uchebnik

201

202

Вирус гепатита В не размножается в культурах тканей, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных. Он патогенен для человекообразных обезьян.

Эпидемиология и патогенез гепатита В.

Источник инфекции - больной и вирусоноситель.

Эпидемиология гепатита В характеризуется отсутствием сезонности заболевания, высокой частотой вирусоносительства как основного резервуара вируса в природе, наличием групп лиц с высоким риском заболеваемости (персонал медицинских учреждений, лица, отбывающие на длительный срок в страны Африки, Южной Америки, Среднего и Дальнего Востока, наркоманы, лица с заболеваниями крови, пациенты, подвергавшиеся гемотрансфузии, оперативным вмешательствам).

Для вирусного гепатита В характерны следующие пути передачи: парентеральный, половой, вертикальный (внутриутробно от матери к ребенку), но необходимо отметить, что вирус гепатита В может также выделяться с биологическими жидкостями - слюной (при поцелуе, укусе), потом, слезами и грудным молоком.

Инкубационный период гепатита В колеблется от 3 до 6 месяцев. Заболевание характеризуется постепенным началом. Клинические проявления обусловлены повреждением печеночных клеток. Оно является иммунообусловленным, т.к. связано не с цитопатическим действием вируса, а с цитотоксическим действием Т-киллеров, узнающих и атакующих мембраны инфицированных клеток, на которых содержатся антигены вируса.

Гепатит В протекает более тяжело, чем гепатит А. У 10% больных он переходит в хронические формы. Эти люди длительно, иногда годами являются носителями HBs-АГ и основными источниками инфекции. На фоне хронических форм возможно последующее развитие цирроза и первичного рака печени.

Впораженных клетках возможны 2 пути репродукции вируса: репликация

иинтеграция. При репликации ДНК - полимераза вируса достраивает дефектную нить ДНК, обеспечивает процесс ее удвоения. На матрице ДНК образуются и-РНК, которые идут на рибосомы и обеспечивают синтез всех вирусных компонентов. Геномы вируса и клетки автономны, и возможна полная элиминация вируса из организма. При интеграции происходит встраивание генома вируса в клеточный геном. После этого его генетическая информация может реализоваться полностью или частично. В частности, активно синтезируется HBs-AГ. В эту фазу элиминация вируса невозможна.

Наряду с продуктивным типом взаимодействия с клетками, при котором идут процессы репликации ДНК вируса, образования на ее матрице и-РНК и синтеза белков вируса, у этого вируса возможен и иной механизм взаимодействия с гепатоцитами. Он состоит в образовании на матрице вирусной ДНК прегеномной РНК, не выполняющей функции и-РНК, а служащей матрицей для синтеза с участием обратной транскриптазы ДНК-транскрипта.

203

Этот ДНК-транскрипт интегрирует в ДНК клетки и обуславливает вирус индуцированную трансформацию и раковое перерождение клеток печени.

Микробиологическая диагностика гепатита В.

Микробиологическая диагностика вирусного гепатита В основана на выявлении специфических антигенов и антител в крови обследуемого методом

иммуноферментного анализа.

Определяющим является обнаружение HВs-АГ, который выявляется в сыворотке больных через 3-5 недель с момента инфицирования, и сохраняется в течении всей болезни. Его наличие после 6 месяцев является показателем хронического заболевания, в более поздние сроки на фоне клинического здоровья - носительства. При полном выздоровлении HВs-АГ исчезает.

Показателем острой инфекции является одновременное обнаружение в сыворотке HВs- и HВе-антигенов, появление которых обусловлено активной репродукцией вируса.

По наличию антител к тем или иным антигенам вируса можно судить о периоде заболевания. В разные сроки болезни выявляют антитела к HBc, HBe-, HBsантигенам классов иммуноглобулинов M и G.

Обычно для целей иммуноиндикации и серодиагностики используют тест-системы для ИФА.

Специфическая профилактика гепатита В.

Специфическая профилактика проводится генно-инженерной вакциной Энджерикс В, иммунитет после вакцинации сохраняется в течение 3-5 лет. Вакцинации подлежат дети, а также лица группы риска - медицинские работники (хирурги, акушеры, врачи-лаборанты).

Гепатит D.

Возбудителем гепатита D является дельта-вирус (Hepatitis delta virus), который в настоящее время не классифицирован. Этот вирус рассматривают как сателлит вируса гепатита В. Он представляет собой дефектный РНК-вирус величиной 35-37 нм. Вирион имеет однотитевую РНК, покрытую внешней оболочкой. Антигены вируса - это внутренние белки оболочки (D-антиген) и HВs-АГ вируса гепатита В, который также содержится в оболочке вируса. Этот вирус не способен к самостоятельной репликации в организме хозяина, так как синтез белков его внешней оболочки обеспечивает вирус гепатита В. Таким образом, гепатит D развивается только при одновременном инфицировании вирусом гепатита В и дельта-вирусом и может протекать в виде суперинфекции или коинфекции.

Эпидемиология и патогенез гепатита D.

Вирус гепатита D является высокопатогенным гепатотропным агентом и обладает прямым цитопатическим действием на клетки печени. Присоединение дельта-инфекции у больных гепатитом В ведет к развитию тяжелых форм патологического процесса и переходу острого гепатита в хронический.

Передается вирус гепатита D парентеральным путем.

204

Микробиологическая диагностика гепатита D.

Микробиологическая диагностика гепатита D основана на обнаружении антител к D-АГ дельта-вируса в сыворотке крови больного c помощью метода иммуноферментного анализа (серологическое исследование).

Первый маркер инфекции - вирусспецифические антитела класса IgM. Они появляются на 10-15 день болезни. Через 4-11 недель их сменяют антитела класса IgG, постоянно циркулирующие у инфицированных лиц.

Также в микробиологической диагностике гепатита D используют ПЦР или метод молекулярной гибридизации для выявления вирусной нуклеиновой кислоты.

Средства специфической иммунопрофилактики не разработаны.

Гепатит С.

Возбудителем гепатита С является вирус, относящийся к семейству Flaviviridae, роду Hepavirus. Его вирион сферической формы, диаметром 35-65 нм, содержит однонитевую плюс-нить РНК, геномные ферменты, участвующие в репликации вируса, и имеет суперкапсидную облочку. В составе вирусной частицы присутствуют ядерный - капсидный (С) - и поверхностный - суперкапсидный (E1, E2) гликопротеиновые антигены.

Эпидемиология и патогенез гепатита С.

Гепатит С распространен повсеместно. Основной путь заражения - парентеральный. Для заражения необходима большая инфицирующая доза, чем при гепатите В. Инкубационный период от 2 до 26 недель.

Для гепатита С характерны высокая частота безжелтушных форм (до 75%) и более легкое течение, чем для гепатита В. Но в 20-50% случаев заболевание переходит в хроническое с последующим развитием цирроза печени и первичной гепатокарциномы. Редко встречаются молниеносные (фульминантные) формы гепатита.

Микробиологическая диагностика.

Основной метод микробиологической диагностики - иммуноиндикация и серологическое исследование (ИФА). Выявление антигенов вируса возможно в ранние сроки болезни, а антител к вирусу - в сравнительно поздние сроки заболевания.

Специфическая профилактика гепатита С не разработана.

Гепатиты F и G.

В последнее время появились сообщения о существовани гепатита F с парентеральным путем заражения. В фекалиях таких больных обнаруживались вирусные частицы размером 27-37 нм, но пока этиологическая значимость этого факта в развитии особой формы гепатита не доказана. Отмечены случаи выявления у больных гепатитами вирусов, относящихся к семейству Flaviridae. Их обозначают как вирусы GB трех разновидностей (GB-A, GB-B и GB-C). Для этих гепатитов характерны как фульминантные, так и хронические формы с

205

длительной (до 8 лет) персистенцией вирусов. По-видимому, частота G- вирусной инфекции выше, чем гепатита С. Вирус G обладает гепато- и лимфотропностью. Часто наблюдается двойная инфекция вирусами гепатитов С и G.

Вероятно, список вирусов, вызывающих поражения печени, в ближайшем будущем будет продолжен.

В заключении приведем таблицу (9), в которой представлены основные характеристики вирусов гепатитов человека.

206

Таблица 9

Сравнительная характеристика вирусов гепатита человека.

208

Часть четвертая

ПРАКТИКУМ ПО ОБЩЕЙ И ЧАСТНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ.

Занятие 1. Тема: Морфология бактерий и методы ее изучения. Стерилизация, контроль ее эффективности.

Изучение морфологии микроорганизмов является одним из важных элементов микробиологической диагностики. Оно проводится путем микроскопии окрашенных (реже нативных) препаратов.

Основные методы микроскопии: 1. световая

1.1.иммерсионная

1.2.фазовоконтрастная

1.3.темнопольная

1.4.люминесцентная 2. электронная

Для окраски микроорганизмов используют водные, спиртовые,

карболовые растворы анилиновых красителей (фуксин, метиленовая синь, генциан-виолет, бриллиантовый зеленый, азур-эозин и др.). Существуют простые (используется один краситель) и сложные (используется несколько красителей) методы окраски. При микроскопии препаратов можно получить информацию о форме, величине, расположении микроорганизмов, наличии спор, капсул, включений и др. Основным методом окраски бактерий является метод Грама. Это сложная дифференциальная окраска. По отношению к окраске по Граму (тинкториальные свойства) все бактерии делятся на грамположительные (окрашиваются в фиолетовый цвет) и грамотрицательные (окрашиваются в розовый цвет). Отношение бактерий к окраске по Граму определяется строением их клеточной стенки. Существуют специальные методы для окраски капсул (Гинса), спор (Клейна, Ожешко), волютина (Нейссера), нуклеоида (Фельгена), кислотоуслойчивых бактерий (Циля-Нильсена). Широко используется метод дифференциальной окраски по Романовскому-Гимза.

Для приготовления препаратов для микроскопии из исследуемого материала готовят мазки. Мазки бывают нативные и фиксированные.

Алгоритм приготовления нативного мазка.

Подготовка предметного и покровного стекла. Нанесение исследуемого материала на предметное стекло. Наложение покровного стекла.

Нативный мазок может содержать заразный материал. Он подлежит немедленному микроскопическому исследованию.

Алгоритм приготовления фиксированного мазка.

210

Подготовка предметного стекла. Нанесение исследуемого материала. Высушивание.

Фиксация.

Готовый мазок имеет вид матового налета на стекле. После фиксации он не содержит заразного материала и может храниться достаточно долго. Окрашенный мазок - это препарат.

Задание:

Изучить методом иммерсионной микроскопии готовые препараты из чистых культур палочковидных, круглых и извитых форм бактерий, мазки окрашенные на споры и капсулы.

Приготовить мазки из смеси бактерий, окрасить их по Граму и промикроскопировать.

Приготовить нативный мазок из взвеси кишечных палочек и просмотреть его методом фазовоконтрастной микроскопии.

Стерилизация.

Стерилизация - один из важнейших участков работы микробиологической лаборатории. Стерилизация - это полное обеспложивание объекта. В микробиологической лаборатории стерилизации подлежат питательные среды, используемые растворы, посуда, инструменты и иной рабочий материал. Стерилизация используется для обеззараживания (убивки) заразного материала.

Методы стерилизации.

1. Физические. 1.1. Температура.

1.1.1.Прокаливание (горелка).

1.1.2.Сухой жар (печь Пастера).

1.1.3.Текучий пар (автоклав).

1.1.4.Пар под давлением (автоклав). 1.2. Радиация.

1.2.1.УФ-облучение (УФ-облучатели).

1.2.2.γ-облучение (источник γ-излучения). 2. Механические.

2.1. Фильтрование (бактериальные фильтры). 3. Химические.

3.1. Использование дезинфицирующих средств.

Контроль качества стерилизации осуществляется постоянно, в

соответствии с нормативными документами. Принципы контроля:

Использование температурных индикаторов (веществ с известной температурой плавления, изменения окраски);

Проведение бактериологического (вирусологического) исследования материала, прошедшего стерилизацию.