Детекция в формате FLASH
•Вариант детекции «по конечной
точке»
•Аналитический сигнал – прирост
флуоресценции после окончания реакции
Детекция продуктов ПЦР в режиме реального времени
Технология TaqMan
Q
3’
5’
Q
3’
5’
R
5’
R
RTaq
R
3’ |
5’ |
3’
5’
3’
5’
Taq
5’
Taq
5’
Q |
Taq |
|
3’ |
||
|
R
Q
3’
R 
Q
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
Накопление продукта амплификации
Цикл 1 |
Цикл 2 |
|
|
2 |
Цикл 3 |
||
4 |
|||
|
8 |
||
|
|
||
|
|
Цикл 4 |
|
|
|
16 |
число ампликонов = N (число 2 циклов)
«Пороговый цикл» Ct
Пороговый цикл Сt – значение цикла амплификации, на котором флуоресценция зонда превысила значение фоновой флуоресценции
«Пороговый цикл»
Чем больше значение Ct, тем меньше концентрация исходной НК
Наибольшее
количество
Наименьшее
количество
Многоканальная детекция и мультиплексный анализ
Мультиплексирование: возможность исследовать нескол одновременно
FAM |
ROX |
CY5 |
ВКО |
C.trachomatis |
N.gonorrhoeae |
Две (или более) разные мишени в одной и той же пробе могут быть одновременно выявлены в одном анализе с помощью зондов с разными красителями !
АМПЛИФИКАТОРЫ
Stratagene Mx3005
Cobas TaqMan |
iQ 5 |
CFX 96 |
ДТ-96
АНК-32
SmartCycler II |
Rotorgene 6000 |
One Step Plus |
|
АВТОМАТИЧЕСКАЯ СТАНЦИЯ Tecan Freedom EVO
TECAN Freedom EVO 150, 8 каналов дозирования