5.3. Принцип постановки и учет результатов реакции непрямой гемаглютинации (рнга), поставленной с целью серологической диагностики.

Суть реакции непрямой гемаглютинации заключается в том, что эритроциты, на поверхности которых адсорбируются растворимые антигены, приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с антителами, специфическими к адсорбированному антигену. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называются эритроцитарными диагностикумами. Чаще всего используют эритроциты барана, которым свойственная высокая адсорбирующая активность. Реакцию ставят по такой схеме: в пробирках или лунках прогретую на протяжении 30 мин. при 58⁰С исследуемую сыворотку разводят последовательно от 1:10 до 1:320 в объеме 0,25 мл и добавляют по 2 капли эритроцитарного диагностикума. Реакцию сопровождают контролями: на спонтанную агглютинацию сенсибилизированных эритроцитов, контроль с нормальными эритроцитами, а также контроли диагностикумов с заведомо положительной и отрицательной сыворотками. После легкого встряхивания пробирки или лунки выдерживают в термостате 30-45 мин. при 37⁰С. Учет результатов реакции осуществляют после выпадения в осадок эритроцитов в соответствующих контрольных пробирках. Достоверными результатами следует считать отсутствие гемагглютинации в контролях с нормальными, сенсибилизированными эритроцитами, с заведомо негативной сывороткой и наличие гемагглютинации с заведомо положительной сывороткой. Гемаглютинация в опытных пробирках при соответствующих контролях свидетельствует о наличии специфических антител в исследуемой сыворотке. Результаты оценивают по внешнему виду осадка эритроцитов в лунках. В положительном случае (+) эритроциты равномерно в виде "зонтика" покрывают почти все дно пробирки или лунки. При отрицательном результате (-) эритроциты оседают в форме компактного комочка - "пуговицы".

5.4. Постановка реакции иммунного гемолиза.

Иммунный лизис - это растворение клеток (антигенов) под действием специфических антител (лизинов) в присутствии комплемента. В зависимости от антигенов, которые участвуют в реакции лизиса, она получила название бактериолиза, спирохетолиза, гемолиза и тому подобное. Чаще всего используется в лабораторной практике реакция гемолиза как индикаторная система в реакции связывания комплемента. Для постановки реакции нужны: 1) антиген - 3% суспензия эритроцитов; 2) антитело - гемолитическая сыворотка против эритроцитов барана; 3) комплемент - сыворотка морской свинки, разведенная 1:10; 4) изотонический раствор хлорида натрия.

СХЕМА ПОСТАНОВКИ ОСНОВНОГО ОПЫТА РЕАКЦИИ ГЕМОЛИЗА

№ пробирок Ингредиенты (в мл)	Опыт	Контроли
	1	2	3	4
Антитело - гемолитическая сыворотка	0,5	---	0,5	---
Антиген - 3% взвесь эритроцитов барана	0,5	0,5	0,5	0,5
Комплемент (1:10)	0,5	0,5	---	---
Физраствор	---	0,5	0,5	1,0

Все пробирки ставят в термостат на 30-45 минут при 37⁰С, после чего проводят учет реакции. В данном случае в опытной пробирке должен наступить гемолиз в результате специфической реакции между гемолитической сывороткой и эритроцитами в присутствии комплемента. В контрольных пробирках не должно быть гемолиза, потому что в одной из них отсутствует комплемент (контроль гемолитической сыворотки), во второй отсутствует гемолитическая сыворотка (контроль комплемента), а в третьей отсутствуют комплемент и гемолитическая сыворотка (контроль эритроцитов).

5. Вопросы для самоконтроля

• Что означают понятия "серологическая идентификация возбудителя заболевания" и "серологическая диагностика инфекционного заболевания"?

• Как классифицируют серологические реакции?

• Что представляют собой и как получают стандартные диагностикумы?

• Какие серологические реакции являются многокомпонентными?

• Что такое система комплемента? Каковы пути ее активации?

• Что такое реакции иммунного лизиса?

• Что такое реакция иммунного гемолиза? Какова цель ее использования?

• Что такое реакция непрямой гемагглютинации? Какова цель ее использования?