнаружены.

3.3.ФЛАВОНОИДЫ

3.3.1.Хроматограф и ческое определение. На круг­лый диск хроматографической бумаги на расстоянии 0,5 см от центра наносят исследуемые извлечения травы кипрея в качестве «свидетелей» — спирто­вые растворы рутина ч кверцетина. Диаметр пятна не должен пре­вышать 5 мм. В центр диска вводят фитиль из хроматографической бумаги.

3.3.2.Реакция с солями железа (III). С железа окисного хлоридом образуются комплексные соединения, окрашенные в черно-синий цвет, если флавоноиды – тригидроксипроизводные, и в зеленый - если дигидроксипроизводные.

3.3.3. Реакция с 2-5 % спиртовым раствором алюминия хлорида. Флавоноиды, имеющие две гидроксигруппы у С₃ и С₅, образуют хелатные комплексы за счет водородных связей, возникающих между карбонильной и гидроксильными группами и ионом алюминия, имеющие желтый цвет с желто-зеленой флуоресценцией.

3.3.4..Реакция с 1 % раствором основного свинца ацетата.

Антоцианидины дают синий аморфный осадок.

Флавоны, халконы и ауроны - осадки ярко-желтого цвета.

3.3.5. Реакция с 10 % спиртовым раствором щелочи. Флавоны, флавонолы, флаваноны и флаванонолы растворяются в щелочах с образованием фенолятов желтого цвета, при нагревании окраска изменяется до оранжевой или коричневой. Халконы и ауроны при взаимодействии со щелочами обычно дают красное или ярко-желтое окрашивание.

Антоцианидины образуют со щелочами соли от синего до оливково-зеленого цвета.

Вывод: флавоноиды обнаружены.

3.4.Дубильные вещества в растительном сырье определяют качест­венными реакциями, которые можно подразделить на две группы: реакции осаждения и Цветные реакции. Для проведения качествен­ных реакций из растительного сырья готовят водное извлечение.

Методики качественного определения. Приготовление извлече­ния. 1 г измельченного растительного сырья заливают 100 мл во­ды. Нагревают на водяной бане 20—30 мин, процеживают через вату и полученное извлечение используют для проведения качест­венных реакций.

Общие реакции осаждения – для обнаружения дубильных веществ в сырье:

3.4.1. Специфической реакцией является реакция осаждения желатином, используют 1 % раствор желатина на 10 % растворе натрия хлорида. Появляется хлопьевидный осадок или муть, исчезающие при добавлении избытка желатина. Отрицательная реакция с желатином свидетельствует об отсутствии дубильных веществ.

3.4.2. Реакция с солями алкалоидов, используют 1 % раствор хинина хлорида. Появляется аморфный осадок за счет образования водородных связей между гидроксильными группами дубильных веществ и атомами азота алкалоида.

Вывод: Дубильные вещества обнаружены.

3.5. АЛКАЛОИДЫ Методики качественного анализа. Приготовление из­влечения из растительного сырья;

А). I г измель­ченного растительного сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, заливают 25 мл 1%-ной HCL и нагревают на кипящей водя­ной бане в течение 5 мин. После охлаждении извлечение фильтруют через бумажный фильтр (извлечение А).

Б) 2 г измельченного растительного сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, добавляют 1 мл 10%-ного раствора аммиака и

20 мл хлороформа и оставляют на 1 ч при периодическом перемешивании. Хлоро­формное извлечение отфильтровывают че­рез вату в делительную воронку вмести­мостью 100 мл и алкалоиды извлекают 15 мл 1 %-ной НСL (извлечение Б).

Качественный реакции (общие реакции, реакции осаждения). Извлечение А или Б разливают в пробирки по 1 мл и в каж­дую пробирку осторожно, по каплям, до­бавляют соответствующий реактив на ал­калоиды. При наличии алкалоидов тотчас или через некоторое время должен обра­зоваться осадок.

Интенсивность осадка зависит как от количественного содержания алкалоидов, так и от чувствительности алкалоида к реактиву.

1. Реактив Майера. С большинством алкалоидов с слабокислых н нейтральных растворах этот реактив образует белый или желтоватый осадок. Чувствительность алкалоидов к этому реактиву весьма разли­чна: стрихнин и бруцин осаждаются в разведении 1 : 150 000, морфин— 1 125 000, а кофеин, колхицин реактив Майера не осаждает.

2.Реактивы Вагнера и Бушарда. С большинством алкалоидов в слабокислых растворах эти реактивы образуют бурые осадки.

3.Реактив Драгендорфа. Многие алкалоиды в кислых раство­рах дают оранжево-красные или кирпично-красные осадки.

4. Реактив Марме. С алкалоидами реактив Марме дает белые или желтоватые осадки, часто растворимые в избытке реактива. Чувствительность некоторых алкалоидов к этому реактиву неве­лика. Атропин, колхицин, вератрин и некоторые другие алкалоиды осаждаются из сравнительно концентрированных растворов, а ко­феин этим реактивом совсем не осаж-, дается.

5. Раствор танина. В подкислен-вых растворах алкалоиды дают с Ta­il .нином беловатые или желтоватые ||, аморфные осадки.

6. Раствор кремневольфрамовой (Кислоты. Большинство алкалоидов |;весьма чувствительны к этому реак­тиву и в слабокислых растворах Iобразуют беловатые осадки. I

7. Раствор фосфорномолибденовой | кислоты. Это один из наиболее чув­ствительных реактивов. С алкалои­дами он образует желтоватые осад­ки, которые приобретают через не­которое время синее или зеленое окрашивание вследствие восстанов­ления молибденовой кислоты.

8.Раствор фосфор новольфрамовой кислоты. Фосфоршвольфра- (йовая кислота со многими алкалоидами дает беловатые осадки.

9.Раствор пикриновой кислоты. Пикриновая кислота образует рядом алкалоидов осадки (пикраты) желтого цвета. Некоторые

акалоиды пикриновой кислотой не осаждаются (кофеин, морфин, аконитин, теобромин), другие же осаждаются только из концентри­рованных растворов (например, атропин).

10. Раствор пикролоновой кислоты. Со многими алкалоидами пикролоновая кислота дает желтые осадки (пикролонаты).

Выводы по главе

На основе проведенных химических исследований можно сделать вывод что в сырье кипрея узколистного присутствуют следующие соединения: аскорбиновая кислота, каратиноиды, дубильные вещества, флаваноиды, алкалоиды .

Общие выводы

Делая вывод, что кипрей узколистный это многолетние травянистое растение Семейство кипрейные — ONAGRACEAE имеющие в своем химическом составе аскорбиновую кислоту, каратиноиды, дубильные вещества, алкалоиды, флаваноиды.

Кипрей узколистный применяется при лечении в качестве обволакивающего средства при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, гастритах и колитах.

В ходе микроскопических исследований кипрея узколистного было обнаружены следующие диагностические признаки: клетки многоугольной формы с овальными устицами и простыми многоклеточными гусеницивидными волосками.

На основе проведенных химических исследований можно сделать вывод что в сырье кипрея узколистного присутствуют следующие соединения: дубильные вещества, флаваноиды,.

Cписок литературы

1. Государственная Фармакопея СССР XI издания. - М.: Медицина, 1987. - Вып. 1. - 336 с.

2. Государственная Фармакопея СССР XI издания. - М.: Медицина, 1989. - Вып.2 - 400 с.

3. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУВПО «СамГМУ», 2004. - 1200 с.

4. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: Учебное пособие / Под ред. Г.П.Яковлева и К.Ф. Блиновой. - СПб.: СпецЛит, 2004. - 765 с.

5. Лекарственные растения Государственной фармакопеи. Фармакогнозия ч.2 / Под. ред. И.А.Самылиной, В.А.Северцева. - М.: «АНМИ», 2003, 534 с.

6. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи. Фармакогнозия. ч.1 / Под. ред. И.А. Самылиной., В.А.Северцева. - М.: «АНМИ», 2001 - 488 с.

7. Муравьева Д.А. Фармакогнозия: Учебник / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. - М.: Медицина, 2002. - 656с.

8. Особенности заготовки и анализа дальневосточных видов сырья: Методические рекомендации для самостоятельной работы студентов очного и заочного отделения фармацевтического факультета. - Хабаровск, 2003 - 44с.

9. Правила сбора и сушки лекарственных растений: Сборник инструкций. - М.: Медицина, 1997. - 275с.

10. Практикум по фармакогнозии: Учеб. пособие для вузов / В.Н.Ковалев, Н.В.Попова, В.С. Кисличенко и др.; Под общ. ред. В.Н.Ковалева. - Харьков: Изд-во НфаУ: Золотые страницы: МТК - Книга, 2004. - 512 с.

11. Растения для нас: Справочное издание / Блинова К.Ф., Вандышев В.В., Комаров М.Н. и др./ Под ред. Г.П.Яковлева и К.Ф.Блинова. - СПб.: Учебная книга, 1996 - 653с.

12. Фармакогнозия. Атлас: Учебное пособие / Под ред. проф. Н.И.Гринкевич, Е.Я.Ладыгиной. - М.: Медицина, 1989 - 512с.

13. Фруентов Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока./ Н.К. Фруентов - Хабаровск, 1987 - Изд-е 3-е, рас, доп. - 352 с.

14. Химический анализ лекарственных растений / Под ред. Проф. Н.И. Гринкевич. - М.: Медицина, 1983. - 176с.

15. Губанов И. А. и др. 1097. Lycopus europaeus L. — Зюзник европейский // Иллюстрированный определитель растений Средней России. В 3 т. — М.: Т-во науч. изд. КМК, Ин-т технолог. иссл., 2004. — Т. 3. Покрытосеменные (двудольные: раздельнолепестные). — С. 130.

16. http://www.alfit.ru/fitosbor-alfit-21-sedativnyij.html

17. http://samsebelekar.ru/index/zjuznik_evropejskij/0-621