Биологические исследования

Для постановки теста нейтрализации используют видовые диагностические антитоксические сыворотки, центрифугат (фильтраты) бульонных культур и белых мышей массой 16-18 г. В 6 пробирок вносят по 0,9 мл центрифугату, затем в 5 из них добавляют по 0,6 мл антитоксических сывороток к основным видам возбудителей. В 6-в пробирку вносят 0,6 мл изотонического раствора хлорида натрия (контроль). Смеси выдерживают в термостате в течение 40 мин и каждую из них в объеме 0,5 мл вводят двум мышам. Видовую принадлежность культуры (токсина) определяют за мышами, выживших при гибели животных контрольной и других исследовательских групп. В лабораториях, где есть возможности работать с культурами тканей, реакцию нейтрализации ставят на трипсинизованих клетках 10-12 дневных куриных эмбрионов. Токсигенность можно определить еще на этапе роста изолированных колоний. Для этого колонию эмульгируют на стекле в капле акридинового оранжевого, накрывают покровным стеклом и исследуют под люминесцентным микроскопом. Наличие только зеленых палочек свидетельствует об их токсигенность. Красные или зеленые с красными фрагментами бактерии проявляют при слабой продукции токсинов или при полном их отсутствии. Можно установить вид и тип токсина в реакции преципитации на стекле в агаровом геле с фильтратом и соответствующие антисыворотки в реакции торможения in vitro специфическими антителами лецитиназной или лейкотоксичнои активности фильтратов или раневых экссудатов. Еще быстрее и точнее устанавливают виды возбудителей газовой гангрены с помощью газовой хроматографии, которая позволяет определять их по качественным и количественным содержанием насыщенных и ненасыщенных жирных кислот.

Диагностика пищевых токсикоинфекций

Диагностику пищевых токсикоинфекций, вызванных С. perfringens типа А и С, проводят с помощью бактериологического исследования с целью выделения возбудителя, определение массивности контаминации ним пищевых продуктов и типа токсинов. Выделение чистых культур проводят так же, как и при анаэробной газовой инфекции (посев материала на среды Цейслера, Уиллиса-ХОБСМЭ или в трубки Виньяль-Вейона, получения изолированных колоний, чистых культур, идентификация). При этом обязательно сиютьИО мл крови больного в 150-200 мл среды Китт-Тароцци с целью выделения С. perfringens. С фильтратом культуры важно поставить реакцию нейтрализации на мышах для определения типа экзотоксина. Важно провести и количественный микробиологический анализ. Для этого исследуемый материал разводят в пептонной воде с 10 по 1010 и по I мл каждого разведения засевают в растопленное и охлажденное до 45 ° С среду Вильсона-Блера. Через 6-8 ч инкубации при температуре 45-46 ° С (или 20 ч при 37 ° С) отбирают те пробы, в которых выросло 10-30 колоний, и вычисляют количество бактерий в 1 мл посевного материала, учитывая степень разведения и посевную дозу . Для быстрого обнаружения С. perfringens исследуемый материал сеют в пробирку с лакмусовой молоком. Через 4-5 ч происходит характерно образование губчатого сгустка и просветление сыворотки. Диагноз пищевой токсикоинфекции устанавливают тогда, когда обнаруживают значительное обсеменение (106 и более в 1 г) тех продуктов, которые вызвали заболевание, выделяют С. pergringens типов А и С и соответствующие экзотоксины, или высевают из крови больного G perfringens любого серотипа ( А, В, С, D, Е, F).