4. Иммунитет

Постинфекционный иммунитет: антитоксический – напряженный – обусловлен высоким уровнем антител к токсинам в сыворотке крови; антитела к бактериям – агглютинины, преципитины и другие – не обладают протективными свойствами; поствакцинальный – антитоксический.

5. Лабораторная диагностика

Исследуемый материал:

Слизь из зева, носоглотки, соскоб с конъюнктивы, фрагменты фибринозной пленки.

Методы диагностики:

1. Экспресс-диагностика

ПЦР, ИФА.

2. Микроскопический метод

Диагностически значим, благодаря характерной морфологии и расположению возбудителей в исследуемом материале. Небольшие палочки с булавовидными утолщениями на концах, где располагаются метахроматические включениями полифосфатной природы, превышающие поперечный размер клеток (зерна волютина). Располагаются под углом друг к другу в виде римских пятерок (V), в отличие от ложнодифтерийных бактерий и дифтероидов, у которых зерна волютина не располагаются по полюсам палочки, а сами бактерии располагаются в виде частокола или спичек в коробке. Зерна волютина выявляются при окраске уксуснокислой синькой, которая окрашивает только включения, не затрагивая цитоплазму (метод Нейссера – желто-коричневая цитоплазма и синие зерна волютина; метод Леффлера – голубая цитоплазма и темно-синие зерна волютина). Используется люминисцентная микроскопия с окраской корифосфином. При этом зерна волютина дают красное свечение, цитоплазма – зеленое.

3. Бактериологический метод

Является основным. Ставится с целью определения токсигенности штамма.

Iэтап: посев исследуемого материала на плотные питательные среды:

кровяной агар с теллуритом калия: коринебактерии дифтерии способны восстанавливать теллурит калия до металлического теллура, образуют два типа колоний: биовар gravis– темно-серого цвета в виде цветков маргаритки и биоварmitis– черные, мелкие, гладкие, блестящие, биоварintermediusвстречается редко;

среда Бучина (хинозольная среда, дифференциально-диагностическая) – коринебактерии дифтерии образуют колонии ярко-синего цвета, ложнодифтерийные бактерии и дифтероиды – бледно-голубые или бесцветные.

IIэтап: изучение колоний, выросших на плотных питательных средах; пересев материала колоний на скошенный агар (среда Ру – свернутая лошадиная сыворотка) для выделения чистой культуры бактерий.

IIIэтап: идентификация чистой культуры бактерий:

• по биохимическим свойствам: определение сахаролитических ферментов, проба Пизу (на цистиназу), проба Закса (на уреазу);

• по антигеннным свойствам: РА с противодифтерийной сывороткой;

• определение токсигенности штамма: РП в геле с антитоксической противодифтерийной сывороткой.

4. Серологический метод

Проводится для определения напряженности иммунитета (для решения вопроса о ревакцинации) – РПГА (если реакция идет в титре 1:50 – антитоксический иммунитет напряженный; если 1:10, 1:20 – антитоксический иммунитет ненапряженный, необходима ревакцинация).

5. Метод кожно-иммунологических проб

Проводится для определения напряженности антитоксического иммунитета (для решения вопроса ревакцинации). Проба Шика (в основе лежит гиперчуствительность немедленного типа – антителзависимая). Используется токсин Шика (гистотоксин). Токсин Шика вводится в кожу предплечья, учет пробы по диаметру зоны гиперемии и отека: менее 2 см – антитоксический иммунитет напряженный; более 2 см – антитоксический иммунитет ненапряженный (необходима ревакцинация).